Слабая дисплазия плоского эпителия: причины, симптомы, диагностика и методы лечения на сайте «Альфа-Центр Здоровья»

¹ Медицинский колледж Морсани Университета Южной Флориды, Тампа, Флорида;

² Больница Джеймса А. Хейли VA, Тампа, Флорида

В США аденокарцинома пищевода представляет собой подавляющее большинство случаев рака пищевода.Эта форма рака, которой, вероятно, предшествовала дисплазия Барретта, обычно возникает в дистальных отделах пищевода. Гораздо реже плоскоклеточный рак развивается в средней и верхней части пищевода и все чаще ассоциируется с вирусом папилломы человека (ВПЧ). Мы представляем необычный случай плоской интраэпителиальной неоплазии высокой степени, обнаруженной на стыке GE у пациента с дисплазией пищевода Барретта в анамнезе, который ранее лечился с помощью радиочастотной абляции (РЧА). 70-летний мужчина с историей пищевода Барретта с 1990 года, гранулярно-клеточной опухолью дистального отдела пищевода, удаленной в 2013 году, и РЧА дистального отдела пищевода в апреле 2015 года с последующими стриктурами, представленными на ФГДС с расширением.Было отмечено, что сужение в соединении GE было стабильным по результатам предыдущих эндоскопий, а дилатация была выполнена с хорошим результирующим разрывом слизистой оболочки. Соединение GE было рыхлым и узловатым, и была проведена биопсия. При патологии были выявлены фрагменты пищевода Барретта без дисплазии, но, кроме того, на плоской слизистой оболочке наблюдалась гиперплазия и выраженная цитологическая атипия и койлоцитарные изменения с выраженным острым воспалением. Ki-67 показал окрашивание ядер по всей толщине диспластического плоского эпителия, в то время как окрашивание p53 было редким и слабым.p16 показал положительный результат, подобный блоку, а иммуногистохимическое окрашивание на ВПЧ показало положительное ядерное окрашивание диспластического плоского эпителия. Эти данные указывают на диагноз: ВПЧ-положительная плоскоклеточная интраэпителиальная неоплазия высокой степени. ЭУЗИ подтвердило, что поражение ограничено слизистой оболочкой и никаких подозрительных соседних лимфатических узлов не отмечено. В настоящее время пациенту назначена ФГДС с повторной биопсией по сравнению с эндоскопической резекцией слизистой оболочки. Этот случай представляет собой уникальное проявление плоской интраэпителиальной неоплазии.Поражение возникает не только в дистальном отделе пищевода, но и у пациента с предшествующим заболеванием пищевода Барретта, получавшим РЧА. Это ставит под вопрос, может ли предшествующее лечение РЧА способствовать плоскоклеточной дисплазии. Это также демонстрирует важность наблюдения после РЧА с тщательным эндоскопическим обследованием и при необходимости прицельной биопсией дистального отдела пищевода.

ВПЧ, дисплазия шейки матки и рак шейки матки | CATIE

Резюме

Дисплазия шейки матки — это аномальное изменение клеток шейки матки.Ранние изменения, называемые врачами низкосортными поражениями, могут сохраняться и перерасти в высокозлокачественные поражения, которые могут привести к раку шейки матки. Незначительно аномальные клетки шейки матки обычно исчезают сами по себе. И дисплазию шейки матки, и рак шейки матки можно лучше всего лечить, если они обнаружены на ранней стадии. Вирус, передающийся половым путем, называемый ВПЧ (вирус папилломы человека), вызывает большинство дисплазий шейки матки и все виды рака шейки матки. Дисплазия шейки матки часто встречается у ВИЧ-инфицированных людей с шейкой матки. Однако среди ВИЧ-положительных людей, живущих в странах с высоким уровнем дохода и получающих регулярное гинекологическое наблюдение и уход, рак шейки матки встречается нечасто.

Слова, которые мы здесь используем — CATIE стремится использовать язык, который подходит каждому. Люди используют разные термины для описания своих гениталий. В этом тексте для описания гениталий используются медицинские термины, такие как влагалище и пенис. Цисгендеры ^и человек часто могут идентифицировать себя с этими терминами. Некоторые трансгендеры ⁱⁱ могут использовать другие термины, например, переднее отверстие и без бретелек. CATIE признает и уважает то, что люди используют слова, которые им наиболее удобны.

Ключевые сообщения о ВПЧ для клиентов доступны здесь.

Дисплазия и рак шейки матки

Шейка матки — это отверстие матки (матки), которое ведет во влагалище. Шейку матки можно нащупать кончиком пальца во влагалище.

При дисплазии шейки матки аномальные клетки развиваются на поверхности шейки матки. Эти аномальные клетки называются повреждениями. Поражения при дисплазии шейки матки могут регрессировать, (что означает, что они уменьшаются и могут даже исчезнуть), сохраняться (поражения остаются, но не изменяются) или прогрессируют до , превращаясь в высокосортное поражение или рак шейки матки.

Рак шейки матки — это аномальный рост клеток шейки матки. Через несколько лет аномальные поражения шейки матки могут постепенно перерасти в рак. ^1–3

Что вызывает дисплазию и рак шейки матки?

Дисплазия и рак шейки матки связаны с очень распространенным вирусом, который называется вирусом папилломы человека (ВПЧ). Существует более 100 штаммов ВПЧ, около 40 из которых могут передаваться половым путем. Некоторые штаммы вызывают бородавки, в том числе остроконечные кондиломы (аномальные разрастания на коже), некоторые приводят к раку гениталий или ануса, кишечника или легких, горла и рта.Некоторые из них не имеют известного эффекта.

Иммунная система помогает защитить от развития дисплазии шейки матки и рака. Люди, чья иммунная система ослаблена лекарствами для трансплантации или такими заболеваниями, как ВИЧ, подвергаются большему риску заражения ВПЧ, дисплазии шейки матки и рака шейки матки. Женщины и трансгендерные мужчины, инфицированные ВИЧ, подвергаются более высокому риску, и этот риск, по-видимому, увеличивается по мере снижения числа CD4.

Хотя ВПЧ необходим для рака шейки матки, другие факторы способствуют развитию дисплазии шейки матки и рака.С этим состоянием связано курение сигарет. Вызывающие рак химические вещества в сигаретном дыме концентрируются в жидкостях шейки матки, и они могут повлиять на здоровье клеток шейки матки, увеличивая риск того, что эти клетки станут ненормальными. Наличие в прошлом инфекции, передаваемой половым путем (ИППП), многократная беременность или неправильное питание также могут увеличить риск дисплазии шейки матки и рака. Поскольку ВПЧ передается половым путем, наличие нескольких сексуальных партнеров увеличивает риск контакта человека с этим вирусом.Однако даже люди, у которых мало партнеров, по-прежнему подвержены риску заражения ВПЧ. ^3–6

Симптомы

Обычно симптомы дисплазии шейки матки отсутствуют. Остроконечные кондиломы являются признаком того, что кто-то подвергся воздействию определенных типов ВПЧ, которые отличаются от типов, которые с наибольшей вероятностью могут привести к дисплазии шейки матки и раку. Важно отметить, что люди могут быть заражены ВПЧ и не иметь остроконечных кондилом или каких-либо других симптомов.

Точно так же часто отсутствуют физические симптомы рака шейки матки, особенно на ранних стадиях.На поздних стадиях рака шейки матки может наблюдаться боль в животе или пояснице, боль или кровотечение при вагинальном половом акте, необычные выделения из влагалища или кровотечение между менструациями. ^2,3

Диагностика — мазки Папаниколау и кольпоскопия

Регулярные осмотры органов малого таза, включая мазки Папаниколау и ВПЧ, могут помочь диагностировать или контролировать ВПЧ, дисплазию шейки матки или рак. Чтобы сделать мазок Папаниколау, врач вводит крошечную щеточку и небольшой деревянный шпатель во влагалище и проводит ими по шейке матки, чтобы освободить и собрать клетки.Клетки размазывают на предметном стекле, которое отправляют в лабораторию для исследования. Пап-тест помогает выявить аномальные клетки. Людям с ВИЧ тесты Папаниколау обычно проводятся дважды в течение первого года после постановки диагноза ВИЧ, а затем один раз в год, если первые два теста показали нормальные результаты. Тем не менее, многие врачи с ВИЧ-положительными людьми на их лечении рекомендуют делать мазок Папаниколау каждые шесть месяцев.

Хотя мазки Папаниколау полезны, они могут давать «ложноотрицательные» результаты. Другими словами, лаборатория может сообщить результат теста как «нормальный», если действительно есть изменения в клетках шейки матки.Это причина того, что тестирование на ВПЧ все чаще используется в дополнение к Пап-тестам. Для тестирования на ВПЧ врачи могут собрать небольшое количество жидкости из шейки матки и проверить ее на наличие ВПЧ.

Многие врачи рекомендуют людям с шейкой матки, у которых недавно был диагностирован ВИЧ, пройти кольпоскопию. Кольпоскоп — это микроскоп, который изучает влагалище, открытое зеркалом, и позволяет врачу визуально исследовать шейку матки. Перед установкой кольпоскопа шейку матки слегка промывают слабым раствором уксуса.Раствор уксуса позволяет аномальным клеткам более четко выделяться на фоне окружающей ткани.

При проведении кольпоскопии врач проводит биопсию (удаление крошечного кусочка ткани из шейки матки), а иногда и эндоцервикальный выскабливание (соскоб ткани с шейки матки). Эта процедура может быть болезненной или вызывать судороги. Образец биопсии позволяет лаборантам изучить ткань и подтвердить состояние ткани шейки матки.

Пап-тесты проводятся семейными врачами и гинекологами в рамках регулярной медицинской помощи.Однако кольпоскопия и биопсия в основном, но не исключительно, выполняются гинекологами.

ВИЧ-положительный человек с признаками аномалий шейки матки, влагалища или вульвы также должен пройти аноскопию или визуальный осмотр заднего прохода и анального канала с помощью микроскопа, аналогичного кольпоскопу. Это связано с тем, что изменения клеток, вызванные ВПЧ, также могут происходить в анусе и приводить к анальной дисплазии. ^1,7

Результаты тестов

Результаты анализов на дисплазию шейки матки можно описать множеством медицинских терминов.

Результаты мазка Папаниколау

Вот некоторые из наиболее распространенных результатов тестов:

• Нормально: Нет свидетельств аномальных изменений в отобранных клетках.
• ASCUS (Атипичные плоские клетки неопределенного значения): Клетки аномальные, но точный диагноз не может быть поставлен. Этот результат теста может быть вызван дрожжевой инфекцией, использованием оральных контрацептивов или проблемами с взятием образца. Обычно врачи повторяют мазок Папаниколау через несколько недель или тест на наличие типов ВПЧ высокого риска.
• LSIL (Плоскоклеточное интраэпителиальное поражение низкой степени): Этот результат означает острую инфекцию. Если он сохраняется хотя бы в течение двух-трех посещений, можно предположить, что это может привести к раку.
• HSIL (плоскоклеточное интраэпителиальное поражение высокой степени): Этот результат означает более развитые поражения.
• AGC (атипичные железистые клетки): Эти аномальные клетки являются предшественниками примерно 20% случаев рака шейки матки. Эти клетки очень трудно обнаружить.

Результаты биопсии

• Нормально: Нет свидетельств аномальных изменений в отобранных клетках.
• CIN-1 (внутриэпителиальная неоплазия шейки матки, степень 1 ): этот результат означает дисплазию легкой или низкой степени. Если он сохраняется хотя бы в течение двух-трех посещений, можно предположить, что это может привести к раку. По этой причине обычно лечат CIN-1.
• CIN-2 или CIN-3: Этот результат означает дисплазию тяжелой или высокой степени.Все или почти все клетки в образце могут быть предраковыми и в большинстве случаев указывают на необходимость лечения.
• CIS: CIS означает карциному in situ и означает обнаружение небольшого участка рака. Будут проведены дальнейшие тесты, чтобы выяснить, ограничен ли рак небольшой областью или распространился (так называемая инвазивная карцинома).

Если кому-то поставлен диагноз ВПЧ, уведомление партнера не требуется в качестве меры общественного здравоохранения, в отличие от диагноза хламидиоза, гонореи, сифилиса или ВИЧ. ^3,6,8,9

Лечение

Лечение дисплазии шейки матки и рака варьируется от одного человека к другому, в зависимости от расположения и размера поражения или рака, а также от того, является ли поражение низкой или высокой степени или распространился ли рак на другие части тела. Желает ли человек забеременеть, также влияет на решения о лечении. Людей с раком шейки матки могут направить к гинекологу-онкологу или онкологу — врачу, специализирующемуся на лечении рака.

Есть несколько способов лечения дисплазии шейки матки:

• Криотерапия уничтожает поражение путем замораживания. Эту процедуру можно сделать в кабинете врача. Может возникнуть дискомфорт или боль. После лечения часто появляются кровянистые выделения и водянистые выделения.
• Лазерное лечение разрушает поражение интенсивным светом. Эта процедура часто проводится в дневном хирургическом стационаре. Это может быть неудобно и впоследствии может вызвать кровянистые выделения и выделения.
• LEEP обозначает процедуру электрохирургического удаления петли. Поражение удаляется хирургическим путем с помощью электрического тока, который проходит через очень тонкую проволочную петлю и одновременно прижигает шейку матки, чтобы впоследствии не было кровотечения.
• Коническая биопсия удаляет конусообразный кусок ткани из отверстия шейки матки и может удалить поражение или очень небольшой рак. Обычно это делается в больнице с помощью лазера или скальпеля, и пациентам вводят анестетик.После этого лечения часто возникают кровотечения и боль или дискомфорт.

Есть несколько вариантов лечения, если рак подтвержден:

• Хирургия может использоваться для удаления раковой ткани. Если рак распространился, может потребоваться операция по удалению шейки матки и матки, называемая гистерэктомией. Иногда одновременно удаляются маточные трубы, яичники и лимфатические узлы из таза.
• Лучевая терапия часто назначается при раке шейки матки, который распространился за пределы шейки матки.В лучевой терапии для уничтожения раковых клеток используются лучи высокой энергии.
• Химиотерапия может использоваться сама по себе или в дополнение к лучевой терапии, если рак распространился. Противораковые препараты используются в крови для уничтожения раковых клеток. ^3,7,9

После лечения

Хотя дисплазию шейки матки и рак можно успешно лечить, ВИЧ-положительные люди подвергаются высокому риску повторного появления этого рака. Важно проводить последующее лечение с помощью регулярных мазков Папаниколау и кольпоскопии каждые три-шесть месяцев. ¹⁰

Дисплазия шейки матки, ВИЧ и АРТ

Поскольку ВИЧ и ВПЧ передаются половым путем, ВИЧ-положительные люди часто одновременно инфицированы обоими этими вирусами. ВИЧ ослабляет иммунную систему, и у ВИЧ-инфицированных часто встречается дисплазия шейки матки.

Прием АРТ (антиретровирусная терапия ВИЧ) может снизить выработку ВИЧ, улучшить количество клеток CD4 и значительно снизить риск развития многих заболеваний, связанных со СПИДом. АРТ не может предотвратить рак шейки матки.Однако при регулярных гинекологических осмотрах и мазках Папаниколау исследования показали, что рак шейки матки не часто встречается у этих людей в странах с высоким уровнем доходов. ¹¹

Профилактика

Практика более безопасного секса с использованием презервативов или занятия сексом без проникновения могут помочь снизить риск заражения ВПЧ. Однако презервативы не устраняют полностью риск передачи ВПЧ, поскольку вирус может присутствовать на коже, не покрытой презервативом. Презервативы также снижают риск других ИППП, способствующих развитию дисплазии и рака.Отказ от курения может помочь снизить риск дисплазии шейки матки и рака.

Три вакцины против генотипов ВПЧ доступны в Канаде. Гардасил разрешен к применению «женщинам и мужчинам в возрасте от 9 до 26 лет». Он защищает от ВПЧ типов 16 и 18, которые вызывают примерно 70% случаев рака шейки матки, а также от ВПЧ типов 6 и 11, которые не вызывают рака, но вызывают примерно 90% бородавок на или вокруг гениталий и ануса. Гардасил 9 защищает от ВПЧ типов 6, 11, 16 и 18, а также от типов 31, 33, 45, 52 и 58, которые также могут вызывать рак.Церварикс разрешен для использования только «женщинам в возрасте от 10 до 25 лет». Он защищает только от ВПЧ 16 и 18 типов.

В клинических испытаниях цисгендеров ^и девочек и молодых женщин вакцины обеспечивали очень высокий уровень — более 90% — защиты от осложнений, таких как дисплазия шейки матки и ануса, а также остроконечные кондиломы, связанные с целевыми генотипами ВПЧ. Показатели защитного действия сохранялись не менее 10 лет после вакцинации в некоторых испытаниях. Чтобы любая вакцина подействовала, необходимо ввести три дозы в течение шести месяцев.

Вакцины не обеспечивают защиты от вируса папилломы человека, которым уже инфицированы люди, но обеспечивают отличную защиту от вируса папилломы человека, которому человек еще не подвергался. Кроме того, вакцины , а не , показали свою эффективность для лечения установленной инфекции ВПЧ и не одобрены в Канаде для такого использования. Следует избегать приема гардасила и церварикса беременным. Гардасил можно назначать кормящим грудью, тогда как Церварикс следует использовать во время кормления грудью только тогда, когда возможные преимущества перевешивают возможные риски.

Важно помнить, что даже если кто-то получил одну из вакцин, он защищен только от вызывающих рак типов ВПЧ, охватываемых вакциной, которую он получил. Регулярные медицинские осмотры с осмотром органов малого таза и скринингом на рак шейки матки с тестами Папаниколау для женщин и трансмужчин в возрасте от 20 лет, а также тестирование на вирусы, начиная с 30 лет, по-прежнему необходимы, чтобы помочь всем людям, независимо от их ВИЧ-статуса, снизить риск рака шейки матки и следите за признаками дисплазии шейки матки и рака. ^{1,3,5,12–15}

Итог

Дисплазия шейки матки — это , а не рак, но ее необходимо лечить, чтобы предотвратить ее перерастание в рак. Рак шейки матки — серьезное заболевание, особенно для ВИЧ-инфицированных. Чем раньше он будет обнаружен, тем больше шансов на успешное лечение.

Риск заражения ВПЧ, развития дисплазии шейки матки и рака шейки матки можно снизить на:

• получение одной из вакцин против ВПЧ
• практиковать более безопасный секс, чтобы снизить риск заражения ВПЧ
• бросить курить сигареты
• регулярное прохождение мазков Папаниколау и, при необходимости, кольпоскопии и аноскопии
• если ВИЧ-положительный, принимать эффективную комбинацию АРТ ^3,7,10,15

Сноски

ⁱ Цисгендер — лицо, чья гендерная идентичность совпадает с полом, назначенным им при рождении

ⁱⁱ Трансгендер — общий термин, который описывает людей с различной гендерной идентичностью и гендерными выражениями, которые не соответствуют стереотипным представлениям о том, что значит быть девушкой / женщиной или мальчиком / мужчиной в обществе.

(Определения взяты из Создание аутентичных пространств: набор инструментов для гендерной идентичности и гендерного самовыражения для поддержки реализации институциональных и социальных изменений , опубликовано The 519, Торонто, Онтарио.)

Список литературы

1. Центры по контролю и профилактике заболеваний. Вирус папилломы человека (ВПЧ) . Доступно по адресу: https://www.cdc.gov/std/hpv/pap/default.htm#glosscolp [Проверено 7 июля ^-го , 2015]
2. Министерство здравоохранения и долгосрочного ухода Онтарио. Программа вакцинации Онтарио . Доступно по адресу: https://www.health.gov.on.ca/en/ms/hpv/about_hpv.aspx [Доступно 7 июля 2015 г.]
3. Всемирная организация здоровья. Вирус папилломы человека (ВПЧ) и рак шейки матки . Доступно по адресу: https://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs380/en/ [Проверено 7 июля ^-го 2015 г.]
4. Ала м ю.ш., Конвей М.Дж., Чен Х.С. и др. Канцероген сигаретного дыма бензо [а] пирен усиливает синтез вируса папилломы человека. Журнал вирусологии. Январь 2008 г .; 82 (2): 1053–1058.
5. Чан Дж. К., Берек Дж. С.. Влияние вакцины против папилломы человека на рак шейки матки. Журнал клинической онкологии. 2007; 25 (20): 2975–2982.
6. Massad LS, Seaberg EC, Wright RL и др. Плоскоклеточные поражения шейки матки у женщин с вирусом иммунодефицита человека. Акушерство и гинекология . Июнь 2008 г .; 111 (6): 1388–1393.
7. Медицина Джона Хопкинса. Биопсия шейки матки . Доступно по адресу: https: // www.hopkinsmedicine.org/healthlibrary/test_procedures/gynecology/cervical_biopsy_92,P07767/ [по состоянию на 7 июля ^-го 2015 г.]
8. Майман М., Уоттс Д.Х., Андерсен Дж. Л. и др. Вагинальный 5-фторурацил для лечения дисплазии шейки матки высокой степени при инфекции вируса иммунодефицита человека: рандомизированное исследование. Акушерство и гинекология . 1999; 94: 954–961.
9. Национальный институт рака. Пап-мазок и тестирование на ВПЧ . Доступно по адресу: https://www.cancer.gov/types/cervical/pap-hpv-testing-fact-sheet.[Проверено 7 июля ^-го 2015 г.]
10. Стриклер HD, Бурк Р.Д., Фаззари М. и др. Естественный анамнез и возможная реактивация вируса папилломы человека у женщин с положительным результатом вируса иммунодефицита человека. Журнал Национального института рака . 2005 20 апреля; 97 (8): 577–586.
11. Massad LS, Seaberg EC, Watts DH и др. Низкая частота инвазивного рака шейки матки среди ВИЧ-инфицированных женщин в США, участвующих в профилактических программах. СПИД . 2 января 2004 г.; 18 (1): 109–113.
12. Агентство общественного здравоохранения Канады.Профилактика вируса папилломы человека (ВПЧ) и вакцины против ВПЧ: вопросы и ответы. Доступно по адресу: https://www.phac-aspc.gc.ca/std-mts/hpv-vph/hpv-vph-vaccine-eng.php#a2 [по состоянию на 7 июля ^-го 2015 г.]
13. Барр Э. и Таммс Г. Четырехвалентная вакцина против вируса папилломы человека. Клинические инфекционные заболевания 1 сентября 2007 г .; 45 (5): 609–607.
14. GlaxoSmithKline Canada. Церварикс (вакцина против вируса папилломы человека типов 16 и 18 (рекомбинантная, с адъювантом AS04)). Монография по продукции .2 мая 2013 года.
15. Слышал я, Шмитц В., Костальола Д. и др. Ранняя регрессия поражений шейки матки у ВИЧ-серопозитивных женщин, получающих высокоактивную антиретровирусную терапию. СПИД. 1998; 12: 1459-1464.

Кредиты

Этот информационный бюллетень был разработан в сотрудничестве с Советом по сексуальной информации и просвещению Канады (SIECCAN).

Потеря эпителиальных маркеров является ранним явлением при дисплазии полости рта и наблюдается в пределах безопасности диспластической биопсии и биопсии OSCC T1

Abstract

Плоскоклеточный рак полости рта (OSCC) — это высокоагрессивный рак, который ассоциируется с плохой 5-летней выживаемостью пациентов.Лечение заболевания дополнительно осложняется трудностью прогнозирования предраковых тканей, которые будут прогрессировать до OSCC, и высокой частотой рецидивов после хирургической резекции. Здесь мы оценили экспрессию оральных эпителиальных маркеров E-cadherin, EMP1 и 5T4 и проинвазивных белков N-кадгерина с использованием полностью охарактеризованных антител и количественной иммунофлуоресцентной микроскопии в нормальной ткани (NT), фиброэпителиальном полипе (FEP), низкой степени злокачественности. дисплазия (LGD), дисплазия высокой степени (HGD), биопсии T1 OSCC и T4 OSCC.Снижение экспрессии E-кадгерина было связано с биопсиями FEP, LGD и HGD, демонстрируя, что потеря E-кадгерина является ранним событием в аномальном эпителии и происходит в отсутствие переключения E- на N-кадгерин, последний из которых был только наблюдается в Т4 OSCC. Кроме того, потеря E-кадгерина и EMP1 является индикатором LGD (p = 0,0006), а потеря E-кадгерина, EMP1 и 5T4 — индикатором HGD (p = 0,0006). Паттерны экспрессии E-кадгерина, EMP1 и N-кадгерина могут предсказать аномальный эпителий в биоптатах LGD, HGD, T1 и T4 OSCC (значение z = 0 для всех степеней заболевания) и позволили классифицировать LGD (z = 1.47), биопсии HGD (z = 2,138), T1 (z = 1,05) и T4 OSCC (z = 1,49). Следовательно, эти маркеры предоставляют полезные средства для прогнозирования аномального эпителия при биопсии пациента. Линейная регрессия и анализ коэффициента детерминации выявили положительную корреляцию с переходом заболевания NT> LGD> HGD, но низкую корреляцию с предполагаемым переходом заболевания HGD> T1 OSCC> T4 OSCC. Кроме того, экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4 и N-кадгерина в патологически нормальных границах хирургической безопасности биопсий пациентов с LGD, HGD и T1 OSCC выявила значительные различия с NT, и использование пределов безопасности или FEP в качестве контроля для « нормальной ткани ». Ошибки II типа во всех когортах пациентов.Эта работа составляет основу для дальнейшего исследования роли потери E-кадгерина в аномальном эпителии и для разработки автоматизированных анализов для использования в диагностике рака.

Образец цитирования: Abdalla Z, Walsh T, Thakker N, Ward CM (2017) Потеря эпителиальных маркеров является ранним событием при дисплазии полости рта и наблюдается в пределах безопасности диспластической биопсии и биопсии T1 OSCC. PLoS ONE 12 (12): e0187449. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0187449

Редактор: Нильс Кордес, Технический университет Дрездена, ГЕРМАНИЯ

Поступила: 3 февраля 2017 г .; Принята к печати: 18 октября 2017 г .; Опубликован: 7 декабря 2017 г.

Авторские права: © 2017 Abdalla et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в документе и его файлах с вспомогательной информацией.

Финансирование: Эта работа была поддержана грантами Совета по исследованиям биотехнологии и биологических наук Соединенного Королевства (BB / K020277 / 1) и Совета по инженерным и физическим наукам (EP / H046070 / 1) Кристоферу М. Уорду. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

Введение

Плоскоклеточная карцинома полости рта (OSCC) является наиболее распространенным раком полости рта, составляющим не менее 90% таких злокачественных новообразований, и ассоциируется с низкой 10-летней выживаемостью по сравнению с другими видами рака. Дисплазия орального эпителия, как полагают, является одной из популяций предшественников, из которых возникает OSCC, со скоростью трансформации между 0.3 и 17,5% [1], в зависимости от исследуемой популяции [2–5]. Механизм, с помощью которого нормальный эпителий полости рта становится диспластическим и трансформируется в OSCC, не совсем понятен, и текущая стратегия лечения заключается в резекции пораженной ткани, чтобы оставить свободный от болезни край не менее 5 мм [6]. Однако OSCC и дисплазия связаны с высокой частотой рецидивов в исходном месте или рядом с ним, даже в гистологически и клинически нормальной ткани, что приводит к предложению теории полевой канцеризации [7] и многоочагового потенциала роста раковых клеток [8, 9].Сообщалось о некоторых генетических и молекулярных изменениях в «нормальной слизистой оболочке» за пределами границ резекции опухоли, при этом сообщалось о мутации гена p53 [10–12] в слизистой оболочке, прилегающей к опухоли и предраковому поражению. Shaw et al (2013) [13] недавно сообщили, что значительная часть хирургических краев OSCC демонстрирует аномальное метилирование CpG-островков [13], хотя результаты не были прогностическими, что свидетельствует о явной необходимости исследования эпителиального фенотипа в тканях, связанных с тканями. с генезисом OSCC.

Изменения клеточной адгезии необходимы для нормального эмбрионального развития, но могут вызывать значительные дефекты в архитектуре ткани и могут привести к развитию рака и метастазированию опухолевых клеток в сформировавшийся эпителий [14]. Понимание аномалий, связанных с предраковыми поражениями, может позволить расширить знания об их потенциальном переходе в опухоли и может привести к идентификации биомаркеров, которые могут предсказать поражения с высоким риском перехода опухоли и наличие аномальных клеток в гистологически нормальных хирургических краях.Было проведено много работ по использованию E-кадгерина в качестве маркера дисплазии / прогрессирования опухоли при OSCC, однако выводы из этих исследований различаются, а изучение экспрессии в предраковых тканях ограничено. Исследования показали высокие уровни экспрессии E-cadherin на плазматической мембране нормального эпителия полости рта и, как правило, снижение экспрессии наблюдается в диспластической ткани и OSCC [15-17]. В то время как некоторые сообщения предполагают, что экспрессия E-cadherin является полезным биомаркером злокачественной трансформации [18], Sridvevi et al [19] недавно пришли к выводу, что E-cadherin является сомнительным прогностическим маркером.Эти различные результаты, вероятно, отражают метод анализа экспрессии белка и антитела, используемые для обнаружения антигена. Интересно, что многие исследования не характеризуют антитела, используемые для идентификации маркеров, и во многих анализах используются субъективные методы для оценки уровней экспрессии маркеров. Следовательно, существует потребность в дополнительных маркерах для определения аномальных эпителиальных клеток и разработки автоматизированных систем для количественного определения их экспрессии.

Ранее мы показали, что ингибирование E-кадгерина в эмбриональных стволовых клетках (ESC) вызывает мезенхимальный фенотип, повышенную клеточную пролиферацию и измененную глобальную экспрессию транскриптов в отсутствие характерного события эпителиально-мезенхимального перехода (EMT) [20–23] . Кроме того, потеря функции E-cadherin в ESCs также приводит к изменению локализации белков клеточной поверхности, таких как онкофетальный антиген 5T4, эпителиальный мембранный белок-1 (EMP1) и CD44 [20,21,23,24].Таким образом, мы предположили, что потеря E-кадгерина будет ранним событием, связанным с аномальным ростом эпителиальных клеток (то есть дисплазией), потенциально приводящим к преимуществу роста клеток в отсутствие маркеров EMT, таких как N-кадгерин [23 ]. В этом исследовании мы оценили экспрессию и локализацию E-кадгерина, EMP1, 5T4, N-кадгерина и CD44 в нормальной ткани, фиброэпителиальном полипе, дисплазии низкой степени, дисплазии высокой степени, биопсии T1 OSCC и T4 OSCC с использованием полностью охарактеризованных биоптатов. антитела и иммунофлуоресцентная микроскопия для определения клеточной локализации и количественной пространственно-временной экспрессии.

Материалы и методы

Биопсия пациента

Биопсии пациентов были хирургически вырезаны ретроспективно у 10 пациентов с фиброэпителиальными полипами, 20 пациентов с дисплазией низкой степени, 16 пациентов с дисплазией высокой степени, 5 пациентов с T1 OSCC и 10 пациентов с OSCC T4. Все биопсии были предоставлены в виде срезов 4 мкм на предметных стеклах, покрытых обезьянами, из залитых парафином блоков из отделения патологии больницы Святой Марии, Манчестер, Великобритания. Исследование было рассмотрено и одобрено Комитетом по этике Манчестерского университета в соответствии с заявкой 08 / h2006 / 21 Национальной службы этики исследований (NRES) перед началом исследования.Патологическое стадирование образцов было выполнено зарегистрированным патологом в отделении патологии больницы Святой Марии. Пять образцов «нормальных» срезов ткани языка были приобретены у AMS Biotechnology (Абингдон, Великобритания), а семь срезов — у Abcam Plc (Кембридж, Великобритания). Экспрессия маркеров в хирургических краях образцов LGD, HGD и T1 OSCC была выполнена на биоптатах, которые показали нормальную гистологию и четкий запас хирургической безопасности. Из 20 биопсий LGD, 16 HGD и 5 T1 OSCC всего 9, 7 и 5 биопсий показали гистологически нормальную ткань в пределах хирургической безопасности, соответственно, и были использованы для дальнейшего исследования.

Вестерн-блоттинг

1 x 10 ⁷ клеток лизировали с использованием буфера для анализа радиоиммунопреципитации (RIPA) (0,1 мл 50 мМ Трис, pH 8,0, 150 мМ NaCl, 1% NP-40, 0,5% дезоксихолата натрия и 0,1% SDS; Sigma -Aldrich, Дорсет, Великобритания), содержащий ингибитор коктейля протеаз (Roche Applied Science, Сассекс, Великобритания). Образцы инкубировали на льду в течение 30 минут перед центрифугированием при 14000 g в течение 5 минут, остатки клеток удаляли, а клеточный лизат хранили при -80 ° C перед использованием.10 мкл клеточного лизата смешивали 1: 1 с 2x буфером Лэммли, разделяли с помощью SDS-PAGE и переносили на нитроцеллюлозную мембрану Hybond-ECL (Amersham biosciences, Бакс, Великобритания) с использованием блоттера Trans blot SD (Biorad, Хартфордшир, Великобритания). Мембрану инкубировали с соответствующими первичными и вторичными (-HRP) антителами, разведенными в блокирующем буфере (5% сухого молока в TBS), подвергали воздействию реагента для обнаружения ECL (GE Healthcare, Bucks, UK) и визуализировали с помощью авторадиографической пленки, вручную проявленной с помощью Kodak GBX. решения для разработчиков и закрепителей (Sigma Aldrich).

Захват изображений иммунофлуоресцентной микроскопии и количественный анализ экспрессии

Слайды погружали в ксилол на 2 × 5 мин для депарафинизации и переносили в 100% этанол на 2 × 5 мин для регидратации. Слайды погружали в 3% перекись водорода в метаноле на 20 минут и промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) на качалке платформы в течение 5 минут. Слайды блокировали 1% козьей сывороткой / 0,1% BSA в PBS в увлажненной камере в течение 30 минут при комнатной температуре. Срезы инкубировали в течение ночи при 4 ° C в первичных антителах, разбавленных блокирующей сывороткой (все разведения 1: 100).Срезы дважды промывали PBS на платформе-качалке в течение 5 минут и инкубировали с меченным AlexorFlour 488 вторичным антителом (все 1: 500 в блокирующей сыворотке) в течение 1 часа в темноте при комнатной температуре. Затем предметные стекла промывали 3 раза PBS, закрепляли с помощью DAPI Vectorshield (Vector, Peterborough, UK) и изображений TIF, полученных на флуоресцентном микроскопе Leica DM5000 B (Milton Keynes, UK). Изображения TIF были загружены непосредственно в ImageJ, и был проведен количественный анализ экспрессии, как описано в инструкциях по адресу https: // imagej.nih.gov/ij/docs/guide/user-guide.pdf. Весь эпителий был оценен на предмет FEP, дисплазии и хирургических полей, а также репрезентативных областей, захваченных (увеличение x400) для количественного анализа. Для T1 и T4 OSCC, где эпителий отсутствовал или присутствовал ограниченный, всю биопсию оценивали при малом увеличении (увеличение x100) на предмет экспрессии маркеров, и репрезентативные области от поверхности до глубоко инвазивного фронта опухоли собирали для количественного анализа. Экспрессия E-кадгерина, EMP-1, 5T4, N-кадгерина и CD44 считалась положительной, если локализовалась на поверхности клетки (так называемая мембранная экспрессия (m)) или проявляла мембранную и цитоплазматическую (m / c) экспрессию.Экспрессия маркеров считалась отрицательной, если они локализованы в цитоплазме, ядре (n) или околоядерных областях клетки или если не наблюдалась реактивность (-ve). Все образцы были дополнительно оценены с помощью двойного слепого анализа репрезентативных флуоресцентных изображений тремя сотрудниками лаборатории Ward.

Статистический анализ

Статистический анализ экспрессии отдельных маркеров внутри и между биопсиями выполнялся с использованием программного обеспечения SPSS, за исключением случаев, указанных ниже. Статистическая значимость была установлена ​​на уровне p <0.05. Коэффициент детерминации был рассчитан в Microsoft Excel путем нанесения среднего и стандартного отклонения значений IF для каждого маркера. Биномиальное значение z рассчитывали с помощью SPSS путем сравнения с клиническим диагнозом для каждой биопсии. p-значение биномиального z-значения было рассчитано с помощью Graphpad (https://www.graphpad.com/quickcalcs/pvalue1.cfm), где p <0,05 представляет собой статистически значимое отклонение от клинического диагноза.

Результаты

Характеристика антител, распознающих E-кадгерин, EMP1, 5T4, N-кадгерин и CD44, которые используются в этом исследовании

Все антитела, использованные в этом исследовании, были оценены на реактивность с помощью вестерн-блоттинга в соответствующих клеточных лизатах и ​​подтверждена на реактивность в залитых парафином биопсийных срезах перед анализом (рис. 1).Антитело против E-кадгерина 610181 (BD Biosciences) продемонстрировало реактивность с одной полосой ~ 120 кДа посредством вестерн-блот-анализа в общих лизатах клеток A549 (рис. 1A (i)) и предоставило четкие доказательства локализации плазматической мембраны в биопсии здоровых оральный эпителий (NT; рис. 1A (ii)) с помощью иммунофлуоресцентной микроскопии. Экспрессия EMP1 оценивалась с использованием ab173224 (Abcam Plc) в лизатах цельных клеток MCF7 с использованием вестерн-блоттинга и показывала полосы при ~ 36 кДа и ~ 55 кДа (рис. 1B (i)). Множественные полосы для белка EMP1 являются обычными [25, 26] и часто зависят от ткани, потенциально представляя димер / тримеризацию белка и / или измененные паттерны гликозилирования.Локализация белка EMP1 на клеточной поверхности была очевидна при биопсии здорового эпителия с использованием анализа иммунофлуоресцентной микроскопии (рис. 1B (ii)). Антиген 5T4 оценивали с помощью ab134162 (Abcam Plc) в вестерн-блот-анализе полных клеточных лизатов Bicr56, показывая единственную полосу при ~ 75 кДа (рис. 1C (i)). Локализация 5T4 в плазматической мембране была очевидна с использованием иммунофлуоресцентного микроскопического анализа биопсии здорового орального эпителия (рис. 1C (ii)). Антитело к N-кадгерину ab76057 (Abcam Plc) продемонстрировало реактивность с одной полосой ~ 120 кДа посредством вестерн-блот-анализа в общих клеточных лизатах A549 (рис. 1D (i)) и продемонстрировало локализацию плазматической мембраны в биопсии T4 OSCC с использованием иммунофлуоресценции. микроскопия (рис. 1D (ii)).Антитело к CD44 ab40983 (Abcam, Plc) продемонстрировало реактивность с одной полосой ~ 80 кДа по данным вестерн-блоттинга в общих лизатах из клеток MB-MDA-231 (рис. 1E (i)) и локализации плазматической мембраны в биопсии здорового человека. оральный эпителий с использованием анализа иммунофлуоресцентной микроскопии (рис. 1E (ii)). Однако паттерны экспрессии CD44 не выявили какой-либо статистической значимости ни в одной из групп пациентов (точный критерий Фишера и односторонний анализ ANOVA) и в дальнейшем в этом исследовании не оцениваются.Все данные, относящиеся к экспрессии CD44 в биопсиях пациентов, содержатся в Таблице 1A и в разделе «Вспомогательная информация».

Рис. 1. Характеристика антител, использованных в этом исследовании.

(a) E-кадгерин, (b) EMP1, (c) 5T4, (d) N-кадгерин и (e) экспрессия CD44, оцененная с использованием (i) вестерн-блоттинга и (ii) анализа иммунофлуоресцентной микроскопии. Антитело против E-кадгерина 610181 (BD Biosiences, Великобритания), оцененное с использованием лизатов клеток A549 и биопсии нормального эпителия полости рта; Антитело против EMP1 ab173224 (Abcam Plc, Великобритания), оцененное с использованием лизатов клеток MCF7 и биопсии нормального эпителия полости рта; Антитело против 5Т4 ab134162 (Abcam Plc, Великобритания) оценивали с использованием лизатов клеток BicR56 и биопсии нормального эпителия полости рта; Антитело против N-кадгерина ab76057 (Abcam Plc, Великобритания) оценивали с использованием лизатов клеток A549 и биопсии T4 OSCC; Антитело к CD44 ab40983 (Abcam Plc, Великобритания) оценивали с использованием лизатов клеток MB-MDA-231 и биопсии нормального эпителия полости рта.На вставках показано соответствующее окрашивание антител к отрицательному контролю. Окрашивание зеленым антигеном; Синий показывает ядерное окрашивание DAPI.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0187449.g001

Определение клеточной локализации и интенсивности флуоресценции экспрессии маркеров в биоптатах эпителия полости рта

Экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4, N-кадгерина и CD44 была разделена на плазматическую мембрану (рис. 2A; m), плазматическую мембрану / цитоплазматическую (рис. 2B; m / c), цитоплазматическую (рис 2C; c), ядерная (рис. 2D; n) и перинуклеарная (рис. 2E; pn) локализация.Локализация белка была подтверждена с помощью анализа ImageJ, который позволил различить границы, описанные выше, демонстрируя доказательство принципа автоматического анализа экспрессии и локализации маркеров в биоптатах (рис. 2A (ii) –2F (ii)). Интенсивность флуоресценции окрашивания мембран определяли с помощью ImageJ (рис. 2G), и для каждого образца регистрировали среднюю интенсивность ± стандартное отклонение. Сравнение ядерной и периъядерной экспрессии маркеров не выявило существенных различий между NT, FEP, LGD, HGD, T1 OSCC и T4 OSCC и далее не рассматривается (все p> 0.05 ANOVA).

Рис. 2. Определение клеточной локализации и интенсивности флуоресценции экспрессии маркеров в биоптатах эпителия полости рта.

Определяли локализацию на клеточной поверхности (a), клеточную поверхность и цитоплазматическую локализацию (b), цитоплазматическую локализацию (c), ядерную локализацию (d), периядерную локализацию (e) и отсутствие экспрессии (f) индивидуальных белковых маркеров. с использованием (i) анализа иммунофлуоресцентной микроскопии и (ii) локализации клеток, подтвержденной с помощью приложения «Plot Profile» в программном обеспечении ImageJ.Белые линии на изображениях в (i) представляют область, используемую для анализа профиля графика, показанного в (ii). (g) (i) Пример мембранной локализации экспрессии маркера в программе ImageJ и (ii) количественная оценка интенсивности флуоресценции с использованием приложения «Find Maxima» в программе ImageJ.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0187449.g002

Экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4 и N-кадгерина в нормальном эпителии полости рта

Е-кадгерин экспрессировался на плазматической мембране во всех биоптатах нормального орального эпителия (12/12; таблица 1А), причем 2/12 биопсий демонстрировали как мембранную, так и цитоплазматическую экспрессию (таблица S1).EMP1 и 5T4 экспрессировались на плазматической мембране в 11/12 биоптатах (таблица 1A), при этом большинство образцов экспрессировали только экспрессию плазматической мембраны (таблица S1). Реактивность плазматической мембраны N-кадгерина отсутствовала в 11/12 биоптатах (таблица 1A), при этом 7/12 образцов демонстрировали только цитоплазматическую локализацию (таблица S1). E-кадгерин, EMP1 и 5T4 демонстрируют статистически значимое повышение уровней флуоресценции по сравнению с N-кадгерином (Таблица 1B; p <0,001), следовательно, нормальный оральный эпителий связан с экспрессией E-кадгерина, EMP1 и 5T4 на плазматической мембране и отсутствием N -кадгерин.

Таблица 1. Экспрессия маркеров и интенсивность флуоресценции в биоптатах орального эпителия.

(a) Экспрессия на клеточной поверхности E-кадгерина, EMP1, 5T4, N-кадгерина и CD44 в биоптатах, использованных в этом исследовании. (b) Показания интенсивности флуоресценции из анализа иммунофлуоресцентной микроскопии в NT, FEP, LGD, HGD, T1 OSCC и T4 OSCC и их экспрессия в этих биоптатах (односторонний ANOVA).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0187449.t001

Экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4 и N-кадгерина в фиброэпителиальных полипах

Биопсия фиброэпителиального полипа изначально предназначалась для использования в качестве дополнительных примеров нормального эпителия полости рта.Однако в 4/10 биоптатах отсутствовала экспрессия E-кадгерина (таблица 1А), а в 4/6 оставшихся биопсий обнаружена локализация белка как на клеточной поверхности, так и в цитоплазме (таблица S2). По сравнению с биопсией NT, экспрессия E-кадгерина была значительно снижена в образцах FEP и была связана с большой величиной эффекта Hedges г (таблица 2A; p = 0,029, г 0,98). Экспрессия EMP1, 5T4 и N-кадгерина не была статистически значимой по сравнению с нормальным эпителием (Таблица 2A). Однако двухфакторный анализ ANOVA показал статистически значимую разницу во всех экспрессиях маркеров между NT и FEP (Таблица 2A; p = 0.0037). Следовательно, хотя биопсия FEP не имела каких-либо патологических признаков, отсутствие E-кадгерина в 40% биопсий предполагает наличие аномалии в эпителии.

Таблица 2. Сравнение экспрессии маркеров в аномальной ткани по сравнению с нормальным эпителием.

(a) Экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4 и N-кадгерина в биоптатах FEP, LGD, HGD, T1 OSCC и T4 OSCC по сравнению с нормальной тканью (NT). (b) Экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4 и N-кадгерина в биоптатах FEP, LGD, HGD, T1 OSCC и T4 OSCC по сравнению с предполагаемой линейной зависимостью FEP> LGD> HGD> T1 OSCC> T4 OSCC.(c) Проверка гипотезы предполагаемой линейной связи NT> LGD> HGD и предполагаемого линейного перехода HGD> T1 OSCC> T4 OSCC. Серые прямоугольники показывают статистически значимые результаты.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0187449.t002

Экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4 и N-кадгерина при дисплазии низкой степени тяжести

Во всех биопсиях с дисплазией низкой степени не обнаружено экспрессии E-кадгерина на плазматической мембране (таблицы 1 и 2; таблица S3). EMP1 также показал статистически значимую потерю окрашивания плазматической мембраны в 15/20 биоптатах (p = 0.006, FEP по сравнению с NT; Таблицы 1 и 2). Хотя экспрессия 5T4 была обнаружена на плазматической мембране в 12/20 образцах, этот результат не был значимым по сравнению с NT (таблицы 1 и 2). Экспрессия N-кадгерина была обнаружена в 2/20 биоптатах, что не было статистически значимым по сравнению с нормальной тканью (таблицы 1 и 2). Двусторонний анализ ANOVA показал статистически значимое различие во всех экспрессиях маркеров между NT и LGD (таблица 2A; p <0,0001). Таким образом, биопсия с дисплазией низкой степени выраженности лишена экспрессии E-кадгерина на плазматической мембране, демонстрирует статистически значимое снижение реактивности EMP1 и не обнаруживает каких-либо значительных изменений в экспрессии 5T4 или N-кадгерина.

Экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4 и N-кадгерина при дисплазии высокой степени

Во всех биопсиях при дисплазии высокой степени не обнаружено экспрессии E-кадгерина на плазматической мембране (таблицы 1 и 2; таблица S4; p = <0,000001 по сравнению с NT; таблица 2). EMP1 показал статистически значимую потерю окрашивания плазматической мембраны в 14 из 16 биопсий (p = 0,00005 по сравнению с NT; таблицы 1 и 2), а 5T4 отсутствовал в плазматической мембране в 12 из 16 биопсий (p = 0,0006 по сравнению с NT; Таблицы 1 и 2).Экспрессия N-кадгерина на плазматической мембране наблюдалась в 4/16 биоптатах, хотя этот результат не был статистически значимым по сравнению с нормальной тканью (таблицы 1 и 2). Двусторонний анализ ANOVA показал статистически значимое различие во всех экспрессиях маркеров между NT и HGD (таблица 2A; p <0,0001). Таким образом, биопсии с высокой степенью дисплазии лишены экспрессии E-кадгерина на плазматической мембране, демонстрируют статистически значимое снижение реактивности EMP1 и 5T4, но не обнаруживают каких-либо изменений в экспрессии белка N-кадгерина по сравнению с NT.

Экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4 и N-кадгерина в T1 OSCC

Были оценены только пять биопсий T1 OSCC, поэтому при интерпретации результатов этих образцов требуется некоторая степень осторожности. В 4/5 биоптатах отсутствовала экспрессия E-кадгерина на плазматической мембране (таблицы 1 и 2; таблица S5; p = 0,002 по сравнению с NT), и во всех биоптатах отсутствовала локализация EMP1 на плазматической мембране (таблицы 1 и 2; таблица S5; p = 0,001, по сравнению с NT). Локализация 5T4 в плазматической мембране была обнаружена в 3/5 биоптатов (p> 0.05 по сравнению с NT), а N-кадгерин отсутствовал во всех пяти биопсиях (p> 0,05 по сравнению с NT). Двусторонний анализ ANOVA показал статистически значимое различие во всех экспрессиях маркеров между NT и T1 OSCC (таблица 2A; p <0,0001). Таким образом, несмотря на небольшое количество образцов, в биоптатах T1 OSCC отсутствует экспрессия на плазматической мембране EMP1, N-кадгерина и, в основном, E-кадгерина, и не наблюдается каких-либо статистически значимых изменений экспрессии белка 5T4 или N-кадгерина по сравнению с NT.

Экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4 и N-кадгерина в T4 OSCC

В биопсиях 9/10 T4 OSCC отсутствовала экспрессия E-кадгерина и EMP1 на плазматической мембране (таблицы 1 и 2, таблица S6; p = 0,00002 и 0,0003 соответственно по сравнению с NT). Локализация 5T4 в плазматической мембране была обнаружена в 50% образцов (p> 0,05 по сравнению с NT; Таблица 2B), а N-кадгерин был обнаружен на плазматической мембране 6/10 биопсий (Таблицы 1 и 2; p = 0,02, по сравнению с NT). Следовательно, биоптаты T4 OSCC лишены экспрессии E-кадгерина и EMP1 на плазматической мембране в 90% биопсий и демонстрируют локализацию белка N-кадгерина в плазматической мембране в 60% случаев.Однако не наблюдалось статистически значимой разницы в экспрессии белка 5T4 по сравнению с NT. Двусторонний анализ ANOVA показал статистически значимую разницу во всех экспрессиях маркеров между NT и T4 OSCC (таблица 2A; p <0,0001).

Таким образом, по сравнению с биопсией NT FEP связан с отсутствием экспрессии E-кадгерина, LGD связан с потерей экспрессии E-кадгерина и EMP1, а HGD связан с отсутствием E-кадгерина, EMP1 и 5T4 в отсутствие увеличения Маркер ЕМТ N-кадгерин (Таблица 2А).Это показывает, что потеря целостности эпителия является ранним событием, связанным с FEP и оральной дисплазией, и что это происходит в отсутствие переключения E- на N-кадгерин [27]. По сравнению с биопсией NT, T1 OSCC демонстрирует потерю E-кадгерина, а EMP1 и T4 OSCC связаны с отсутствием E-кадгерина и EMP1 и увеличением экспрессии N-кадгерина (Таблица 2A).

Экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4 и N-кадгерина между состояниями эпителиальных заболеваний

Двусторонний анализ ANOVA NT, FEP, LGD, HGD, T1 и T4 OSCC показал, что потеря E-кадгерина сама по себе является ранним маркером перехода NT> FEP, потеря E-кадгерина и EMP1 является индикатором предполагаемого FEP> LGD перехода, потеря E-cadherin, EMP1 и 5T4 свидетельствует о переходе LGD> HGD и усилении N-кадгерина, маркера перехода T1> T4 OSCC (Таблица 2B).Однако комбинированная экспрессия маркеров не могла различать LGD> HGD, предполагаемый переход HGD> T1 OSCC или T1> T4 OSCC (Таблица 2B; двусторонний дисперсионный анализ ANOVA p> 0,05). Следовательно, большинство изменений в экспрессии маркеров, за исключением N-кадгерина, происходят на стадии HGD болезни и впоследствии мало изменяются.

Принято считать, что OSCC возникает как линейный переход от предраковых поражений, таких как HGD, однако частота перехода от дисплазии> OSCC находится в диапазоне от 0.От 3 до 17,5%, что позволяет предположить некоторую степень неопределенности в отношении точного механизма туморогенеза OSCC. Noutomi et al (2006) [28] показали, что OSCC может возникать в результате дисплазии различными генетическими путями, предполагая, что могут происходить множественные переходные события. Линейная регрессия и анализ коэффициента детерминации использовались для проверки гипотезы о линейном переходе от HGD> T1 OSCC> T4 OSCC (Таблица 2C). Предполагаемый переход NT> LGD> HGD показал положительную корреляцию для E-кадгерина (r ² = 0.89; p = 0,0027), EMP1 (r ² = 0,966; p = 0,00008) и 5T4 (r ² = 0,953; p = 0,0002), но не для N-кадгерина (r ² = 0,432; p = 0,345) . Напротив, предполагаемый линейный переход HGD> T1 OSCC> T4 OSCC не был статистически значимым ни для одного из маркеров.

Экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4 и N-кадгерина в пределах безопасности биопсий LGD, HGD и T1 OSCC

Экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4 и N-кадгерина оценивалась в хирургической грани биопсий LGD, HGD и T1 OSCC, которые показали нормальную гистологию и четкий запас хирургической безопасности (таблица 3A и таблица S7).Из 20 биопсий LGD, 16 HGD и 5 T1 OSCC всего 9, 7 и 5 биопсий показали гистологически нормальную ткань в пределах хирургической безопасности, соответственно, и были использованы для дальнейшего исследования. E-кадгерин экспрессировался на плазматической мембране 6/9 границ LGD (LGD-M; p = 0,063 по сравнению с NT), 2/7 границ HGD (HGD-M; p = 0,002) и 2/5 T1 OSCC. поля (T1-M; p = 0,015) (Таблица 3B). Экспрессия EMP1 и N-кадгерина существенно не различалась ни при одном из типов заболевания по сравнению с NT (Таблица 3B).5T4 значительно отличался по границам LGD и HGD по сравнению с NT (Таблица 3B). Однако сравнение всех маркеров, выраженных в LGD-M, HGD-M и T1 OSCC-M, выявило статистическую значимость для всех образцов по сравнению с NT (Таблица 3B; двусторонний дисперсионный анализ ANOVA).

Таблица 3. Экспрессия маркеров в пределе хирургической безопасности LGD, HGD и T1 OSCC.

(a) Экспрессия на клеточной поверхности E-кадгерина, EMP1, 5T4 и N-кадгерина в пределах хирургической безопасности биопсий LGD, HGD и T1 OSCC. (b) Экспрессия маркеров в границах хирургической безопасности LGD, HGD и T1 OSCC по сравнению с нормальной тканью.(c) Экспрессия маркеров в пределах хирургической безопасности LGD, HGD и T1 OSCC по сравнению с соответствующими образцами биопсии. (d) Статистическая значимость дисплазии низкой степени (LGD), дисплазии высокой степени (HGD) и T1 OSCC при использовании здорового эпителия полости рта (NT), фиброэпителиального полипа или соответствующих хирургических полей в качестве здорового контроля. Серые прямоугольники показывают статистически значимые результаты.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0187449.t003

Сравнение экспрессии маркера хирургического края с соответствующими биопсиями LGD, HGD или T1 OSCC показало статистически значимое различие в экспрессии E-кадгерина при LGD и LGD- M и снижение экспрессии EMP1 в HGD по сравнению с HGD-M и T1 OSCC по сравнению с T1 OSCC-M (таблица 3C).Это показывает, что использование границ безопасности в качестве представления нормального эпителия полости рта недооценивает статистическую значимость во всех образцах и вводит ошибки типа II для E-кадгерина в HGD и T1 OSCC и для 5T4 в HGD (Таблица 3D). Точно так же использование биопсии FEP в качестве положительного эпителиального контроля также недооценивает статистическую значимость во всех образцах и вводит ошибку типа II для экспрессии E-кадгерина в T1 OSCC (Таблица 3D).

Прогнозирование аномального эпителия и степени заболевания с использованием экспрессии маркеров в биоптатах FEP, LGD, HGD, T1 и T4 OSCC

На основании статистического анализа экспрессии маркеров нормальный эпителий был классифицирован как Ecad ⁺ / EMP ⁺ / 5T4 ⁺ / Ncad ^—, аномальный эпителий (e.г. FEP) как Ecad ^— / EMP ⁺ / 5T4 ⁺ / Ncad ^— , LGD как Ecad ^— / EMP ^— / 5T4 ⁺ / Ncad ^— , HGD — как / EMP ^— / 5T4 ^— / Ncad ^— , T1 OSCC как Ecad ^— / EMP ^— / 5T4 ^+/- / Ncad ^— и T4 OSCC 9000/ ^{— EMP — / 5T4 +/- / Ncad + (Таблица 4). Сравнение этих классификаций с экспрессией маркеров в каждой индивидуальной биопсии предсказало 16% нормального эпителия (z-значение = 1.48), 50% биопсий FEP (z = 2,58) и 100% LGD, HGD, T1 и T4 OSCC (все z = 0) должны быть аномальными (таблицы S1, S2, S3, S4, S5 и S6). Используя эти критерии, мы также оценили каждую биопсию для прогнозирования стадии заболевания (таблицы S1, S2, S3, S4, S5 и S6). 60% биопсий FEP (z = 2,58), 80% биопсий LGD (z = 2,1), 63% биопсий HGD (z = 2,43), 40% T1 OSCC (z = 2,07) и 70% T4 OSCC ( z = 1,87) можно было классифицировать. Удаление 5T4 из критериев классификации, описанных в таблице 4, привело к тому, что 8% образцов NT были классифицированы как аномальные (z = 1.02) и поддерживал 100% прогноз аномального эпителия в биоптатах LGD, HGD, T1 OSCC и T4 OSCC. Кроме того, эти критерии улучшили классификационные оценки биопсий LGD (z = 1,47), HGD (z = 2,14), T1 OSCC (z = 1,05) и T4 OSCC (z = 1,49) (S1, S2, S3, S4, S5). и таблицы S6). Пределы LGD, HGD и T1 OSCC также оценивались на предмет отклонений с использованием классификации маркеров, показанной в таблице 4. 89% LGD-M (z = 3,79), 86% HGD-M (z = 3,24) и 80% Биопсии T1 OSCC-M (z = 2,52) были классифицированы как аномальные (таблица S7), показывая значительную разницу между патологическим анализом и данными экспрессии маркеров.}

Таблица 4. Сводная информация об экспрессии маркеров в здоровом, патологическом и больном эпителии.

Экспрессия маркера, используемая для классификации нормальной ткани (NT), фиброэпителиального полипа (FEP), дисплазии низкой степени (LGD), дисплазии высокой степени (HGD), T1 OSCC и T4 OSCC.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0187449.t004

Обсуждение

OSCC является наиболее распространенным раком полости рта и ассоциируется с более низкой 5-летней выживаемостью по сравнению со многими другими видами рака.Заболевание дополнительно усугубляется трудностью прогнозирования предраковых аномальных тканей, которые будут прогрессировать до ОСК, и высокой частотой рецидивов после хирургической резекции последнего. В настоящее время механизм перехода от нормальной ткани к дисплазии / OSCC неуловим, а скорость преобразования от 0,3 до 17,5% для дисплазии в OSCC [1] предполагает значительную гетерогенность между популяциями пациентов. Следовательно, методы, которые могут обнаруживать аномальные ткани в полости рта до образования OSCC, позволят дополнительно изучить биологические и эпидемиологические аспекты этого заболевания и могут помочь в выяснении молекулярных механизмов, связанных с онкогенезом OSCC.

Наше исследование показывает, что панель маркеров может быть использована для оценки состояния эпителия тканей полости рта, включая E-кадгерин, EMP1, 5T4 и N-кадгерин. E-кадгерин представлял собой наиболее чувствительный из этих маркеров с точки зрения высокой экспрессии в нормальной ткани и отсутствовал на ранних стадиях, связанных с аномальным эпителием. Предыдущие исследования продемонстрировали смешанные результаты с использованием потери экспрессии E-кадгерина в качестве раннего маркера аномального эпителия [18,19]. В этом исследовании мы использовали антитело, распознающее внутриклеточный домен E-кадгерина, поскольку эта область функционирует как в структурном связывании актина, так и в передаче клеточных сигналов.Кроме того, внеклеточный домен E-кадгерина склонен к расщеплению с помощью MMP, в результате чего образуется растворимый фрагмент 80 кДа, который впоследствии может связываться с клеточным белком E-кадгерина, нарушая передачу сигналов и целостность эпителия. Как показано, цитоплазматический эпитоп E-кадгерина быстро теряется из диспластической ткани и значительной части биоптатов FEP, и поэтому представляет собой чувствительный метод обнаружения аномалий в биоптатах эпителиальной ткани. Кроме того, это демонстрирует, что потеря E-кадгерина является ранним событием, происходящим в аномальном эпителии полости рта.Мы предполагаем, что неоднозначные результаты других исследований экспрессии маркера E-кадгерина представляют собой использование не охарактеризованных антител и / или антител, которые распознают эпитопы во внеклеточном домене E-кадгерина.

Интересно, что переключение E- на N-cadherin не наблюдалось ни в одной из диспластических биопсий или биопсий T1 OSCC, в которых отсутствовала экспрессия E-cadherin. Переключение E- на N-кадгерин связано с повышенной подвижностью и инвазией эпителиальных клеток во время развития эмбриона и метастазирования опухолевых клеток [24].Повышенная экспрессия N-cadherin наблюдалась только в биоптатах OSCC на стадии T4, что согласуется с исследованием Zhou et al (2015) [27], где экспрессия виментина была связана только с метастатическим OSCC. Это демонстрирует, что EMT является поздним событием, связанным с OSCC, и что потеря только E-cadherin недостаточна для индукции EMT in vivo , как мы ранее сообщали об эмбриональных стволовых клетках [20]. Эти результаты подтверждают нашу ранее опубликованную гипотезу DENT о роли E-кадгерина в раннем онкогенезе [23].Нелинейная тенденция наблюдалась для предполагаемого перехода от HGD> T1 OSCC> T4 OSCC, в то время как NT> LGD> HGD демонстрировала статистически значимое линейное прогрессирование. Эти результаты предполагают, что предполагаемый переход HGD> T1 OSCC может не произойти, что OSCC T1 происходит из субпопуляции диспластических клеток или что реэпителизация необходима для перехода от HGD к раку.

Использование экспрессии маркеров E-кадгерина, EMP1 и N-кадгерина позволило предсказать аномальный эпителий во всех патологически аномальных биопсиях.Кроме того, болезненные состояния можно было предсказать по крайней мере в 75% образцов. Следовательно, использование E-кадгерина, EMP1 и N-кадгерина может предоставить полезные средства для прогнозирования патологических и патологических состояний эпителия при биопсии, а добавление дополнительных маркеров к этой панели может позволить повысить способность распознавания и прогнозирования. Однако потребуется дальнейший анализ, чтобы подтвердить эту классификацию при несвязанной дисплазии полости рта и биопсии SCC. Этот метод также предсказал аномальный эпителий на краях LGD, HGD и T1 OSCC, что может объяснить высокую частоту рецидивов, связанную с этим заболеванием.Статистический анализ экспрессии маркеров в пораженной ткани по сравнению с «здоровым» пределом безопасности недооценил статистическую значимость во всех образцах и привел к ошибкам типа II. Кроме того, использование биопсий FEP в качестве «здорового» контроля также занижало статистическую значимость во всех образцах и вносило ошибку типа II для экспрессии 5T4 при HGD. Следовательно, биопсии тканей, используемые в качестве здоровых контрольных образцов при сравнении биопсий больных, могут иметь заметное влияние на статистический анализ и должны быть оценены на наличие здорового эпителия перед использованием.

Вспомогательная информация

S1 Таблица. Локализация и экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4, N-кадгерина и CD44 в биоптатах нормальной ткани.

Столбец «Классификация» показывает прогнозируемое состояние биопсии (нормальная ткань — NT; аномальное — A) с использованием таблицы классификации маркеров, представленной в таблице 4. Столбцы «Прогноз заболевания» показывают прогнозируемую степень поражения биопсии с использованием классификации маркеров. в таблице 4 (Ecad / EMP / 5T4 / Ncad) или с использованием E-кадгерина, EMP1 и N-кадгерина (Ecad / EMP / Ncad).«A» отображается там, где невозможно было спрогнозировать оценку. Z-значение и соответствующее p-значение показаны для каждого прогноза столбца по сравнению с клиническим диагнозом (то есть всем NT).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0187449.s001

(TIF)

S2 Стол. Локализация и экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4, N-кадгерина и CD44 в биоптатах фиброэпителиального полипа.

Столбец «Классификация» показывает прогнозируемое состояние биопсии (нормальная ткань — NT; аномальная — A) с использованием таблицы классификации маркеров, представленной в таблице 4.Столбцы «Прогноз заболевания» показывают прогнозируемую степень заболевания при биопсии с использованием таблицы классификации маркеров, представленной в таблице 4 (Ecad / EMP / 5T4 / Ncad), или с использованием E-кадгерина, EMP1 и N-кадгерина (Ecad / EMP / Ncad). «A» отображается там, где невозможно было спрогнозировать оценку. Z-значение и соответствующее p-значение показаны для каждого прогноза столбца по сравнению с клиническим диагнозом.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0187449.s002

(TIF)

S3 Таблица. Локализация и экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4, N-кадгерина и CD44 в биоптатах с дисплазией низкой степени.

Столбец «Классификация» показывает прогнозируемое состояние биопсии (нормальная ткань — NT; аномальное — A) с использованием таблицы классификации маркеров, представленной в таблице 4. Столбцы «Прогноз заболевания» показывают прогнозируемую степень поражения биопсии с использованием классификации маркеров. в таблице 4 (Ecad / EMP / 5T4 / Ncad) или с использованием E-кадгерина, EMP1 и N-кадгерина (Ecad / EMP / Ncad). «A» отображается там, где невозможно было спрогнозировать оценку. Z-значение и соответствующее p-значение показаны для каждого прогноза столбца по сравнению с клиническим диагнозом.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0187449.s003

(TIF)

S4 Таблица. Локализация и экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4, N-кадгерина и CD44 в биоптатах с дисплазией высокой степени.

Столбец «Классификация» показывает прогнозируемое состояние биопсии (нормальная ткань — NT; аномальное — A) с использованием таблицы классификации маркеров, представленной в таблице 4. Столбцы «Прогноз заболевания» показывают прогнозируемую степень поражения биопсии с использованием классификации маркеров. в таблице 4 (Ecad / EMP / 5T4 / Ncad) или с использованием E-кадгерина, EMP1 и N-кадгерина (Ecad / EMP / Ncad).«A» отображается там, где невозможно предсказать. Z-значение отображается для каждого прогноза столбца. «A» отображается там, где невозможно было спрогнозировать оценку. Z-значение и соответствующее p-значение показаны для каждого прогноза столбца по сравнению с клиническим диагнозом.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0187449.s004

(TIF)

S5 Таблица. Локализация и экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4, N-кадгерина и CD44 в биоптатах T1 OSCC.

Столбец «Классификация» показывает прогнозируемое состояние биопсии (нормальная ткань — NT; аномальная — A) с использованием таблицы классификации маркеров, представленной в таблице 4.Столбцы «Прогноз заболевания» показывают прогнозируемую степень заболевания при биопсии с использованием таблицы классификации маркеров, представленной в таблице 4 (Ecad / EMP / 5T4 / Ncad), или с использованием E-кадгерина, EMP1 и N-кадгерина (Ecad / EMP / Ncad). «A» отображается там, где невозможно было спрогнозировать оценку. Z-значение и соответствующее p-значение показаны для каждого прогноза столбца по сравнению с клиническим диагнозом.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0187449.s005

(TIF)

S6 Таблица. Локализация и экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4, N-кадгерина и CD44 в биоптатах T4 OSCC.

Столбец «Классификация» показывает прогнозируемое состояние биопсии (нормальная ткань — NT; аномальное — A) с использованием таблицы классификации маркеров, представленной в таблице 4. Столбцы «Прогноз заболевания» показывают прогнозируемую степень поражения биопсии с использованием классификации маркеров. в таблице 4 (Ecad / EMP / 5T4 / Ncad) или с использованием E-кадгерина, EMP1 и N-кадгерина (Ecad / EMP / Ncad). «A» отображается там, где невозможно было спрогнозировать оценку. Z-значение и соответствующее p-значение показаны для каждого прогноза столбца по сравнению с клиническим диагнозом.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0187449.s006

(TIF)

S7 Таблица. Локализация и экспрессия E-кадгерина, EMP1, 5T4, N-кадгерина и CD44 в хирургическом крае дисплазии низкой степени, дисплазии высокой степени и биопсии T1 OSCC.

Столбец «Классификация» показывает прогнозируемое состояние биопсии (нормальная ткань — NT; аномальное — A) с использованием таблицы классификации маркеров, представленной в таблице 4. Столбцы «Прогноз заболевания» показывают прогнозируемую степень поражения биопсии с использованием классификации маркеров. в таблице 4 (Ecad / EMP / 5T4 / Ncad) или с использованием E-кадгерина, EMP1 и N-кадгерина (Ecad / EMP / Ncad).«A» отображается там, где невозможно предсказать. Z-значение и соответствующее p-значение показаны для каждого прогноза столбца по сравнению с клиническим диагнозом (то есть всем NT).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0187449.s007

(TIF)

Благодарности

Эта работа была поддержана грантами Исследовательского совета Соединенного Королевства в области биотехнологии и биологических наук (BB / K020277 / 1) и Исследовательского совета инженерных и физических наук (EP / H046070 / 1).

Ссылки

1. 1. Napier SS, Speight PM (2008) Естественная история потенциально злокачественных поражений и состояний полости рта: обзор литературы. Журнал оральной патологии и медицины 37: 1–10.
2. 2. Лю В., Ван Ю. Ф., Чжоу Х. В., Ши П., Чжоу З. Т., Тан Г. Ю. (2010) Злокачественная трансформация лейкоплакии полости рта: ретроспективное когортное исследование 218 китайских пациентов. BMC Cancer 10.
3. 3. Ho PS, Chen PL, Warnakulasuriya S, Shieh TY, Chen YK, Huang IY.(2009) Злокачественная трансформация потенциально злокачественных заболеваний полости рта у мужчин: ретроспективное когортное исследование. BMC Рак 9.
4. 4. Ogbureke KUE, Abdelsayed RA, Kushner H, Li L, Fisher LW (2010) Два члена семейства белков SIBLING, DSPP и BSP, могут предсказать переход эпителиальной дисплазии полости рта в плоскоклеточную карциному полости рта. Рак 116: 1709–1717. pmid: 20186700
5. 5. Хантер К.Д., Паркинсон Е.К., Харрисон П.Р. (2005) Мнение — Профилирование раннего рака головы и шеи.Обзоры природы Рак 5: 127–135. pmid: 15685196
6. 6. Омура К. (2014) Текущее состояние стратегий лечения рака полости рта: хирургическое лечение плоскоклеточного рака полости рта. Международный журнал клинической онкологии 19: 423–430. pmid: 24682763
7. 7. Slaughter DP, Southwick HW, Smejkal W (1953) Полевая канцеризация в многослойном плоском эпителии полости рта — клинические последствия мультицентрического происхождения. Рак 6: 963–968. pmid: 13094644
8. 8. Слотер Д.П. (1944) Множественность происхождения злокачественных опухолей.Хирургия Гинекология и акушерство 79: 89–98.
9. 9. Slaughter DP (1946) Многоцентровое происхождение внутриротовой карциномы. Хирургия 20: 133–146. pmid: 20992244
10. 10. Colucci S, ElGehani R, Flint S, Mothersill C (1997) мутации p53 и экспрессия белка в первичных культурах нормальной слизистой оболочки полости рта у курильщиков и некурящих. Онкология полости рта 33: 240–246. pmid: 9307713
11. 11. Nees M, Homann N, Discher H, Andl T, Enders C, Herold-Mende C и др.(1993) Экспрессия мутировавшего P53 происходит в эпителии, удаленном от опухоли, у больных раком головы и шеи — возможная молекулярная основа для развития множественных опухолей. Cancer Res 53: 4189–4196. pmid: 8364914
12. 12. Waridel F, Estreicher A, Bron L, Flaman JM, Fontolliet C, Monnier P и др. (1997) Полевая канцеризация и поликлональная мутация p53 в верхних отделах пищеварительного тракта. Онкоген 14: 163–169. pmid: 18
13. 13. Шоу Р.Дж., Хобкирк А.Дж., Николаидис Дж., Вулгар Дж. А., Триантафиллоу А., Браун Дж. С. и др.(2013) Молекулярная стадия хирургических границ при плоскоклеточной карциноме полости рта с использованием промоторного метилирования p16 (INK4A), цитоглобина, E-кадгерина и TMEFF2. Анналы хирургической онкологии 20: 2796–2802. pmid: 23111707
14. 14. Cavallaro U, Christofori G (2004) Адгезия клеток и передача сигналов кадгеринами и Ig-CAM при раке. Обзоры природы Рак 4: 118–132. pmid: 14964308
15. 15. von Zeidler SV, Botelho TD, Mendonca EF, Batista AC (2014) E-кадгерин как потенциальный биомаркер злокачественной трансформации при лейкоплакии полости рта: ретроспективное когортное исследование.БМС Рак 14.
16. 16. Каур Дж., Сони М., ДаттаГупта С., Шукла Н.К., Шривастава А., Уолфиш П.Г. и др. (2013) Клиническая значимость измененной экспрессии бета-катенина и E-кадгерина при оральной дисплазии и раке: потенциальная связь с экспрессией ALCAM. PLoS One 8.
17. 17. Чау С.Ю., Маджид А.А., Далли А.Дж., Чан А., Стейн С., Фарах К.С. (2012) Биомаркеры эпителиально-мезенхимального перехода (EMT) — E-кадгерин, бета-катенин, APC и виментин — в канцерогенезе и трансформации плоскоклеточных клеток полости рта.Онкология полости рта 48: 997–1006. pmid: 22704062
18. 18. Киродиму М., Андредис Д., Другу А., Аманатиаду Е.П., Анжелис Л., Барбатис С. и др. (2014) Дифференциальная экспрессия десмоглеина-3 / гамма-катенина и E-кадгерина / -катенина при лейкоплакии полости рта и плоскоклеточной карциноме. Клинические устные исследования 18: 199–210. pmid: 23430339
19. 19. Шридеви У., Джайн А., Нагалаксми В., Кумар УФ, Гоял С. (2015) Экспрессия E-кадгерина в нормальной слизистой оболочке полости рта, в предраковых поражениях полости рта и в карциномах полости рта.Eur J Dent 9: 364–372. pmid: 26430364
20. 20. Спенсер Х.Л., Истхэм А.М., Мерри ЦЛР, Саутгейт ТД, Перес-Кампо Ф., Сончин Ф. и др. (2007) E-cadherin ингибирует локализацию на клеточной поверхности промигрирующего онкофетального антигена 5T4 в эмбриональных стволовых клетках мыши. Молекулярная биология клетки 18: 2838–2851. pmid: 17507657
21. 21. Сонцин Ф., Мохамет Л., Эккардт Д., Ритсон С., Истхэм А.М., Бобола Н. и др. (2009) Отмена опосредованного E-кадгерином межклеточного контакта в эмбриональных стволовых клетках мыши приводит к обратимому LIF-независимому самообновлению.Стволовые клетки 27: 2069–2080. pmid: 19544408
22. 22. Сонцин Ф., Мохамет Л., Ритсон С., Хокинс К., Бобола Н., Зиф Л. и др. (2011) E-cadherin действует как регулятор транскриптов, связанных с широким спектром клеточных процессов в эмбриональных стволовых клетках мыши. Plos One 6: e21463. pmid: 21779327
23. 23. Mohamet L, Hawkins K, Ward CM (2011) Потеря функции е-кадгерина в эмбриональных стволовых клетках и актуальность для моделей онкогенеза. J Oncol 2011: 352616. pmid: 21197469
24. 24.Eastham AM, Spencer H, Soncin F, Ritson S, Merry CLR, Stern PL и др. (2007) Эпителиально-мезенхимальные переходные процессы во время дифференцировки эмбриональных стволовых клеток человека. Исследования рака 67: 11254–11262. pmid: 18056451
25. 25. Taylor V, Welcher AA, Program AE, Suter U (1995) Белок-1 эпителиальной мембраны, белок 22 периферического миелина и белок 20 мембраны хрусталика определяют новое семейство генов. J Biol Chem 270: 28824–28833. pmid: 7499407
26. 26. Bangsow T, Baumann E, Bangsow C, Jaeger MH, Pelzer B., Gruhn P, et al.(2008) Белок эпителиальной мембраны 1 представляет собой новый белок плотных контактов гематоэнцефалического барьера. J Cereb Blood Flow Metab 28: 1249–1260. pmid: 18382472
27. 27. Zhou JP, Tao DT, Xu Q, Gao ZL, Tang DF (2015) Экспрессия E-кадгерина и виментина при плоскоклеточной карциноме полости рта. Международный журнал клинической и экспериментальной патологии 8: 3150–3154. pmid: 26045832
28. 28. Noutomi Y, Oga A, Uchida K, Okafuji M, Ita M, Kawauchi S и др. (2006) Сравнительная геномная гибридизация показывает генетическое прогрессирование плоскоклеточной карциномы полости рта от дисплазии двумя разными опухолевыми путями.Журнал патологии 210: 67–74. pmid: 16767698

p16 как диагностический маркер неоплазии шейки матки: исследование 796 архивных образцов тканевым микрочипом | Диагностическая патология