Разное

Серонегативный результат это: ГОАУЗ «МОЦСВМП» — Тестирование

15.09.2000

Содержание

ГОАУЗ «МОЦСВМП» — Тестирование

ТЕСТИРОВАНИЕ 

  Как проходит ВИЧ-диагностика? Все о подготовке и интерпретации результатов исследования
  Обследование на ВИЧ. Кому и когда следует проходить тестирование?
  Какие анализы выявляют ВИЧ
  «ПЕРИОД ОКНА» 
  Экспресс-тесты на ВИЧ. Можно ли им доверять?

 

Как проходит ВИЧ-диагностика?

Все о подготовке и интерпретации результатов исследования

 Тестирование на ВИЧ – простая и безболезненная процедура. Как она проходит, нужно ли готовиться, что показывают результаты тестов. 

 

 По доброй воле

 Обследование на ВИЧ в большинстве случаев – дело добровольное, поэтому осуществляется только после получения информированного согласия пациента.

 

Как сдавать анализ

 Кровь забирают на анализ в процедурном кабинете. Забор крови производится из локтевой вены в количестве 3-5 мл в стерильную пробирку. Кровь можно сдавать как утром натощак, так и в любое время суток после приёма пищи.

 Риск заражения ВИЧ при обследовании

 В медицинских учреждениях используются только одноразовые инструменты, либо они проходят качественную стерилизацию. При сдаче крови заразиться ВИЧ невозможно.

 Виды результатов тестирования

 Результаты первичной диагностики ВИЧ бывают трёх видов – положительный, отрицательный и сомнительный.

 Если результат положительный

 Положительный результат означает, что тест-системой в образце крови обнаружены антитела к ВИЧ, это может говорить о том, что у вас действительно есть ВИЧ-инфекция. Положительный результат в ИФА обязательно подтверждают в иммунном блоте с тем же образцом крови. В редких случаях результат бывает ложноположительным. Ложноположительные результаты бывают при вирусной инфекции у беременных, и при аутоиммунных заболеваниях. Положительный результат могут по-другому называть серопозитивным или статусом ВИЧ+.

 Если результат отрицательный

 Отрицательный результат говорит о том, что в крови антитела к ВИЧ не обнаружены – то есть, ВИЧ-инфекции нет. Или о том, что заражение ВИЧ произошло недавно и количество антител ниже пороговых значений, определяемых тест-системой, то есть, длится период «окна». Если недавно имела место опасная ситуация относительно заражения ВИЧ, то обследование желательно повторить через три месяца и шесть месяцев. Отрицательный результат по-другому называют серонегативным, или ВИЧ.

 Если результат сомнительный

 Достаточно редко результаты тестов бывают сомнительными. Это может быть в двух случаях: когда человек недавно заразился ВИЧ и для обнаружения обычными тест-системами концентрация антител недостаточна, или когда ВИЧ отсутствует, но есть другие хронические заболевания – обменного или аутоиммунного характера. Поэтому проводить тестирование сразу после опасного контакта нецелесообразно. Если сомнительный результат был получен при обследовании иммуноферментным методом, обычно дополнительно проводят подтверждающий анализ с помощью иммуноблота. При сохранении сомнительного результата обследование повторяют через 1-3 месяца и наблюдают пациента в течение полугода.

 

Обследование на ВИЧ.

Кому и когда следует проходить тестирование?

 Обычно тест на ВИЧ является строго добровольной процедурой. Однако существуют обстоятельства, когда обследоваться на ВИЧ-инфекцию просто необходимо.

 В глазах общества обследование на ВИЧ до сих пор выглядит необычно и даже странно. Возможно, ваши знакомые и родные, узнав о ваших планах пройти тестирование, заподозрят вас в «плохом» поведении. А зря. Потому что обследование на ВИЧ – это, прежде всего, признак заботы о своём здоровье.

 Обследование по желанию

 Тестирование на ВИЧ в большинстве случаев носит добровольный характер. Бывают случаи, когда обследование на ВИЧ является обязательным.

 Половая активность

 Обследоваться на ВИЧ следует каждому, кто начинает вести половую жизнь. Оптимально выяснить ВИЧ-статус партнёра ещё до вступления с ним в интимные отношения. Если это не удалось сделать, то обследоваться на ВИЧ-инфекцию нужно через 3 месяца после начала половой жизни. То же самое касается и ситуации смены полового партнёра. Если на протяжении долгого времени половой партнёр всегда постоянный, то необходимости в периодическом обследовании на ВИЧ нет.  

 Обследование после опасных ситуаций

 В ситуации случайного полового контакта с партнёром, ВИЧ-статус которого неизвестен, информативное определение антител к ВИЧ в крови возможно только через три месяца. Первые три месяца после инфицирования ВИЧ длится период «окна», когда антитела к вирусу только начинают вырабатываться и их уровень – ниже порогового значения, определяемого тест-системами.  

 Аналогичная ситуация – при подозрении заражения через кровь, например, при употреблении инъекционных наркотиков нестерильным шприцем. После опасных, с точки зрения заражения ВИЧ, ситуаций при отрицательных результатах первого обследования повторные анализы желательно сдавать каждые три месяца в течение года.

 Если есть признаки болезни

 Иногда анализ крови на ВИЧ необходим по клиническим признакам – например, если у человека имеется выраженный иммунодефицит или есть клинические признаки, позволяющие заподозрить ВИЧ-инфекцию или СПИД. Рекомендовано обследование также при выявлении заболеваний, передающихся половым путём, гепатита В или С, туберкулёза. 

 Представители некоторых профессий

 Представителям ряда профессий, которые при работе непосредственно контактируют с кровью и биологическими жидкостями – врачам, лаборантам, медицинским сёстрам – анализ крови на ВИЧ-инфекцию следует делать ежегодно. Кроме того, обследоваться нужно медицинским работникам СПИД-центров, которые постоянно контактируют с ВИЧ-позитивными.

 Контакты с ВИЧ-положительными

 Особенно важно тестирование для лиц, контактирующих с ВИЧ-инфицированными, в том числе в быту. Людям, имеющим регулярные половые контакты с ВИЧ-инфицированным, нужно обследоваться каждые три месяца, даже при условии постоянного использования презерватива.

 После переливания крови и трансплантации

 Пациентам, которым переливались компоненты крови (особенно это касается эритроцитарной массы), через три месяца желательно сделать исследование на ВИЧ. То же самое касается тех, кому были пересажены донорские органы и ткани.

 Обследование беременных

 Обследоваться на ВИЧ также нужно беременным женщинам на ранних сроках – при обращении в женскую консультацию. При отрицательном результате тестирование повторяют в третьем триместре беременности, чтобы исключить период «окна».

 Обследование детей, рождённых от ВИЧ-позитивных женщин

 Что касается детей, рождённых от ВИЧ-инфицированных женщин, в течение первых 12-18 месяцев анализ крови на антитела к ВИЧ проводить нецелесообразно. Дело в том, что при беременности материнские антитела к ВИЧ переносятся с кровью к плоду и сохраняются у ребёнка в крови до 18-ти месяцев даже при отсутствии ВИЧ-инфекции. Таким образом, новорожденным или выполняют ПЦР-диагностику ВИЧ, или после 18-ти месяцев – анализ на антитела к ВИЧ.

 Обследование представителей групп риска по заражению ВИЧ

 Людям из групп риска по заражению ВИЧ – гомосексуалам и коммерческим секс-работникам – следует тестироваться на ВИЧ каждые три месяца, независимо от того, пользуются ли они презервативом при половых контактах. Употребляющим наркотики также нужно обследоваться регулярно, раз в три месяца, в том числе и тем, кто употребляет неинъекционные формы наркотиков.

 Повторное обследование

 Повторные и дальнейшие тесты на ВИЧ-инфекцию определяются специалистом на основании результатов первоначального обследования, клинических данных и в зависимости от ситуации. 

 

Какие анализы выявляют ВИЧ

 Согласно Федеральному закону №38-ФЗ «О предупреждении распространения в Российской Федерации заболевания, вызываемого вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ-инфекции)», каждый гражданин Российской Федерации имеет право проходить добровольное анонимное тестирование, чтобы определить свой ВИЧ-статус.

 Есть несколько разных анализов, по результатам которых можно точно понимать: есть вирус в организме или нет и вопросы о тестировании, вероятно, самые актуальные не только для ВИЧ-положительных, но и для тех, кто делает тесты ради профилактики.

 Начать, наверное, следует с того, как же происходила эволюция тестов на ВИЧ. Впервые тесты на ВИЧ стали делать в 1985 году. На тот момент основной целью тестирования было выявление инфекции в донорской крови. Так как лекарства от ВИЧ на тот момент не было, то и стимул делать этот тест тоже отсутствовал.

 В дальнейшем были разработаны антиретровирусные препараты, которые стали большим шагом, в лечении ВИЧ-инфекции. Поэтому и тестированию стали уделять, гораздо больше внимания не только врачи, но и люди, заботящиеся о своем здоровье. Всего за историю развития тестов на ВИЧ их было разработано несколько поколений. Тесты с первого по третье поколение могут найти в крови только антитела. Они выделяются в крови иммунной системой в ответ на появление чужеродного микроорганизма, в данном случае вируса. Большинство этих тестов действует методом иммунноферментного анализа (ИФА). Такие тесты также называют «косвенным тестированием». Первый тест выявлял антитела, используя обработанный ультразвуком вирус, назывался он лизатным. Это первый тест, который смог выявить в организме ВИЧ. Однако, выявлять он мог только ВИЧ1. А еще тест первого поколения был не слишком чувствительным и специфичным, поэтому требовал доработки.

 Следующий виток развития в изучении ВИЧ приходится на вторую половину XX века, точнее на 80-е годы. Тесты второго поколения были разработаны в это время. Они уже могли определять антитела к ВИЧ1 и ВИЧ2. Для определения наличия антител использовались рекомбинантный и/или пептидный методы. При рекомбинантном методе использовались генно-модифицированные белки, которые были аналогичны белковым антигенам вируса. При пептидном методе использовались фрагменты белков, которые были синтезированы искусственным, химическим способом.

 В 90-х годах появились тесты третьего поколения. Их главное отличие в том, что они обладают более высокой чувствительностью. Это тестирование основано на специфическом взаимодействии антитела, вырабатываемого организмом и враждебным антигеном вируса.

 Сейчас чаще всего используют тест четвертого поколения. Он, как и предыдущие тесты, определяет антитела, но вместе с этим, он еще чувствителен к антигенам ВИЧ. Это сокращает серонегативный период и дает более точные результаты.

 Иммунноферментный метод тестирования или ИФА в настоящее время является наиболее популярным и применяемым. Точность его составляет около 99%. Но кроме иммунноферментного анализа, часто применяют и другие методы определния ВИЧ. Если ИФА, как правило, проводят как скрининг-тест, т.е. при первичном обследовании, то для постановки точного диагноза ВИЧ применяют иммунный блоттинг. Он гораздо сложнее в проведении, но дает более точный результат, потому что чувствительнее и специфичнее. Для ИБ также используется кровь из вены, после чего она проходит специальную обработку, а затем наносится на специальную полосу нейлонового фильтра или нитроцеллюлозы. Происходит реакция и результат отображается на полоске – его становится видно. Если на определенных местах полоски появились полосы, тогда это становится подтверждением того, что в крови содержатся антитела к ВИЧ.

 Еще одним методом выявления ВИЧ в организме является полимеразная цепная реакция (ПЦР). Однако он гораздо более сложен в применении и требует большого умения. ПЦР-анализ исследует нуклеиновые кислоты, а это ДНК и РНК, таким образом, получается, что он определяет генетический материал микроорганизма. Этот метод исследования очень точный — до 98% — 99%. Но необходимы качественные реагенты и высококвалифицированные профессионалы, которые смогут правильно провести исследование и поставить диагноз.

 Это наиболее популярные в настоящее время методы тестирования на ВИЧ. Как уже говорилось выше, ни один тест не может дать результат с точностью 100%. Поэтому всегда для подтверждения применяется дополнительный метод. Только при прохождении нескольких методов тестирования врачи смогут поставить окончательный диагноз. Какое же тестирование будет проводиться для пациента, также определяет врач, исходя из индивидуальных особенностей организма.

 

«ПЕРИОД ОКНА» 

 У каждого, ну или почти у каждого, человека в жизни могут возникать ситуации, в которых он рискует заразиться ВИЧ.

 К сожалению, иногда таких ситуаций избежать крайне сложно, да и возникать они могут абсолютно спонтанно.

 Что же делать, если есть подозрение, даже самое маленькое, что вы заразились?

 Конечно же, нужно пройти тестирование, чтобы сомнений не оставалось. И вот, тестирование пройдено, прошло томительное ожидание результатов, и вам сообщают, что результаты отрицательны. Казалось бы, что уже можно успокоиться, но врач говорит вам о каком-то загадочном «периоде окна», иногда называя это непонятное «окно» серонегативным. И страх начинает возвращаться. Чтобы этого страха не было, мы расскажем о серонегативном окне – объясним, что значит этот термин, сколько этот период длится, и как вести себя в это время. 

Итак, «период окна», серонегативное, сероконверсионное окно –это период времени, когда инфекционный агент (вирус, бактерия и др.) уже попал в организм и размножается, но антитела в крови больного еще не появились. 

 В настоящее время, тесты на определение ВИЧ не определяют сам вирус в организме. Они могут определить только наличие антител или антигенов (антитело – это белок, который вырабатывает иммунная система в ответ на появление в организме чужеродных молекул. Антиген – это молекулярные компоненты, которые несут в себе чужеродную генетическую информацию).

 Но организм по-разному реагирует на появление вируса, соответственно и вырабатывать антитела начинает в разный период – от 2 недель до 6 месяцев. Антигены в организме появляются сразу, но их концентрация может быть настолько мала, что тест не сможет их определить, и в этот период человек получит отрицательный результат теста на ВИЧ. Так вот именно этот период – от момента заражения до появления антител – и называется «периодом окна».

 Поэтому врачи, для точного определения наличия ВИЧ в организме, советуют делать тест несколько раз – через 2 и 6 месяцев после момента, когда человек мог заразиться.

 Очень важно помнить, что даже если ваши тесты показывают отрицательный результат, но вы подозреваете, что могли заразиться ВИЧ, стоит быть очень аккуратным, до тех пор, пока не будет окончательного результата вашего тестирования. Потому что вирус может жить и развиваться в организме, содержаться в крови и выделениях, и человек может являться не только носителем, но и потенциальным распространителем заболевания.

 Если вы подозреваете, что могли заразиться ВИЧ, вы должны понимать и отдавать себе отчет, что теперь на вас лежит ответственность, потому что вы можете заразить близких вам людей.

 Даже если спустя время окажется, что опасения были напрасными, и тест на ВИЧ оказался отрицательным, предпринятые меры предосторожности не окажутся лишними. Потому что таким образом вы минимизируете возможность инфицирования другими серьезными заболеваниями. Всегда важно помнить об элементарных средствах профилактики, которые помогут вам остаться здоровыми и не дадут заболеть близким вам людям.

 

Экспресс-тесты на ВИЧ. Можно ли им доверять?

По статистике 30% от общегочисла больных ВИЧ в нашей стране даже не догадываются о том, что у них есть это заболевание. А это значит, что они очень рискуют запустить болезнь и перевести ее в СПИД. Но кроме этого они подвергают риску окружающих людей, а значит: заболевание распространяется, и заболеть может каждый.

 Как же этого избежать? Очень просто – надо хотя бы раз в год проводить тестирование на ВИЧ. Для этого в каждом городе есть специализированные центры, где каждый может пройти обследование и быть уверенным в своем статусе. Но иногда случаются ситуации, когда оперативно пройти полноценное медицинское тестирование нет возможности. Для таких ситуаций придумали прекрасный выход – экспресс-тесты на ВИЧ. С развитием технологий они становятся все более точными и во многом не уступают лабораторному тестированию. С каждым годом их становятся все больше, выбор становится все разнообразнее. Для того, чтобы вам ориентироваться в этом многообразии, мы попытаемся рассказать основные моменты про экспресс-тесты.

 Начать следует с того, что существует 3 вида экспресс-тестов:

-по образцу слюны;

-по образцу мочи;

-по образцу крови.

 Самым популярным экспресс-тестом является тест по образцу слюны. Это не удивительно, ведь он самый простой в использовании и не требует сложных манипуляций, или нарушения кожного покрова. Кроме того, этот тест минимизирует возможность передачи ВИЧ. Он представляет собой устройство, которое можно применить лишь один раз. Для определения наличия вируса иммунодефицита человека, необходимо собрать околодесную жидкость – слюну. Результат будет готов уже через 20 минут. Тест определяет наличие в организме ВИЧ 1 и 2 типов. Точность теста достаточно высока, по некоторым данным она приближается к 99%. Однако, как утверждают специалисты, если тест дал положительный результат, не нужно бить в набат и ставить себе окончательный диагноз. В любом случае, для точного результата необходимо пройти обследование в специализированном учреждении.

 Экспресс-тест, в котором для определения ВИЧ используется образец мочи, менее популярен, и является скорее дополнительным тестом, нежели основным. По форме проведения он очень похож на тест на беременность. Нужно собрать мочу в баночку и окунуть туда полоску. Результат будет готов в течение 10-20 минут.

 Ну и, наконец, один из самых точных, но самых «опасных», экспресс-тестов – по образцу крови. Для определения ВИЧ в организме необходимо взять кровь из пальца и опустить в прибор. Сложность данного теста, с одной стороны, в том, что нужно нарушать кожный покров, а значить создавать дополнительный риск инфицирования, с другой – вирус в крови из пальца может храниться не более 2-3 минут, поэтому материал нужно сразу использовать для определения результатов тестирования.

 Экспресс-тесты можно проводить и в домашних условиях, если на это есть серьезные причины. Нужно помнить о том, что для повышения точности тестирования нужно соблюдать меры предосторожности и дезинфекции, четко следовать инструкции. Ну а если эту инструкцию прочитать полностью, то можно увидеть там информацию о том, что для подтверждения результатов экспресс-тестов нужно пройти повторное тестирование в специализированном центре или в поликлинике. Об этом не стоит забывать, чтобы иметь 100% результат и быть уверенным в своем статусе.  

Анти-HCV (Anti-HCV)

Анти-HCV (Anti-HCV)

Anti-HCV-специфические иммуноглобулины классов IgM и IgG к белкам вируса гепатита С, свидетельствующие о возможной инфицированности или ранее перенесённой инфекции. Вирус гепатита С (ВГС) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает клетки печени и вызывает гепатит. Основной путь передачи инфекции – через кровь (при переливании элементов крови и плазмы, пересадке донорских органов, через нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга). Вероятна передача вируса при половом контакте и от матери ребёнку во время родов, но это происходит реже. Специфические иммуноглобулины вырабатываются к ядру (нуклеокапсидному белку core), оболочке (нуклеопротеинам Е1-Е2) и фрагментам генома вируса (неструктурным белкам NS). У большинства больных ВГС первые антитела появляются через 1-3 месяца после инфицирования, но иногда могут отсутствовать в крови больше года. В 5 % случаев антитела к вирусу так никогда и не обнаруживаются. При этом о ВГC будет свидетельствовать выявление суммарных антител к антигенам вируса. В острый период болезни образуются антитела классов IgM и IgG к нуклеокапсидному белку core. В период латентного течения инфекции и при её реактивации в крови присутствуют антитела класса IgG к неструктурным белкам NS и нуклеокапсидному белку core.
После перенесённой инфекции специфические иммуноглобулины циркулируют в крови 8-10 лет с постепенным снижением концентрации или сохраняются пожизненно в очень низких титрах. Они не защищают от вирусной инфекции и не снижают риска повторного заражения и развития заболевания.

Подготовка к исследованию

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Показания к исследованию

Для диагностики вирусного гепатита С.
Для дифференциальной диагностики гепатитов.
Для выявления ранее перенесённого вирусного гепатита С.

Интерпретация

Референсные значения — отрицательно

Причины положительного результата:
острый или хронический вирусный гепатит С;
ранее перенесённый вирусный гепатит С.
Причины отрицательного результата:
отсутствие вируса гепатита С в организме;
ранний период после инфицирования;
отсутствие антител при вирусном гепатите С (серонегативный вариант, около 5 % случаев).

На результаты могут влиять

При неправильном взятии и хранении материала может быть получен недостоверный результат.
Ревматоидный фактор в крови способствует ложноположительному результату.
При положительном результате для подтверждения диагноза «вирусный гепатит С» выполняется тест с определением структурных и неструктурных белков вируса – тест, подтверждающий наличие антигена вируса гепатита С  (NS, Core).
При имеющихся факторах риска заражения и подозрении на вирусный гепатит С рекомендовано определение РНК вируса в крови методом ПЦР даже при отсутствии специфических антител.

Назначается в комплексе с

Тест, подтверждающий наличие антигена вируса гепатита С (антитела к структурным и неструктурным белкам NS, Core вируса гепатита С)
HCV, РНК, ПЦР ( в плазме, мононуклеарах)качественный
HCV, РНК, ПЦР ) в плазме, мононуклеарах) количественный

Генотипирование вируса гепатита С (1а, 1b, 2a,2b,3a)
anti-HAV, IgM
HBsAg
Биохимический анализ крови при заболеваниях ЖКТ

Тромбиновое время
Фибриноген
 

Определение антител к бледной трепонеме (Treponema pallidum)(антитела суммарные к возбудителю сифилиса)

Краткое описание:
Это выявление суммарных антител класса M и G к возбудителю сифилиса, которое может использоваться как эффективный сверхчувствительный скрининговый тест для диагностики раннего инфицирования сифилисом.

Синонимы русские:Суммарные антитела к возбудителю сифилиса (бледной трепонеме), антитела к антигенам Treponema pallidum IgG/IgM.
Синонимы английские:Syphilis IgM, IgG; Treponema pallidum Antibodies, Total; Antibodies to T. pallidum, IgM/IgG, Anti-Treponema pallidum IgG/IgM.

Метод исследования: Иммуноферментный анализ.

Тип биоматериала:Венозная кровь.

Тип пробирки:вакутейнер с активатором свертывания крови и гелем (красная крышка с желтым кольцом)

Цена услуги:239руб

Срок выполнения: 1 рабочий день

Подготовка к исследованию:  
• Не принимать пищу в течение 12 часов перед исследованием.
• Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение за 30 минут до исследования.
Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Референсные значения

Результат: отрицательно.

Положительный результат означает, что у пациента недавно приобретенное инфицирование. Вместе с тем отрицательный результат не всегда означает, что у пациента нет сифилиса.

Положительный результат

Положительный результат у ранее серонегативного пациента, а также значительный прирост титров в парных сыворотках, взятых с интервалом 7 дней, говорит о первичной инфекции. Обнаружение антител к трепонеме в крови новорожденного помогает подтвердить диагноз «врожденный сифилис».
Кроме того, причиной положительного результата может быть третичный или скрытый сифилис.

Отрицательный результат

Отрицательный результат анализа может свидетельствовать об отсутствии инфицирования или слишком раннем его сроке, когда не выработался иммунный ответ. При этом отсутствие антител у младенца, родившегося от инфицированной матери, не исключает врожденного заболевания, поскольку на момент исследования антитела могут еще не сформироваться.

Что может влиять на результат?

Могут отмечаться ложноположительные результаты при таких заболеваниях, как ВИЧ, болезнь Лайма, малярия, системная красная волчанка, некоторые виды пневмоний, а также при наркомании и беременности.

Код А26.06.082.002

Сифилис. Иммуноферментный анализ на выявление суммарных антител класса M и G к возбудителю сифилиса

Что это за анализ? Это выявление суммарных антител класса M и G к возбудителю сифилиса, которое может использоваться как эффективный сверхчувствительный скрининговый тест для диагностики раннего инфицирования сифилисом.

На данный момент Реакция Вассермана считается устаревшей, и с 2006 года для диагностики сифилиса почти не применяется. Ее заменили более чувствительные и современные анализы. Однако на бланках до сих пор выводят неизменное «RW». Подпись «RW » — это дань традиции, маленькое негласное правило среди врачей: оставляя старую подпись, сейчас имеют в виду новые современные анализы на сифилис.

Какой биоматериал можно использовать для исследования? Венозную кровь

Treponema pallidum (бледная трепонема) – бактерии, которая вызывает сифилис – хроническое венерическое инфекционное заболевание, которое чаще всего передается половым путем, например при прямом контакте с сифилитической язвой (твердым шанкром), также возможно внутриутробное заражение.

Источником инфекции является больной человек. Сифилис легкоизлечим, но грозит серьезными проблемами со здоровьем при бездействии. Инфицированная мать способна передавать заболевание своему плоду, у которого могут развиться серьёзные и необратимые изменения.

Сифилис относят к классическим заболеваниям, передающимся половым путем (венерическим болезням). Возбудитель – бледная трепонема (Treponema pallidum). Сифилис характеризуется медленным прогрессирующим течением. На поздних стадиях он может приводить к тяжелым поражениям нервной системы и внутренних органов

Симптомы сифилиса

 Симптомы сифилиса очень разнообразны. Они меняются в зависимости от стадии заболевания. Выделяют три стадии сифилиса:

Первичный сифилис возникает после окончания инкубационного периода. В месте проникновения возбудителя в организм (половые органы, слизистая рта или прямой кишки) возникает безболезненная язва с плотным основанием (твердый шанкр). Через 1-2 нед после возникновения язвы увеличиваются ближайшие лимфатические узлы (при локализации язвы во рту увеличиваются подчелюстные, при поражении половых органов – паховые). Язва (твердый шанкр) самостоятельно заживает в течение 3-6 нед. после возникновения.

Вторичный сифилис начинается через 4-10 нед после появления язвы (2-4 мес. после заражения). Он характеризуется симметричной бледной сыпью по всему телу, включая ладони и подошвы. Возникновение сыпи нередко сопровождается головной болью, недомоганием, повышением температуры тела (как при гриппе). Увеличиваются лимфатические узлы по всему телу. Вторичный сифилис протекает в виде чередования обострений и ремиссий (бессимптомных периодов). При этом возможно выпадение волос на голове, а также появление разрастаний телесного цвета на половых органах и в области заднего прохода (широкие кондиломы).

Третичный сифилис возникает в отсутствие лечения через много лет после заражения. При этом поражается нервная система (включая головной и спинной мозг), кости и внутренние органы (включая сердце, печень и т. д.).

При заражении во время беременности у ребенка возможен врожденный сифилис.

Осложнения сифилиса

По результатам научных исследований, в отсутствие лечения примерно у трети больных развивается третичный сифилис. Примерно четверть больных из-за него погибает. Врожденный сифилис может приводить к тяжелым поражениям или смерти ребенка.

Лечение сифилиса

Достаточно сложное и требует дальнейшего длительного наблюдения. Стоит отметить, что лечение сифилиса на ранних стадиях не представляет особенной сложности с точки зрения выбора препаратов. Особенность бледной трепонемы заключается в том, что она все еще сохраняет чувствительность к пенициллину, который является препаратом выбора при сифилисе.

В случае аллергии на пенициллин назначают антибиотики из ряда макролидов (эритромицин,кларитромицин) или цефалоспоринов (цефтриаксон и тд). Препараты назначаются внутримышечно или в таблетках. Лечение активных форм заболевания проходит в стационарных условиях, пациенты с латентной формой могут получать амбулаторную терапию. Длительность лечения зависит от стадии заболевания и может занимать от нескольких недель до нескольких лет.

Антитела к возбудителю сифилиса

 Когда происходит контакт человека с T. pallidum, его иммунная система реагирует, вырабатывая антитела к бактерии. В крови могут быть обнаружены два вида антител к бледной трепонеме: IgM и IgG. В ответ на инфицирование T. pallidum антитела IgM к T. pallidum вырабатываются организмом в первую очередь. Они выявляются у большинства пациентов в конце второй недели заболевания и присутствуют у них в первичную и вторичную стадию. Иммуноглобулины класса G к T. pallidum в определяемых количествах появляются в крови через 3-4 недели после инфицирования. Концентрация их нарастает и на 6-й неделе начинает преобладать над концентрацией IgM, достигая максимума, а затем сохраняется на определённом уровне в течение длительного времени. Начиная с 4-й недели в крови нарастает количество обоих видов иммуноглобулинов, что ведет к положительному результату теста на суммарные антитела к T. Pallidum. Это позволяет использовать данное исследование для ранней диагностики инфицирования T. pallidum. После эффективного лечения концентрация иммуноглобулинов постепенно снижается, но происходит это медленно, в отдельных случаях антитела могут обнаруживаться спустя год и более. От сифилиса можно избавиться с помощью антибиотиков, причём предпочтительно применять производные пенициллина. На ранней стадии заболевание лечится легче и быстрее. Более длительная терапия может понадобиться для пациентов, инфицированных больше года.

Зачем проводится анализ?

Повышение и понижение показателей

Для диагностики сифилиса. Для обследования всех беременных с профилактической целью (желательно на первом приеме гинеколога, при постановке на учет).

Когда назначается исследование? При симптомах сифилиса, таких как твердый шанкр на половых органах или в горле. Когда пациент лечится от другого ЗППП, например от гонореи. При ведении беременности, потому что сифилис может передаться развивающемуся плоду и даже убить его. Когда необходимо определить точную причину заболевания, если у пациента неспецифические симптомы, которые схожи с сифилисом (нейросифилисом). Если пациент инфицирован, он должен повторить анализ на сифилис через 3, 6, 12 и 24 месяца, чтобы убедиться, что лечение прошло успешно.

Результаты/Норма/Расшифровка анализа

Референсные значения (значения в норме)

Результат: отрицательно. Отношение S/CO (signall/cutoff): 0 — 0,9.

Положительный результат означает, что у пациента недавно приобретённое инфицирование. Вместе с тем отрицательный результат не всегда означает, что у пациента нет сифилиса.

Положительный результат

Положительный результат у ранее серонегативного пациента, а также значительный прирост титров в парных сыворотках, взятых с интервалом 7 дней, говорит о первичной инфекции. Обнаружение антител к трепонеме в крови новорождённого помогает подтвердить диагноз «врождённый сифилис». Кроме того, причиной положительного результата может быть третичный или скрытый сифилис.

Отрицательный результат

Отрицательный результат анализа может свидетельствовать об отсутствии инфицирования или слишком раннем его сроке, когда не выработался иммунный ответ. При этом отсутствие антител у младенца, родившегося от инфицированной матери, не исключает врождённого заболевания, поскольку на момент исследования антитела могут ещё не сформироваться.

Подготовка к сдаче анализа

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови

Что может повлиять на результат анализа?

Могут отмечаться ложноположительные результаты при таких заболеваниях, как ВИЧ, болезнь Лайма, малярия, системная красная волчанка, некоторые виды пневмоний, а также при наркомании и беременности. И многие другие соматические заболевания.

 Важные замечания

  • Обследование на сифилис обязательно должно быть комплексным и включать в себя учёт анамнеза, клинической картины и подтверждение диагноза лабораторными данными.
  • Людям, ведущим активную сексуальную жизнь, необходимо консультироваться с врачом насчёт любых подозрительных высыпаний или болей в области половых органов.
  • Если у пациента выявлено инфицирование, ему необходимо поставить в известность и своего сексуального партнера (партнершу), чтобы он (она) тоже прошел обследование и при необходимости лечение.
  • При сифилисе риск заражения другими заболеваниями, передающимися половым путем, повышается, в том числе риск заражения ВИЧ, который ведёт к СПИДу.

• Сифилис может также передаваться при переливании крови через загрязненные медицинские инструменты, поэтому перед госпитализацией в стационар очень важно проводить обследование.

 

Шапилова Н.В.

Anti-HCV, антитела, ИФА: исследования в лаборатории KDLmed

Anti-HCV – специфические иммуноглобулины классов IgM и IgG к белкам вируса гепатита С, свидетельствующие о возможной инфицированности или ранее перенесённой инфекции.

Синонимы русские

Суммарные антитела к вирусу гепатита С, антиHCV.

Синонимы английские

Antibodies to Hepatitis C Virus, IgM, IgG; HCVAb, Total.

Метод исследования

Иммунохемилюминесцентный анализ.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (ВГС) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает клетки печени и вызывает гепатит. Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и ассоциирован с развитием криоглобулинемии, болезни Шегрена и В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний. Среди всех возбудителей вирусных гепатитов у ВГС наибольшее количество вариаций, а благодаря высокой мутационной активности он способен избегать защитных механизмов иммунной системы человека. Существует 6 генотипов и множество субтипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза заболевания и эффективности противовирусной терапии.

Основной путь передачи инфекции – через кровь (при переливании элементов крови и плазмы, пересадке донорских органов, через нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга). Вероятна передача вируса при половом контакте и от матери ребёнку во время родов, но это происходит реже.

Острый вирусный гепатит, как правило, протекает бессимптомно и остаётся невыявленным в большинстве случаев. Только у 15 % инфицированных заболевание протекает остро, с тошнотой, ломотой в теле, отсутствием аппетита и потерей веса, редко оно сопровождается желтухой. У 60-85 % заражённых развивается хроническая инфекция, что в 15 раз превышает частоту хронизации при гепатите В. Для хронического вирусного гепатита С характерна «волнообразность» с повышением печёночных ферментов и слабовыраженными симптомами. У 20-30 % больных заболевание приводит к циррозу печени, увеличивая риск развития печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы.

Специфические иммуноглобулины вырабатываются к ядру (нуклеокапсидному белку core), оболочке (нуклеопротеинам Е1-Е2) и фрагментам генома вируса (неструктурным белкам NS). У большинства больных ВГС первые антитела появляются через 1-3 месяца после инфицирования, но иногда могут отсутствовать в крови больше года. В 5 % случаев антитела к вирусу так никогда и не обнаруживаются. При этом о ВГC будет свидетельствовать выявление суммарных антител к антигенам вируса.

В острый период болезни образуются антитела классов IgM и IgG к нуклеокапсидному белку core. В период латентного течения инфекции и при её реактивации в крови присутствуют антитела класса IgG к неструктурным белкам NS и нуклеокапсидному белку core.

После перенесённой инфекции специфические иммуноглобулины циркулируют в крови 8-10 лет с постепенным снижением концентрации или сохраняются пожизненно в очень низких титрах. Они не защищают от вирусной инфекции и не снижают риска повторного заражения и развития заболевания.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики вирусного гепатита С.
  • Для дифференциальной диагностики гепатитов.
  • Для выявления ранее перенесённого вирусного гепатита С.

Когда назначается исследование?

  • При симптомах вирусного гепатита и повышении уровня печёночных трансаминаз.
  • Если известно о перенесённом гепатите неуточненной этиологии.
  • При обследовании людей из группы риска по заражению вирусным гепатитом С.
  • При скрининговых обследованиях.

Что означают результаты?

Референсные значения

Результат: отрицательно.

Отношение S/CO (signal/cutoff): 0 — 1.

Причины положительного результата:

  • острый или хронический вирусный гепатит С;
  • ранее перенесённый вирусный гепатит С.

Причины отрицательного результата:

  • отсутствие вируса гепатита С в организме;
  • ранний период после инфицирования;
  • отсутствие антител при вирусном гепатите С (серонегативный вариант, около 5 % случаев).

Что может влиять на результат?

  • При неправильном взятии и хранении материала может быть получен недостоверный результат.
  • Ревматоидный фактор в крови способствует ложноположительному результату.

Важные замечания

  • При положительном результате для подтверждения диагноза «вирусный гепатит С» выполняется тест с определением структурных и неструктурных белков вируса (NS, Core).
  • При имеющихся факторах риска заражения и подозрении на вирусный гепатит С рекомендовано определение РНК вируса в крови методом ПЦР даже при отсутствии специфических антител.

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Инфекционист, гепатолог, гастроэнтеролог, терапевт.

Литература

  • Возианова Ж. И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3 т. — К.: Здоровье, 2000. – Т.1.: 600-690.
  • Кишкун А. А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике. – М.: ООО «МИА», 2006. – 471-476 с.
  • Harrison’s Principles of Internal Medicine. 16th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
  • Lerat H, Rumin S, Habersetzer F, and others. In vivo tropism of hepatitis C virus genomic sequences in hematopoietic cells: influence of viral load, viral genotype, and cell phenotype. Blood. 1998 May 15;91(10):3841-9.PMID:9573022.
  • Revie D, Salahuddin SZ. Human cell types important for hepatitis C virus replication in vivo and in vitro: old assertions and current evidence. Virol J. 2011 Jul 11;8:346. doi: 10.1186/1743-422X-8-346. PMID:21745397.

Анализ крови на антитела M,G для обнаружения ВИЧ в Нижнем Новгороде

Анализ крови на антитела M,G (IgM, IgG) для обнаружения ВИЧ-инфекции

Выявление антител к вирусам ВИЧ-1,2 и антигена р24 — основной метод скрининговой диагностики ВИЧ-инфекции. Антитела к ВИЧ появляются у 90−95% инфицированных в течение 3 месяцев после заражения, у 5−9% — через 6 месяцев, у 0,5−1% — в более поздние сроки. В стадии СПИДа количество антител может снижаться вплоть до полного исчезновения.

Антиген р24 — белок стенки нуклеотида ВИЧ-1, он появляется в крови через 2 недели после инфицирования и может быть выявлен методом ИФА в период от 2 до 8 недель. Через 2 месяца от начала инфицирования антиген р24 исчезает из крови. В дальнейшем в клиническом течении ВИЧ-инфекции отмечают второй подъём содержания в крови белка р24. Он приходится на период формирования СПИД.

Общая информация об исследовании

ВИЧ-инфекция – это болезнь, вызванная вирусом иммунодефицита человека – антропонозное инфекционное хроническое заболевание, характеризующееся специфическим поражением иммунной системы, приводящим к медленному ее разрушению до формирования синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД), сопровождающегося развитием оппортунистических инфекций и вторичных злокачественных новообразований.

Возбудители — вирусы иммунодефицита человека 1-го и 2-го типов — ВИЧ-1, ВИЧ-2, (HIV-I, HIV-2, Human Immunodeficiency Virus, types I, II) — относятся к семейству ретровирусов, подсемейству медленных вирусов.

Механизмы передачи ВИЧ-инфекции:

  • контактным путем — при гомо- и гетеросексуальных половых контактах и при контакте слизистой или раневой поверхности человека с кровью ВИЧ-инфицированного;
  • вертикальным путем — инфицирование ребенка от ВИЧ-инфицированной матери во время беременности, родов и при грудном вскармливании;
  • при немедицинских инвазивных процедурах, в том числе внутривенном введении наркотиков (использование шприцев, игл, другого инъекционного оборудования и материалов), нанесение татуировок, при проведении косметических, маникюрных и педикюрных процедур нестерильным инструментарием;
  • при инвазивных вмешательствах в лечебно-профилактических учреждениях — при переливании крови и ее компонентов, пересадке органов и тканей, использования донорской спермы, донорского грудного молока, а также через медицинский инструментарий не подвергшийся обработке в соответствии с требованиями нормативных документов.

Стадии ВИЧ-инфекции:

  • Инкубационный период — это период от момента заражения до ответа организма на внедрение вируса (появление клинической симптоматики или выработки антител) составляет, как правило, 2–3 недели, но может затягиваться до 3–8 месяцев, иногда до 12 месяцев.
  • Период острой ВИЧ инфекции наступает в среднем через 2-4 недели с момента инфицирования и длится примерно 2-3 недели. На данном этапе у некоторых людей могут развиться неспецифические симптомы, схожие с симптомами гриппа, что связано с активной репликацией вируса.
  • Латентная стадия протекает бессимптомно, но в течение нее происходит постепенное снижение иммунитета и увеличение количества вируса в крови.
  • СПИД (синдром приобретенного иммунодефицита) является конечной стадией развития ВИЧ-инфекции, которая характеризуется сильным угнетением иммунной системы, а также сопутствующими патологиями, энцефалопатией или онкологическими заболеваниями.

Несмотря на то, что ВИЧ-инфекция неизлечима, сегодня существует высокоактивная антиретровирусная терапия (АРВТ), которая может значительно продлить жизнь ВИЧ-инфицированного и улучшить её качество.

Показания для назначения данного анализа

  • При устойчивой симптоматике (на протяжении 2-3 недель) неясной этиологии: субфебрильной температуре, поносе, ночной потливости, резкой потере веса, увеличении лимфатических узлов.
  • При рецидивирующей герпетической инфекции, вирусных гепатитах, пневмонии, туберкулезе, манифестном токсоплазмозе.
  • Если пациент страдает заболеваниями, передающимися половым путем (сифилисом, хламидиозом, гонореей, генитальным герпесом, бактериальным вагинозом).
  • Случайные половые контакты.
  • Планирование беременности.
  • Предоперационная подготовка, госпитализация.

Литература:

  • Кишкун А.А. Иммунологические исследования и методы диагностики инфекционных заболеваний в клинической практике. — М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2009. С. 354-371.
  • Санитарно-эпидемиологические правила. СП 3.1.5.2826-10 «Профилактика ВИЧ-инфекции» (утверждены постановлением главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 21 июля 2016 года № 95).

Сдать анализ крови на вирус гепатита С (HCV)

Вирусный гепатит С (HCV) — инфекционное заболевание, вызываемое РНК-содержащим вирусом гепатита С. Возбудитель поражает клетки печени, вызывая гепатит и иные заболевания ткани печени, например, цирроз, гепатоцеллюлярный рак. Также вирус может внедряться в клетки крови, что приводит к таким заболеваниям, как, например, болезнь Шегрена.
Выделяют 6 типов гепатита С, каждый из которых имеет свою распространенность, вызывает заболевание той или иной степени тяжести, а также от типа вируса зависит прогноз. Для диагностики генотипов существуют специальные исследования, назначение которых обычно определяет лечащий врач, и они не являются скрининговыми и рутинными, в отличие от определения антител класса М к вирусу гепатита С.
Путь передачи вируса гепатита С — преимущественно через кровь (непосредственное заражение крови, либо передача вируса через инструменты — шприцы, иглы, оборудование для пирсинга и татуажа, если оно не одноразовое). Источник инфекции — больной или носитель вируса. Инкубационный период в среднем 6-8 недель. Острый гепатит С часто не проявляется клинически на начальных стадиях заболевания, либо проявления неспецифичны (общая слабость, повышение температуры, боль в суставах и т.д.). В ряде случаев развивается желтуха. Прогноз неблагоприятный — практически всегда формируется хроническая форма заболевания. Хронический гепатит протекает волнообразно, стадия обострения сменяется стадией ремиссии. В зависимости от генотипа вируса, вызвавшего заболевание, общего состояния человека, регулярности проведения противовирусной терапии, можно говорить о степени тяжести состояния, ожидать агрессивность влияния вируса, прогноз.
Антитела класса IgM к вирусу гепатита С (аnti-HCV IgM) — это специфические антитела к белку вируса, которые начинают синтезироваться через 4-6 недель после инфицирования. Концентрация anti-HCV IgM способна возрастать при последующей реактивации инфекции, anti-HCV IgM могут сохраняться длительное время и выявляться при хроническом гепатите С. При этом они обычно определяются в минимальной концентрации, не способны защитить организм от повторного заражения. При выявлении anti-HCV IgM необходимо провести тест на РНК HCV. Таким образом можно уточнить активность процесса, стадию заболевания. Об острой фазу обычно говорят: аnti-HCV IgM в комплексе с положительным тестом на РНК HCV, а также повышением концентрации ферментов печени. В обследование в таком случае могут быть включены иные методы диагностики, позволяющие оценить степень повреждения печеночной ткани.

Показания к исследованию:

· При подозрении на наличие гепатита С в комплексе с иными исследованиями
· При повышении титра печеночных трансаминаз или при иных показателях снижения функции печеночной ткани
· Анализ входит в скрининговое обследование
· Для диагностики других типов гепатитов
· При подозрении на реактивацию процесса при уже установленном заболевании

Ранее существовавшие полимеразо-специфические Т-клетки размножаются у абортивных серонегативных больных SARS-CoV-2

Участники COVIDsortium, медицинские работники

Биоресурс COVIDsortium был одобрен этическим комитетом Национальной службы этики исследований Великобритании (20/SC/0149) и зарегистрирован на https://ClinicalTrials.gov (NCT04318314). Полная информация об исследовании биоресурса (скрининг участников, дизайн исследования, сбор и обработка образцов) была описана ранее 16,45 .

В этой когорте и в Лондоне в целом пик заболеваемости пришелся на первую пандемическую волну инфекций в течение первой недели изоляции (23 марта 2020 г.) 46 , и мы наблюдали примерно синхронное воздействие, совпадающее с набором; поэтому мы использовали это в качестве эталона для оценки иммунитета, вызванного воздействием. В основной когорте исследования 48 участников имели положительные результаты ОТ-ПЦР, из них 157 (21,5%) участников были серопозитивными. Кроме того, 79% положительных ПЦР-тестов были получены в течение первых 2 недель наблюдения, и ни один медработник не дал положительного результата ПЦР после 5-й недели наблюдения 14,46 (рис.1b), с сероконверсией в течение первых 3 недель наблюдения для большинства 28 . Инфекции протекали бессимптомно или в легкой форме, было только два случая госпитализации (ни один не потребовал госпитализации в реанимацию). В перекрестном подисследовании случай-контроль ( n  = 129) образцы были собраны через 16–18 недель после первого карантина в Великобритании (рис. 1а). Расчеты мощности были выполнены до отбора проб подисследования на 16-й неделе, чтобы определить размер выборки, необходимый для проверки гипотезы о том, что медработники с ранее существовавшим Т-клеточным ответом обогащаются в экспонированной серонегативной группе в диапазоне случаев инфекции, предполагая, что 50% от общей когорты были инфицированы. ранее существовавшие ответы Т-клеток.Были оценены размеры выборки от 18 до 64 человек на группу. Гнездовое подисследование, соответствующее возрасту, полу и этнической принадлежности, было разработано в рамках более крупного ( n  = 731) родительского исследования, и в нем приняли участие 129 человек в течение 16 недель, включая выделение большого объема МНПК.

Лабораторно подтвержденная инфекция определялась еженедельными мазками из носоглотки, стабилизирующими РНК, и ОТ-ПЦР (тест Roche cobas SARS-CoV-2, оболочечный ( E ) ген) и положительным результатом анализа на антитела (анализ антител IgG к белку 1, EUROIMMUN) и анализ суммарных антител против нуклеокапсида (Roche), подробно описанный ниже.Группа серонегативных медработников была сопоставима по демографическим характеристикам и контакту с лабораторно подтвержденной инфицированной группой и определялась по отрицательным результатам в этих 3 тестах во всех 16 временных точках, а также по отрицательным результатам на нейтрализующие антитела на 16-й неделе и в выбранные предыдущие временные точки, как указано.

Группа студентов-медиков и сотрудников лабораторий была одобрена UCL Ethics (идентификатор проекта: 13545/001), а доавгустовские образцы от здоровых доноров были собраны и подвергнуты криоконсервации в соответствии с этическим номером 11/LO/0421.Все участники предоставили письменное информированное согласие, и исследование соответствовало принципам Хельсинкской декларации.

Выделение РВМС и сыворотки

РВМС выделяли из гепаринизированных образцов крови с помощью центрифугирования в градиенте плотности Pancoll (Pan Biotech) или Histopaque-1077 Hybri-Max (Sigma-Aldrich) в пробирках SepMate (StemCell) в соответствии со спецификациями производителя. Изолированные РВМС криоконсервировали в эмбриональной телячьей сыворотке (ФТС), содержащей 10% ДМСО, и хранили в жидком азоте.

Образцы цельной крови собирали в вакутейнеры SST (Vacuette) с инертным полимерным гелем для отделения сыворотки и покрытием активатором свертывания. После центрифугирования при 1000 г в течение 10 мин при комнатной температуре слой сыворотки разделяли на аликвоты и хранили при -80°С. Все описанные здесь анализы Т-клеток были выполнены на криоконсервированных РВМС.

Еженедельно Серология SARS-CoV-2 S1 и NP

Еженедельно Euroimmun анти-SARS-CoV-2 иммуноферментный анализ (ИФА; анти-SARS-CoV-2 S1 антиген IgG и Roche Elecsys анти-SARS-CoV Коммерческие анализы электрохемилюминесцентного иммуноанализа -2 (ECLIA; анти-SARS-CoV-2 нуклеопротеин IgG/IgM) проводились организацией Public Health England, как описано ранее 16 .S1 ELISA: соотношение ≥1,1 считалось положительным. Соотношение 11 было принято за верхний порог, поскольку анализ выходит за пределы этой точки. NP ECLIA: результаты анти-NP выражены в виде значения индекса отсечки (COI), основанного на сигнале электрохемилюминесценции двухточечной калибровки, при этом результаты COI ≥ 1,0 классифицируются как положительные.

Анализы нейтрализации псевдотипа и подлинного вируса

Анализы нейтрализации псевдотипа SARS-CoV-2 проводились с использованием псевдотипированных лентивирусных частиц, как описано ранее 16 .Вкратце, сыворотку инактивировали нагреванием при 56°С в течение 30 мин. Разведение сыворотки в DMEM выполняли в двух повторностях с начальным разведением 1 на 20 и 7 последовательными двукратными разведениями до конечного разведения 1/2560 в общем объеме 100 мкл. Псевдотипированные лентивирусные частицы SARS-CoV-2 (1 × 10 5 RLU) добавляли в каждую лунку (разведения сыворотки и контроли) и инкубировали при 37 °C в течение 1 часа. Затем на лунку добавляли 4 × 10 4 клеток Huh7, суспендированных в 100 мкл полной среды, и инкубировали в течение 72 ч при 37 °C и 5% CO 2 .Активность люциферазы светлячка (люминесценция) измеряли с использованием системы анализа люциферазы Steady-Glo (Promega) и планшетного ридера CLARIOStar (BMG Labtech). Кривые относительного уровня инфицирования (в процентах) по сравнению с разведениями сыворотки (log 10 -трансформированные значения) против отрицательного контроля объединенных сывороток, собранных до 2016 г. (Sigma-Aldrich), и положительного нейтрализатора были построены с использованием Prism 9 (GraphPad ). Метод нелинейной регрессии использовали для определения кратности разведения, которая нейтрализует 50% (IC 50 ).

Аутентичные анализы микронейтрализации SARS-CoV-2 проводились, как описано ранее 47 . Вкратце, смесь разведений сыворотки в DMEM (1 из 20 и 11 последовательных двукратных разведений до конечного разведения 1/40 960) и 3 × 10 4 БОЕ вируса SARS-CoV-2 (Wuhan Hu-1) инкубировали при 37°С в течение 1 ч. После первоначальной инкубации предварительно засеянные клетки Vero E6 инфицировали образцами сыворотки-вируса и инкубировали (37 °C и 5% CO 2 ) в течение 72 часов. Затем клетки фиксировали 100 мкл 3.7% (об./об.) формальдегида в течение 1 часа. Клетки промывали PBS и окрашивали 0,1% (масса/объем) раствором кристаллического фиолетового в течение 10 мин. После удаления избытка кристаллического фиолетового и высушивания на воздухе краситель кристаллического фиолетового повторно растворяли в 100 мкл 1% (масса/объем) раствора додецилсульфата натрия. Поглощение измеряли при 570 нм с помощью планшетного ридера CLARIOStar (BMG Labtech). Показания абсорбции для каждой лунки стандартизировали относительно технических положительных (антивирусный контроль) и отрицательных (только клетки) контролей на каждом планшете для определения процентного значения нейтрализации.Метод нелинейной регрессии (подгонка кривой) использовали для определения степени разбавления, при которой нейтрализуется 50% (IC 50 ) с использованием Prism 9 (GraphPad). SARS-CoV-2 классифицируется как возбудитель группы опасности 3, поэтому все аутентичные анализы размножения и микронейтрализации SARS-CoV-2 проводились в помещении с уровнем защиты 3.

Спайк ELISA

Серопозитивность в отношении спайка SARS-CoV-2 была определена для когорты студентов-медиков и сотрудников лаборатории в период с июля 2020 г. по январь 2021 г. (расширенная таблица данных 5) с помощью ELISA, как подтверждено и описано ранее 40,48,49 .Вкратце, 9 колонок 96-луночных планшетов MaxiSorp (Thermo Fisher Scientific) покрывали в течение ночи при 4 °C очищенным белком S1 в PBS (3 мкг мл -1 на лунку в 25 мкл), остальные 3 колонки покрывали козьим античеловеческим F(ab)’2 (1:1000) для получения кривой внутреннего стандарта. На следующий день планшеты промывали PBS-T (0,05% Tween-20 в PBS) и блокировали в течение 1 ч при комнатной температуре буфером для анализа (5% сухого молока PBS-T). Сыворотки разводили блокирующим буфером (1:50). Затем сыворотку (25 мкл) добавляли в лунки с покрытием S1 в двух повторностях и инкубировали в течение 2 часов при комнатной температуре.Серийные разведения известных концентраций IgG добавляли в лунки, покрытые F(ab)’2 IgG, в трех повторностях (Sigma-Aldrich). После инкубации в течение 2 часов при комнатной температуре планшеты промывали PBS-T и добавляли в каждую лунку 25 мкл конъюгированного со щелочной фосфатазой козьего античеловеческого IgG (Jackson ImmunoResearch) в разведении 1:1000 в буфере для анализа и инкубировали в течение 1 ч комнатной температуры. Затем планшеты промывали PBS-T и добавляли 25 мкл субстрата щелочной фосфатазы (Sigma-Aldrich). Значения оптической плотности измеряли с помощью планшет-ридера MultiskanFC (Thermo Fisher Scientific) при 405 нм, а титры S1-специфических IgG интерполировали из стандартной кривой IgG с использованием подбора кривой регрессии 4PL на GraphPad Prism 8.

Иммунологический анализ для обнаружения спайка HCoV в мезомасштабе

Мультиплексный иммуноанализ для обнаружения спайка в мезомасштабе для измерения антител IgG против HCoV был проведен, как описано ранее 50 . Планшеты покрывали 200–400 мкг мл шиповидного белка -1 (тримеры в префузионной форме) из эндемичных коронавирусов человека HKU1, OC43, 229E и NL63. Концентрация антител представлена ​​в произвольных единицах (AU), интерполированных из сигнала ECL образца внутреннего стандарта с использованием аппроксимации четырехпараметрической логистической кривой.Образцы сыворотки, взятые на 8-й неделе — в момент пика пика S1 IgG после ПЦР-положительной инфекции SARS-CoV-2 — были проанализированы на антитела к HCoV.

Окрашивание В-клеток памяти, специфичных для спайков SARS-CoV-2

Многопараметрическая проточная цитометрия использовалась для ex vivo идентификации окрашивания В-клеток памяти, специфичных для спайков, как описано ранее 29 . Биотинилированный тетрамерный шип (1 мкг) связывали флуорохромом путем инкубации со стрептавидином, конъюгированным с APC (Prozyme) и PE (Prozyme) в течение 30 минут в темноте на льду.PBMC оттаивали и инкубировали с красителем Live/Dead для фиксации мертвых клеток (УФ, Thermo Fisher Scientific), а насыщающие концентрации фенотипирующих моноклональных антител разводили в 50% 1× PBS 50% Brilliant Violet Buffer (BD Biosciences): анти-CD3 Bv510 ( BioLegend, OKT3, 1:200), анти-CD11c FITC (BD Biosciences, B-ly6, 1:100), анти-CD14 Bv510 (BioLegend, M5E2, 1:200), анти-CD19 Bv786 (BD Bioscience, HIB19, 1:50), анти-CD20 AlexFluor700 (BD Biosciences, 2H7, 1:100), анти-CD21 Bv711 (BD Biosciences, B-ly4, 1:100), анти-CD27 BUV395 (BD Biosciences, L128, 1:100) ), анти-CD38 Pe-CF594 (BD Biosciences, HIT2, 1:200), IgD Pe-Cy7 (BD Biosciences, IA6-2, 1:100).Для идентификации В-клеток, специфичных к антигену SARS-CoV-2, к клеткам добавляли по 1 мкг на 500 мкл красителя каждого из тетрамерных шипов-APC и шипов-PE. Клетки инкубировали в окрашивающем растворе в течение 30 мин при комнатной температуре, промывали PBS и затем фиксировали набором буферов FoxP3 (BD ​​Biosciences) в соответствии с инструкциями производителя. Все образцы были получены на проточном цитометре BD Fortessa-X20. Данные анализировали с помощью FlowJo v.10.7 (TreeStar). Ранее сообщалось о гейтинге и отсечке положительных результатов по номеру 29 .Величина популяции В-клеток памяти, специфичных для спайка SARS-CoV-2, выражается в процентах от В-клеток памяти (выбрано как: лимфоциты, синглеты, живые, CD3 CD14 CD19 + , CD20 + , исключая: CD38 hi , IgD + и CD27 + CD21 ), связывающие как PE-, так и APC-меченый шип.

Пептиды SARS-CoV-2

Полные списки пептидов, содержащихся в пулах перекрывающихся пептидов, охватывающих структурные белки 16 и белки RTC 8 (15-членные пептиды, перекрывающиеся на 10 аминокислот, GL Biochem Shanghai , чистота >80%).Список пептидов, которые перекрывают NSP12, представлен в дополнительной таблице 3. Для анализов IFNγ ELISpot использовались пептиды последовательности SARS-CoV (96,5% гомологичности последовательности с консенсусной последовательностью Wuhan SARS-CoV-2, различаются 34/931 аминокислоты; дополнительная таблица 3). Для картирования эпитопов использовали пептиды последовательности SARS-CoV-2 для NSP12-2 и NSP12-5 (GL Biochem Shanghai, чистота >80%).

Чтобы ограничить конкуренцию за представление пептидов in vitro, мы ограничили стимуляцию максимум 55 пептидами и поэтому разделили крупные белки, такие как NP, на подпулы: NP (NP1, NP2, по 41 пептиду в каждом), M (43 пептида) , ORF3a (53 пептида), NSP7 (15), NSP12 (36–37 на пул от NSP12-1 до NSP12-5) и NSP13 (39–40 пептидов на пул от NSP13-1 до NSP13-3).Пятнадцатичленные пептиды, покрывающие предсказанные эпитопы шипа SARS-CoV-2 8  , были использованы, чтобы получить в общей сложности 55 пептидов в этом пуле (шип). Оптимальные 9-мерные пептиды для эпитопов CD8 + были специально синтезированы ThinkPeptides (чистота> 70%; дополнительная таблица 3).

Анализ IFNγ ELISpot

Анализ IFNγ ELISpot проводили, как описано ранее, на криоконсервированных РВМС 8,16,51 . Если не указано иное, культуральная среда для РВМС человека (R10) была стерильной 0.Среда RPMI с фильтром 22 мкм (Thermo Fisher Scientific), дополненная 10% по объему инактивированной нагреванием (1 час, 64°C) FCS (Hyclone) и 1% по объему 100-кратного раствора пенициллина и стрептомицина (Gibco-BRL).

Планшеты ELISpot (Merck-Millipore, MSIP4510) покрывали человеческими антителами против IFNγ (1-D1K, Mabtech; 10 мкг мл -1) в PBS в течение ночи при 4 °C. Планшеты промывали шесть раз стерильным PBS и блокировали R10 в течение 2 ч при 37°C с 5% CO 2 . PBMC оттаивали и выдерживали в R10 в течение 3 ч при 37°C с 5% CO 2 перед подсчетом, чтобы гарантировать, что были включены только жизнеспособные клетки.PBMC (400 000 на лунку) высевали в R10 и стимулировали в течение 16–20 ч пулами пептидов SARS-CoV-2 (2 мкг мл –1 на пептид) при 37°C во влажной атмосфере с 5% CO 2 . В случаях, когда было недостаточно Т-клеток, пулы 1, 2 и 3 NSP12 и пулы 1, 2 и 3 NSP13 объединяли в одну лунку. Для базовых измерений пулы NSP12 1–5 стимулировали в одной лунке, а в случаях, когда было недостаточно Т-клеток, включали одну лунку ДМСО.Медработники, у которых не было полного набора стимуляций, были исключены из анализа общей величины широты ответа, что привело к несколько более низким значениям n . Внутренним контролем планшета были только R10 (без Т-клеток) и две лунки с ДМСО (отрицательный контроль), конканавалин А (ConA, положительный контроль; Sigma-Aldrich) и FEC (HLA I-рестриктированные пептиды гриппа, вируса Эпштейна-Барр и ЦМВ; 1 мкг мл -1 на пептид). Планшеты ELISpot были разработаны с человеческими биотинилированными антителами для обнаружения IFNγ (7-B6-1, Mabtech; 1 мкг мл -1 ) в течение 3 часов при комнатной температуре с последующей инкубацией с щелочной фосфатазой против биотина козы (Vector Laboratories; 1: 1000) в течение 2 часов при комнатной температуре, оба разбавлены в PBS с 0.5% BSA по объему (Sigma-Aldrich) и, наконец, 50 мкл на лунку стерильного отфильтрованного субстрата фосфатазы BCIP/NBT (Thermo Fisher Scientific) на 7 минут при комнатной температуре. Планшеты промывали в дважды перегнанном растворе H 2 O и оставляли сушиться в течение ночи, после чего считывали на планшет-ридере AID classic ELISpot (Autoimmun Diagnostika).

Среднее значение двух лунок с ДМСО вычитали из всех лунок, стимулированных пептидом, для данного образца РВМС и любого ответа, величина которого была меньше 2 с.д. этих контрольных лунок с ДМСО, специфичных для образца, не считали ответом, специфичным для пептида (данное значение равно 0). Результаты выражали в виде SFC IFNγ на 10 6 PBMC после вычитания фона. Среднее геометрическое для всех лунок с ДМСО составило 9,571 SFC на 10 6 PBMC (3,8 точки). Мы исключали результаты, если лунки отрицательного контроля имели >95 SFC на 10 6 РВМС или лунки положительного контроля (ConA) были отрицательными. Ответы Т-клеток на SARS-CoV-2 не коррелировали с фоновыми пятнами в лунках с ДМСО (например, группа SN-HCW, Spearman r  = -0.068, P  = 0,6141).

Анализ пролиферации антиген-специфических Т-клеток и картирование эпитопов

Замороженные PBMC оттаивали и дважды промывали стерильным PBS. РВМС ресуспендировали в 1 мл культуральной среды R10 (2–10 × 10 6 РВМС) и добавляли по 0,5 мкл 5 мМ исходного CTV (Thermo Fisher Scientific) на образец при перемешивании. РВМС окрашивали в темноте в течение 10 мин при 37°С во влажной атмосфере с 5% СО 2 . Для остановки реакции окрашивания добавляли десятикратный объем холодного R10 и инкубировали клетки в течение 5 мин на льду.Клетки промывали в PBS и инкубировали в течение 5 мин при 37°С, затем переносили в новую пробирку и снова промывали в R10. Окрашенные CTV РВМС высевали в 96-луночные планшеты (2–4 × 10 5 РВМС в 200 мкл R10) и стимулировали пулами пептидов (2 мкг мл –1 на пептид) в течение 10  дней в R10 с добавлением 0,5 мкг мл -1 растворимых анти-CD28 антител (Thermo Fisher Scientific) и 20 U мл -1 рекомбинантного человеческого IL-2 (Peprotech). CTV-окрашенные и неокрашенные PBMC анализировали для подтверждения эффективности окрашивания.Затем в 1-й день добавляли 100 мкл среды, а 100 мкл среды удаляли и заменяли на R10 с добавлением анти-CD28 и IL-2, как указано выше, в 3-й и 6-й дни. На 9-й день РВМС повторно стимулировали пулами пептидов (2 мкг мл -1 на пептид) и брефельдин А (10 мкг мл -1; Sigma-Aldrich). После 16-18-часовой повторной стимуляции РВМС собирали, промывали в PBS и окрашивали для фиксации живых/мертвых (ближний инфракрасный диапазон, Thermo Fisher Scientific, 1:1000), промывали в PBS, а затем фиксировали в буфере для фиксации/перманентной фиксации (буфер для окрашивания TF). комплект, eBioscience) в течение 20 мин при комнатной температуре.Клетки промывали в PBS и инкубировали в перманентном буфере (набор буферов для окрашивания TF, разведенный 1:10 в бидистиллированной H 2 O) в течение 20 мин при комнатной температуре, промывали в PBS и ресуспендировали в перманентном буфере с насыщающими концентрациями анти- человеческие антитела для внутриклеточного окрашивания: анти-IL-2 PerCp-eFluor710 (Invitrogen, MQ1-17h22, 1:50), анти-TNFα FITC (BD Bioscience, MAb11, 1:100), анти-CD8α BV785 (BioLegend, RPA- T8, 1:200), анти-IFNγ BV605 (BD Biosciences, B27, 1:100), анти-IFNγ APC (BioLegend, 4S.B3, 1:50), анти-CD3 BUV805 (BD Biosciences, UCHT1, 1:200), анти-CD4 BUV395 (BD Biosciences, SK3, 1:200), анти-CD154 (CD40L) Pe-Cy7 (BioLegend, 24 -31, 1:50) и анти-MIP-1β PE (BD Biosciences, D21-1351, 1:100). Клетки дважды промывали в PBS и анализировали с помощью проточного цитометра BD LSRII. Напряжения цитометра были одинаковыми для разных партий. Флуоресценция минус один (FMO) и нестимулированные образцы использовались для определения гейтов, применяемых к образцам. Данные анализировали с помощью FlowJo v.10.7 (TreeStar).

Эксперименты по оптимизации показали, что использование рекомбинантного человеческого IL-2 увеличивает непептид-специфическую пролиферацию Т-клеток, но необходимо для оптимальной экспансии пролиферирующих цитокинов, продуцирующих пептид-специфические Т-клетки.Разведение CTV и окрашивание антителами против человеческого IFNγ использовали для идентификации антигенспецифических Т-клеток. Для каждого образца РВМС была включена нестимулированная контрольная лунка (эквивалент ДМСО к лункам с пептидом), и процент CTV lo IFNγ + CD4 + или CD8 + клеток, пролиферирующих в нестимулированных лунках, вычитали как фоновое высвобождение цитокинов. из всех лунок, стимулированных пептидом. Вышеупомянутый анализ пролиферации Т-клеток использовался для размножения Т-клеток, специфичных для SARS-CoV-2, и использовалась двумерная матрица (дополнительная таблица 2), так что каждый 15-мерный пептид был представлен в 2 пулах, помогая идентифицировать людей. иммуногенные 15-мерные пептиды.Ответы Т-клеток затем подтверждали повторной экспансией с отдельными 15-мерами.

Полифункциональность, определяемую как количество цитокинов, совместно продуцируемых Т-клетками после экспансии в течение 10 дней, оценивали с использованием SPICE (v.6.0) и pestle (v.2.0), доступных на GitHub (https://niaid.github). .io/spice/) 52 . Ответы <0,1% CD4 + или CD8 + Т-клеток исключали. Булево управление использовалось для определения процента Т-клеток, образующих 31 возможную комбинацию следующих цитокинов: IFNγ, TNF, IL-2, CD154, MIP-1β.Пестик использовался для вычитания фонового процента клеток, продуцирующих цитокины, из нестимулированных лунок, которые запускались параллельно, и для форматирования данных для визуализации в SPICE. Доля Т-клеток, вырабатывающих определенное количество цитокинов в комбинации, представлена ​​в виде круговых диаграмм (базовое среднее), а дуги круговой диаграммы представляют долю, вырабатывающую данный цитокин. Полифункциональность RTC-специфических Т-клеток рассчитывали как среднее по ответам Т-клеток на NSP7, NSP12 и NSP13, а полифункциональность структурно-специфических Т-клеток — как среднее по ответам на шип, ORF3a, M и NP (расширенные данные, рис.3г).

Окрашивание пентамеров MHC класса I

Использовались пентамеры, ограниченные по HLA-A*02 (проиммунные), со следующей специфичностью: SARS-CoV-2 NSP7 27–35 (KLWAQCVQL) или HCoV HKU1 NSP7 27–35 (KLWQYCSVL; только окрашивание ex vivo). Для окрашивания после экспансии антиген-специфические Т-клетки размножали родственным 9-мерным пептидом последовательности SARS-CoV-2 или HCoV HKUW в течение 8–10 дней, как указано выше (2 мкг/мл –1 на пептид) в R10. с добавлением 0,5 мкг мл -1 растворимых анти-CD28 антител и 20 ЕД мл -1 рекомбинантного человеческого IL-2; среду добавляли в дни 1, 3 и 6 перед окрашиванием пентамера.Для окрашивания ex vivo РВМС оттаивали, дважды промывали в PBS. Пентамеры центрифугировали при 13000 об/мин. за 10 мин до использования. PBMC (0,5–2 × 10 6 ) окрашивали 1 мкл пентамеров при комнатной температуре в течение 20 мин в 50 мкл PBS в 96-луночном планшете. PBMC дополнительно окрашивали с помощью Blue fixable Live/dead (Invitrogen, 1:1000) в течение 20 мин при 4°C и окрашивали поверхность смесью насыщающих концентраций моноклональных антител в течение 30 мин при 4°C: анти-CD3 BUV805 (BD Biosciences, UCHT1, 1:200), анти-CD4 BUV395 (BD Biosciences, SK3, 1:200), анти-CD56 Pe-Cy7 (BD Biosciences, NCAM16.2, 1:100), анти-CD8α Alexa700 (BioLegend, RPA-78, 1:200), постэкспансивный CD19 Bv786 (BD Biosciences, HIB19, 1:100). РВМС фиксировали 1% параформальдегидом и проводили проточную цитометрию, как указано выше, с использованием проточного цитометра BD LSRII. Данные анализировали с помощью FlowJo v.10.7 (TreeStar). Во время анализа применялись строгие критерии гейтирования (стратегия гейтирования показана на рис. 6c с расширенными данными) с исключением дублетов, мертвых клеток, CD19 + В-клеток (после экспансии) и CD56 + NK/NKT, чтобы свести к минимуму -специфическое связывание контаминации.HLA-несоответствующие РВМС (не HLA-A*02) и флуоресцентный минус один контроли для пентамеров окрашивали параллельно для оценки неспецифического связывания (расширенные данные, рис. 6c).

Анализ гомологии последовательностей семейства Coronaviridae

Гомология последовательностей пептидов, полученных из SARS-CoV-2, и последовательностей HCoV была рассчитана, как описано ранее 32 . Вкратце, протеом SARS-CoV-2 (NC_045512.2) был разложен на 15-мерные пептидные последовательности, перекрывающиеся 14 аминокислотами.Затем был проведен поиск белка BLAST для каждого 15-мерного пептида в пользовательской базе данных последовательностей, содержащей 2531 Coronaviridae последовательностей 32 . Значения гомологии каждого пептида, полученного из SARS-CoV-2, с вирусными образцами с «229E», «OC43», «NL63» или «HKU1», включенными в название вида и которые были выделены от человека-хозяина, были сохранены (дополнительная таблица 1) . Кроме того, чтобы определить, различается ли консервативность 15-мерных пептидов между белками SARS-CoV-2, была рассчитана средняя гомология пептидов в каждом белке.Был проведен тест перестановки, чтобы проверить, была ли разница в средней гомологии между двумя белками, Δ h , статистически значимой. Вкратце, белковая принадлежность каждого 15-мерного пептида была переставлена ​​(1000 итераций). Затем на каждой итерации рассчитывали Δ ч двух белков, что приводило к окончательному нулевому распределению значений Δ ч . Значения P рассчитывали как количество перестановок, которые давали Δ ч , по крайней мере, столь же экстремальное, как наблюдаемое Δ ч двух белков.Пользовательские скрипты, используемые для поиска гомологии, визуализации тепловой карты и тестирования перестановок, доступны на GitHub (https://github.com/cednotsed/tcell_cross_reactivity_covid.git).

Для выравнивания последовательностей иммуногенных 15-меров или эпитопов, рестриктированных по МНС класса I, эталонные белковые последовательности для ORF1ab (номер доступа: QHD43415.1, NP_828849.2, YP_0002.1, YP_009555238.1, YP_173236.1, YP_0037 .2 и NP_073549.1) были загружены из базы данных NCBI (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/), как описано выше 8 . Последовательности были выровнены с использованием алгоритма MUSCLE с параметрами по умолчанию, и процент идентичности был рассчитан в Geneious Prime 2020.1.2 (www.geneious.com). Цифры выравнивания были созданы с использованием Snapgene 5.1 (GSL Biotech).

Анализ разнообразия генома видов SARS-CoV-2

Для анализа разнообразия генома полное замаскированное выравнивание было загружено из базы данных GISAID 53,54 EpiCoV 26 июля 2021 года вместе с филогении GISAID Audacity, включающей 611 893 образца (полный список и метаданные доступны на Figshare (https://figshare.com/s/049d53f789a8b111b87e)). Выравнивание было отобрано для включения 800 каждой определенной филогенетической клады NextStrain, как это предусмотрено метаданными GISAID. Для клад, содержащих менее 800 образцов, были включены все представители этой клады, что привело к всесторонней выборке по глобальной филогении 13 785 образцов, охватывающих геномное разнообразие SARS-CoV-2 на сегодняшний день (расширенные данные, рис. 5a). Разнообразие вдоль генома оценивали с использованием двух показателей разнообразия: количества повторяющихся мутационных всплесков (гомоплазий) в любом положении и индекса генетического разнообразия Нея 55 .{2}\), где I — количество различных аллелей в позиции, а p i  = ( i =1,…, I ) — частота аллеля i в исследуемом ряду. Среднее количество гомоплазии на локус на область гена и среднее генетическое разнообразие Nei на область гена были рассчитаны путем нормализации значений на локус к длине гена для всех ORF и NSP в соответствии со справочными аннотациями справочного генома GISAID EPI_ISL_402124.Значимые различия между всеми парными комбинациями ORF/NSP оценивались с использованием критерия суммы рангов Уилкоксона, реализованного в compare_means() в R-пакете ggpubr v.0.4.0 (расширенная таблица данных 3).

IFI27 qPCR

Тотальную РНК из крови Tempus экстрагировали с использованием набора для выделения РНК Tempus Spin (Applied Biosystems, 4380204). кДНК получали с использованием набора для обратной транскрипции кДНК High-Capacity (Applied Biosystems). Количественную ПЦР (кПЦР) проводили с использованием TaqMan Fast Advanced Master Mix (Applied Biosystems) на машине для ПЦР в реальном времени ABI StepOnePlus (Applied Biosystems).Использовали следующие условия циклирования: 95°С в течение 2 мин; затем 40 циклов при 95°C в течение 3 с и при 60 °C в течение 30 с. IFI27 и GAPDH амплифицировали с использованием зондов для анализа экспрессии генов TaqMan Hs01086373_g1 ( IFI27 ) и Hs02786624_g1 ( GAPDH ). GAPDH использовали в качестве контроля гена домашнего хозяйства. Не подвергавшаяся воздействию контрольная группа медицинских работников до пандемии для анализа qPCR была описана ранее 57

График коррелограммы

Матрица парной корреляции между переменными была рассчитана и визуализирована в виде коррелограммы с использованием коррплота (https://github.com/taiyun/corplot) в R v.3.5.3 с R studio v.1.0.153. Коэффициент ранговой корреляции Спирмена r обозначен размером и цветом кружков. Показаны только корреляции с P  < 0,05. Переменные упорядочены по иерархической кластеризации.

Статистика и воспроизводимость

Предполагалось, что данные имеют негауссово распределение, и везде использовались непараметрические тесты. Для однопарных и непарных сравнений использовали критерий знакового ранга Уилкоксона для сопоставленных пар и критерий Манна-Уитни U .Для множественных непарных сравнений использовали однофакторный дисперсионный анализ Краскела-Уоллиса с поправкой Данна. Для корреляций использовали критерий Спирмена r . P  < 0,05 считалось значимым. Для анализа использовали Prism v.7.0e и v.8.0 для Mac. Подробности приведены в подписях к рисункам.

Отчетность по данным

Расчеты мощности использовались для оценки размера выборки, необходимой для субисследования на 16-й неделе (см. выше). Статистические методы не использовались для предварительного определения размера выборки.Для всех анализов образцы из каждой когорты анализировались параллельно, чтобы уменьшить влияние технических различий между партиями. Анализы IFNγ ELISpot проводили на когортах HCW перед раскрытием группы (лабораторно-подтвержденная инфекция или SN-HCW). Другие эксперименты не были рандомизированы, и исследователи не были слепы к распределению во время экспериментов и оценки результатов.

Сводка отчета

Дополнительную информацию о дизайне исследования можно найти в Сводке отчета об исследовании природы, связанной с этим документом.

Серонегативные спондилоартропатии | PM&R KnowledgeNow

Болезнь/расстройство

Определение

Спондилоартриты (СпА) представляют собой группу идиопатических воспалительных ревматологических заболеваний, впервые выявленных в 1970-х годах, с общими определяющими фенотипическими, генетическими и серологическими признаками. 1 Характеризуются воспалением позвоночника, крестцово-подвздошных (КП) суставов, периферических суставов, энтезитом, дактилитом, а также внесуставными проявлениями в виде увеита и кожной сыпи.Серологически они ревматоидный фактор (RF) и антинуклеарные антитела (ANA) отрицательные. Генетически они связаны с антигеном гаплотипа человека, HLA-B27, что предполагает общий патологический механизм. Ранняя диагностика имеет решающее значение для ограничения инвалидности, связанной с заболеванием. Немедикаментозное лечение направлено на профилактику прогрессирования, компенсацию и восстановление функции. Фармакологическая терапия включает нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) и биологические агенты, такие как антагонисты фактора некроза опухоли (ФНО).

Традиционно выделяют четыре подтипа спондилоартритов: анкилозирующий спондилоартрит (АС), псориатический артрит (ПсА), реактивный артрит (ранее синдром Рейтера) (РеА) и спондилоартропатия, связанная с воспалительным заболеванием кишечника (ВЗК). Недавние разработки расширили концепцию СпА, включив в нее недифференцированную спондилоартропатию (НСПА) и аксиальную СпА. Недифференцированный СпА включает пациентов, у которых диагностирован СпА, но они не относятся к какому-либо конкретному подтипу. 2 Осевой СпА включает пациентов как с нерентгенологическими (АС без сакроилеита), так и с рентгенологическими данными. 30

Спондилоартрит и спондилоартропатия часто используются взаимозаменяемо, но термин спондилоартрит является более подходящим, поскольку он относится к воспалению суставов, тогда как артропатия является более общим термином, относящимся к любой патологии суставов. Спондилоартриты — множественное число от спондилоартрита. 2,3 Спондилоартриты иногда в литературе имеют префикс термина серонегативные ; однако префикс был исключен, поскольку, в отличие от ревматоидного артрита (РА), СпА являются серонегативными (отрицательными по ревматоидному фактору (РФ) и антинуклеарным антителам (АНА)) 5,6,7 .

Этиология

Точная причина SpAs неизвестна. HLA-B27 является самым большим фактором риска развития СпА. 8 Точная роль, которую HLA-B27 играет в этой группе заболеваний, изучена недостаточно. Патогенез, по-видимому, представляет собой сложное взаимодействие генетических и экологических факторов. При подтипе РеА бактериальные организмы ускоряют патологический процесс.

Эпидемиология, включая факторы риска и первичную профилактику

Как группа, спондилоартриты могут встречаться так же часто, как РА, с распространенностью 0.от 5% до 1%. 6,9,10 Во всем мире существуют различия в распространенности СпА, которые коррелируют с распространенностью HLA-B27. 59 HLA-B27 выявляется у 90% пациентов с АС, у 50-80% пациентов с реактивным артритом, у 25-78% пациентов с ВЗК-ассоциированным АС, у 50% пациентов с острым передним увеитом и у 10- 25% больных псориатическим артритом. 31,32,33,34,35 Распространенность HLA-B27 различается среди различных форм спондилоартритов и этнических групп. 6,8-10 В Соединенных Штатах HLA-B27 может быть обнаружен у 7,5% белых американцев и менее чем у 1% афроамериканцев. 9 СпА с самой высокой ассоциацией HLA-B27 — это АС, при котором до 95% белых американцев и 50% афроамериканцев дали положительный результат на генотип. 6,10

Патоанатомия/физиология

Патогенез СпА до конца не выяснен. Сильная ассоциация HLA-B27 с этой группой заболеваний предполагает, что он является ключевым фактором патогенеза СпА.У человека HLA-B27 представляет собой аллель молекулы MHC класса I, обнаруживаемой на всех ядерных клетках, которая представляет внутриклеточные антигены CD8 + Т-лимфоцитам (цитотоксическим Т-клеткам). Презентация вирусных пептидов, связанных с молекулами MHC класса I, обнаруженными на инфицированных клетках, приводит к их лизису 11 .

Одна из теорий относительно патогенеза РеА состоит в том, что это заболевание запускается после презентации «артритогенных» пептидов CD4 + и CD8 + Т-лимфоцитам, что стимулирует связанные с ними воспалительные реакции. 12 Определенные бактерии, такие как Yersinia, Salmonella, Shigella, и Campylobacter, , явно связаны с РеА. 13 Интересно, что бактериальная ДНК была обнаружена в синовиальной жидкости и синовиальных клетках у пациентов с РеА, что указывает на возможную связь между кишечной инфекцией и воспалением суставов. 12

Исследования показали, что фактор некроза опухоли (TNF), IL-23 и IL-17, их полиморфизмы и иммунологические пути связаны с патогенезом воспалительного артрита. 53 Было показано, что клетки, экспрессирующие рецептор IL-23, становятся патогенными после воздействия IL-23. В тканях ИЛ-17А усугубляет хроничность и тяжесть патологического процесса. Взаимодействие клеток IL-23 + и IL-17 + с различными тканеспецифичными клетками приводит к активации цитокин-опосредованных путей, что приводит к тяжелому воспалению, вызывающему эрозию кости и моделирование тканей. Клинические испытания, специально нацеленные на ФНО и ИЛ-17, продемонстрировали обнадеживающие результаты аксиального СпА. 53, 55

На макроскопическом уровне патологический воспалительный каскад нарушает нормальный гомеостаз костеобразования и резорбции кости. Конечным результатом является патологическое образование эндохондральной кости, известное как остеопролиферация . 15 Образуются осевые синдесмофиты и периферические остеофиты. Возможное слияние синдесмофитов приводит к анкилозу.

Прогрессирование заболевания, включая естественное течение, фазы или стадии заболевания, траекторию заболевания (клинические особенности и проявление во времени)

СпА характеризуются нарастающим и затухающим течением активного воспаления, чередующимся с периодами слабого воспаления или его отсутствия.Симптомы коррелируют с участками воспаления вокруг периартикулятора и мест прикрепления сухожилий. Воспалительная боль в спине является частым проявлением СпА. Характеризуется утренней скованностью продолжительностью более 30 минут. Периферические энтезы возникают в местах, подвергающихся большей физической нагрузке, таких как подошвенная фасция и ахиллово сухожилие. Существует также асимметричный периферический артрит нижних конечностей, особенно тазобедренных и коленных суставов. Дактилит может наблюдаться при реактивном артрите, псориатическом артрите и недифференцированном СпА. 6,10,11

Естественное течение СпА зависит от конкретных подтипов. Даже в пределах подтипов тяжесть заболевания может различаться. AS является наиболее изученным SpA. Естественным течением более тяжелых форм АС, если его не остановить, является сращение позвоночника, начинающееся с крестцово-подвздошных суставов и прогрессирующее краниально. Это приводит к ограниченному сгибанию поясницы, ограниченному расширению грудной клетки и гиперкифозу. 6,10

Специфические вторичные или ассоциированные состояния и осложнения

Наиболее частым внесуставным признаком является передний увеит, который встречается у 20-30% пациентов с АС, но менее чем у 1% пациентов с ПсА. 6,10 Поражение кожи в форме псориаза. 3 Также существует связь между СпА и воспалительным заболеванием кишечника (ВЗК). Бессимптомное воспаление терминального отдела подвздошной кости и проксимального отдела толстой кишки может быть обнаружено при серийной колоноскопии в 60% случаев АС и УСПА. 10,11 Примерно у 10% пациентов с диагнозом СпА развивается ВЗК. 16

Остеопороз обычно встречается при АС и СпА в целом и является причиной потери прочности костей.Потеря костной массы может наблюдаться на ранних стадиях заболевания и преимущественно обнаруживается в позвоночнике. Это связано с мужским полом, длительностью, тяжестью заболевания, наличием синдесмофитов в позвоночнике. Низкая минеральная плотность костной ткани (МПКТ) увеличивает риск переломов позвонков, которые способствуют кифозу, деформации позвонков и функциональной потере. 16,17

Другие сопутствующие состояния включают диабет, гиперлипидемию, ожирение, гипертензию, сердечно-сосудистые заболевания, уретрит и иногда повышенную смертность. 12

Основы оценивания

Некоторые исследования указывают на 5-6-летнюю задержку между появлением симптомов и постановкой диагноза. 6,10 Но невылеченный СпА может привести к значительному бремени болезни и инвалидности. Это делает раннюю диагностику и лечение крайне важными. Первым шагом является распознавание воспалительной боли в пояснице. Второй шаг – срочное обращение к ревматологу. В «Дополнительных инструментах оценки» ниже есть некоторые материалы, которые помогут вам.Обратите внимание на критерии, используемые для определения воспалительной боли в пояснице.

История

Люди со СпА обычно жалуются на утреннюю скованность и боль в пояснице, которые уменьшаются при физических нагрузках и приеме НПВП. Воспалительная боль в нижней части спины является отличительной чертой СПА, и ее признание имеет решающее значение для ранней диагностики. Утренняя скованность обычно длится более 30 минут. Боль в пояснице иррадиирует в ягодицы, а ночная боль в спине возникает только во второй половине ночи. 6,10,13 Хроническая БНС, длящаяся более 3 месяцев с началом до 45 лет, должна вызвать подозрение на аутоиммунное заболевание.

Кроме того, другие общие симптомы, на которые следует обратить внимание, включают энтезит (например, пяточной кости или седалищного бугра), одностороннюю или симметричную боль артритического типа, а также общие внесуставные проявления СпА, такие как увеит, ирит, кожные сыпь, конституциональные симптомы, дактилит и аортит. РеА обычно проявляется через 2-4 недели после перенесенной урогенитальной (включая венерические заболевания) или желудочно-кишечной инфекции. 13

Физикальное обследование

Выводы при физикальном обследовании у пациентов с СпА включают: ограничение подвижности позвоночника, болезненность крестцово-подвздошных и периферических суставов при пальпации, отек, повышение температуры и эритему (синовит) в периферических суставах, энтезит (отек, повышение температуры, болезненность, эритему при пальпации). места прикрепления сухожилий), дактилит и соответствующие кожные высыпания (такие как псориаз).Пациенты с умеренным и тяжелым АС обычно имеют положительный тест Шобера (очень ограниченный диапазон движений при межсегментарном сгибании в поясничном отделе — см. ниже).

Функциональная оценка

Функциональные трудности из-за болей в позвоночнике и артрита периферических суставов следует оценивать у пациентов с подозрением на СпА. Функциональная оценка должна быть адаптирована к индивидуальному заболеванию. Всем пациентам с АС необходимо оценивать диапазон движений шейного отдела позвоночника. Эта группа пациентов подвержена риску развития прогрессирующей деформации сгибания позвоночника, которую можно измерить с помощью теста от затылка до стены.Вовлечение грудного отдела позвоночника пациента можно измерить по степени расширения грудной клетки. Диапазон движений поясничного отдела позвоночника измеряют в сагиттальной и коронарной плоскостях. Поясничное сгибание оценивают с помощью модифицированного теста Шобера. 18,19 Следует использовать инструмент функциональной оценки, такой как функциональный индекс анкилозирующего спондилита Bath (BASFI). 20

Лабораторные исследования

Специфических лабораторных тестов для подтверждения подозрения на СпА не существует. Скорее, диагноз ставится на основе комбинации клинических, радиологических и лабораторных данных.Большинство пациентов со СпА имеют положительный результат HLA-B27, повышенный С-реактивный белок (СРБ) или скорость оседания эритроцитов (СОЭ), а также отрицательные результаты тестов на РФ и антинуклеарные антитела (АНА). От 90 до 95% пациентов с АС и 81% пациентов с РеА являются HLA-B27-положительными. СРБ или СОЭ повышены у 72-90% пациентов с АС и РеА. 21

Визуализация

Каждый из СпА имеет некоторую степень воспаления крестцово-подвздошного и спинного мозга. Хотя обычные рентгенограммы являются предпочтительным методом визуализации, они выявляют костные изменения примерно через 6 месяцев после появления клинических симптомов, что приводит к задержке в постановке диагноза.МРТ является наиболее чувствительным методом визуализации для выявления активного воспаления крестцово-подвздошных суставов с использованием насыщенной жиром Т2-взвешенной последовательности турбо-спин-эхо или коротких последовательностей восстановления инверсии тау (STIR) с настройками высокого разрешения. 22 Ультрасонография (УЗИ) также лучше, чем обычные рентгенограммы, для раннего выявления воспалительных изменений и лучше, чем МРТ, для выявления и лечения энтезита. Компьютерная аксиальная томография (КТ) может быть полезна при оценке позвоночника на наличие скрытых переломов, а также структурных/костных изменений, указывающих на сакроилеит (таких как синдесмофиты).Они могут быть не такими четкими на МРТ, которая лучше подходит для локализации признаков активного воспаления, которые предполагают ожидаемый ответ на блокаторы ФНО. 2,6,10,22,23,44

Интересно, что недавние исследования предполагают использование так называемых «оппортунистических» КТ брюшной полости (которые уже проводились для других целей) в качестве инструмента скрининга у пациентов из группы риска. Учитывая впечатляющую чувствительность и специфичность для выявления сакроилеита, это был бы разумный подход, когда МРТ недоступна или невозможна. 45, 46 Кроме того, КТ органов брюшной полости включает грудной отдел позвоночника (где при АС обнаруживается большинство синдесмофитов). Эти сканирования были выполнены у пациентов из группы риска с сопутствующими заболеваниями, подозрением на новообразования или латентными/рецидивирующими инфекциями, исключающими использование блокаторов ФНО. 47,48,49

Рентгенограммы также помогают дифференцировать подтипы СпА, исключая сходные заболевания. Сакроилеит при АС двусторонний и симметричный, тогда как при РеА и ПсА он часто бывает односторонним или асимметричным.Сакроилеит, связанный с СпА, необходимо отличать от других причин, таких как инфекция и конденсатный остит подвздошной кости. Отсутствие сакроилеита типично для синдрома диффузного идиопатического скелетного гиперостеоза (DISH), который можно спутать с AS 23 . Синдром DISH обычно возникает у пожилых пациентов, и его спинальные проявления прогрессируют краниокаудально с паравертебральным и парадискальным окостенением и остеофитами с кальцификацией связок, особенно передней продольной связки. 23 Напротив, АС начинается в крестцово-подвздошных суставах и распространяется вверх по позвоночнику. 2,5,6,7

В более тяжелых и запущенных случаях воспаление позвоночника при АС приводит к истиранию и квадратизации позвонков с последующей остеопролиферацией и образованием синдесмофитов. Слияние этих костных выростов известно как анкилоз и дает вид «бамбукового шипа » на простой рентгенографии. 23 Следует отметить, что КТ может обнаружить изменения в АС раньше, чем рентгенограммы, особенно в отношении синдесмофитов.Важно отметить, что ограничения подвижности позвоночника обычно связывают с этими синдесмофитами, а также с образованием мостов, и поэтому они рассматриваются как применимые визуализирующие маркеры для мониторинга прогрессирования АС. 44,50

Классическая рентгенологическая находка « карандаш в чашке », которая наблюдается при мутилирующем артрите, наиболее тяжелой форме ПсА, является проявлением тяжелой деструкции и пролиферации кости, приводящей к укорочению фаланг. 6,10

Следует рассмотреть возможность двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии (DEXA), поскольку остеопороз обычно встречается при АС и СпА в целом.Низкая МПК увеличивает риск переломов позвонков, которые способствуют кифозу, деформации позвонков и функциональной потере. 17 Измерения позвоночника могут быть нормальными или даже высокими, потому что мостовидные синдесмофиты, обнаруженные при АС, могут маскировать остеопороз. Измерения шейки бедра могут быть более точными. 23

Дополнительные инструменты оценки

Международное общество оценки спондилоартрита (ASAS) Критерии воспалительной боли в спине: 18 необходимо как минимум 4 из 5

  • Боль в пояснице более 3 месяцев
  • Возраст начала до 40 лет
  • Незаметное начало
  • Улучшение при физической нагрузке
  • Боль ночью (с улучшением при вставании)

    BASFI — это среднее значение 10 баллов по числовой шкале оценок.Пункты, которые должен оценить пациент:

    • Надевание носков или колготок без посторонней помощи или вспомогательных средств (например, носка).
    • Наклониться вперед от талии, чтобы поднять ручку с пола без посторонней помощи.
    • Дотягиваться до высокой полки без посторонней помощи или вспомогательных средств (например, руки помощи).
    • Вставать со стула без подлокотников в столовой без помощи рук или какой-либо другой помощи.
    • Подъем с пола без посторонней помощи из положения лежа на спине.
    • Стоять без поддержки в течение 10 мин без дискомфорта.
    • Подъем от 12 до 15 ступеней без использования перил или вспомогательных средств для ходьбы. Одна нога на каждом шагу.
    • Оглядываясь через плечо, не поворачиваясь.
    • Выполнение физических упражнений (например, физиотерапия, упражнения, садоводство или спорт).
    • Занятия в течение всего дня, будь то дома или на работе.

    Модифицированный тест Шобера 17 Пациент должен стоять прямо.

    • Отметьте воображаемую линию, соединяющую обе задние верхние ости подвздошных костей (рядом с ямочками Венеры) (А).
    • Следующая метка размещается на 10 см выше (B).
    • Пациент максимально наклоняется вперед: измерьте разницу (С).
    • Сообщите об увеличении (в см с точностью до 0,1 см).
    • Записывается лучшая из двух попыток.

    Оценка спондилоартрита Международным обществом (ASAS) Критерии классификации аксиального спондилоартрита и спондилоартрита в целом: 24

    В настоящее время не существует диагностических критериев спондилоартритов.Скорее, существуют критерии классификации, разработанные ASAS с целью раннего выявления и лечения. ASAS делит СпА на преимущественно аксиальные (аксСпА) и преимущественно периферические (пСпА). Пациент может быть классифицирован как аксСпА либо по пути, начинающемуся с присутствия HLA-B27, либо по рентгенологическим признакам сакроилеита.

    Для выявления пациентов со СпА необходимо наличие симптомов БНС, длящихся ≥ 3 месяцев и возникающих в возрасте до 45 лет. Кроме того, должны быть соблюдены следующие критерии: сакроилеит при визуализации плюс один или несколько признаков СпА, перечисленных ниже.Или, в качестве альтернативы, положительный результат на HLA-B27 плюс два или более из следующих признаков SpA, перечисленных ниже:

    • Воспалительные боли в спине
    • артрит
    • Энтезит (например, пятка)
    • увеит
    • дактилита
    • Псориаз
    • Крон / колита
    • Хороший ответ на НПВС
    • Семейный анамнез SpA
    • HLA-B27
    • Повышенные С-реактивный белок (СРБ)

    У пациентов только с периферическими симптомами должны присутствовать артрит, энтезит или дактилит плюс один или несколько признаков СпА, перечисленных ниже:

    • Увеит
    • Псориаз
    • Болезнь Крона/язвенный колит
    • Предшествовавшая инфекция
    • HLA-B27
    • Сакроилеит при визуализации

    Или:

    Две или более других функции SpA:

    • Артрит
    • Энтезит
    • Дактилит
    • Воспалительные боли в спине в анамнезе
    • Семейный анамнез СпА

    Раннее прогнозирование исходов

    Плохие прогностические показатели включают более ранний возраст начала заболевания, большее поражение периферических, чем осевых суставов, увеит и повышенную скорость оседания эритроцитов (СОЭ), а также плохой ответ на нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП). 12

    Окружающая среда

    Как и при ревматоидном артрите, изменения барометрического давления могут повлиять на боль в позвоночнике или суставах, связанную с СпА. Повторяющаяся рабочая среда может спровоцировать боль и увеличить риск инвалидности. Необходимо устранить функциональные барьеры дома или на работе.

    Социальная роль и система социальной поддержки

    По мере прогрессирования СПА может возникнуть инвалидность, влияющая на роль пациента дома или на работе и потенциально отрицательно влияющая на его отношения.Формальные группы поддержки, как лично, так и онлайн, существуют. Их много, и они должны быть проверены практикующими врачами, прежде чем к ним присоединится их пациент. Одно место, где можно найти список групп поддержки через Американскую ассоциацию спондилита. https://www.spondylitis.org/Сообщество

    Управление реабилитацией и лечение

    Имеющиеся или действующие руководства по лечению

    Лечение направлено на предотвращение прогрессирования заболевания, сохранение архитектуры и функции сустава и купирование отдельных симптомов.Подход к лечению является мультимодальным, включая обучение, направление к специалистам, изменение образа жизни и рабочего места, профилактику, профессиональную и физиотерапию, регулярные физические упражнения и медикаментозное лечение.

    Американский колледж ревматологии, Американская ассоциация спондилита и Сеть исследований и лечения спондилита совместно разработали рекомендации по лечению в 2015 году. 25 Эти рекомендации охватывают спектр как фармакологических, так и нефармакологических методов лечения.Отдельно, в 2015 году, члены специальной группы по АС в Австралии разработали первые комплексные рекомендации по упражнениям для пациентов с АС. 26 Эти рекомендации экстраполированы для всех SpA и включены ниже.

    Специфические функциональные меры для СпА отсутствуют. Тем не менее, Батский метрологический индекс анкилозирующего спондилита (BASMI) является категоричным для AS 18 . Это показатель осевой мобильности, связанный с качеством жизни, физической функцией и психологическим статусом.Вовлечение тазобедренного сустава можно оценить с помощью внутренней ротации тазобедренного сустава на основе ленты. Необходимо оценить силу, равновесие и сердечно-легочный статус. Шкала качества жизни при анкилозирующем спондилите (ASQoL) представляет собой инструмент для оценки влияния вмешательств на качество жизни при АС и обычно используется для оценки эффектов лечения. 36

    Модификации образа жизни

    направлены на минимизацию повторяющихся механических нагрузок. Для тех, кто курит, прекращение курения должно быть приоритетом, чтобы предотвратить худшие последствия и повреждение позвоночника.Консультации по диете могут быть уместны, и следует решить проблему ожирения, поскольку оно создает большую нагрузку на позвоночник и способствует возникновению болей в пояснице. Может потребоваться адаптация и модификация дома и рабочего места. Предпочтительнее твердый, но не жесткий матрас. Точно так же предпочтение следует отдавать офисным стульям, которые способствуют хорошей осанке. 23

    Упражнения должны быть частью немедикаментозного подхода к лечению. 23,25,27 Было показано, что программы упражнений улучшают функцию, уменьшают боль и снижают общую оценку активности заболевания пациентами по сравнению с отсутствием вмешательства. 37 Упражнения, представляющие собой игры, основанные на движениях тела виртуального аватара и ультразвуковой терапии, повышают физическую активность и снижают показатели боли у пациентов с АС. 38,39 Пациенты со СпА должны стремиться к пожизненной программе упражнений. В целом, в рецептах упражнений лучше всего сосредоточиться на упражнениях с низким воздействием. Пилатес, тай-чи и некоторые формы йоги могут быть полезными и могут выполняться в группе. Пациенты, желающие заниматься более агрессивными видами деятельности, должны оцениваться в каждом конкретном случае.Прежде чем разрешать высокоэффективные упражнения или физическую активность, такую ​​как боевые искусства или аттракционы в тематических парках, необходимо уделить особое внимание. Упражнения с высокой скоростью или сильным сопротивлением оказывают большое давление на суставы. Упражнения, которые создают чрезмерные проблемы с равновесием, постуральной стабильностью или сердечно-легочной функцией, могут нуждаться в модификации. Следует избегать чрезмерной подвижности позвоночника или периферических суставов при анкилозах. 26 При выписывании рецепта на физические упражнения следует учитывать изменения костей, баланс, подвижность, остеопороз и состояние сердечно-легочной системы.

    Рецепт должен быть направлен на поддержание осанки, гибкости и укрепление кора и сердечно-легочной системы. 27 После полной оценки состояния опорно-двигательного аппарата могут быть назначены упражнения, направленные на определенные группы мышц для исправления осанки. Например, у пациентов с чрезмерным шейным кифозом шейные сгибатели растягиваются, а шейные разгибатели укрепляются. 27

    Трудотерапия и физиотерапия играют важную роль в мультимодальном подходе к лечению.Эрготерапевты могут обследовать жилые дома и рабочие места, чтобы дать рекомендации по адаптивному оборудованию и эргономическим модификациям. И трудотерапия, и физиотерапия полезны при лечении энтезита с помощью модальностей и индивидуальных ортопедических стелек. При ахилловом тендините и подошвенном фасците можно заказать индивидуальные стельки. Ночные шины для отдыха можно использовать при тендините и теносиновите кистей, запястий, лодыжек и стоп, чтобы предотвратить контрактуры суставов. Физиотерапевты и эрготерапевты могут помочь с активным и пассивным диапазоном движений суставов и, что более важно, обучать пациентов делать это дома.

    Фармакологическими вариантами СпА являются нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП), инъекции глюкокортикоидов и ингибиторы фактора некроза опухоли (ФНО). НПВП являются фармакологическими препаратами первой линии при лечении СпА и могут обладать активностью, модифицирующей заболевание, и снижать прогрессирование заболевания на рентгенограммах позвоночника. Их следует назначать по расписанию. 25,28, Хороший ответ на НПВП убедительно подтверждает диагноз спондилоартрита и фактически является частью критериев классификации СпА. 28 Длительное применение глюкокортикоидов не рекомендуется; тем не менее, краткосрочное введение глюкокортикоидов с быстро снижающейся дозой может быть рассмотрено при тяжелых обострениях артрита. Инъекции глюкокортикоидов эффективны при энтезах и воспаленных суставах, но следует избегать перисухожильных инъекций в ахиллово сухожилие, надколенник или четырехглавую мышцу. Глюкокортикоиды для местного применения могут быть назначены для быстрого домашнего применения в случае острого ирита. 23,25 В настоящее время недостаточно данных, подтверждающих пользу метотрекстата при лечении ПА или АС.Хотя было показано, что низкие дозы метотрексата облегчают симптомы псориатического артрита у пациентов с активным псориатическим артритом через 6 месяцев, он не оказывает существенного влияния на объективные показатели синовита, включая СОЭ, СРБ и количество болезненных или опухших суставов 40 . Точно так же многочисленные исследования продемонстрировали противоречивые результаты относительно эффективности метотрексата у пациентов с активным АС. 41,42,43 Блокаторы фактора некроза опухоли (ФНО) α, напротив, продемонстрировали значительную эффективность при лечении АС и СпА.Все проявления заболевания, включая синовит, воспаление суставов, энтезит, дактилит, аксиальное заболевание, изменения кожи и ногтей, реагируют на блокаторы ФНО-α. Они рекомендуются пациентам с недостаточным ответом на НПВП. 22,25

    Координация ухода

    Ревматологи, как правило, руководят лечением пациентов со СпА. Подход к уходу является мультимодальным и может потребовать других специальностей. При наличии псориатических проявлений или ПсА следует проконсультироваться с дерматологами.Направление к гастроэнтерологу может быть полезным, поскольку при СпА часто встречается поражение желудочно-кишечного тракта. Любой пациент с увеитом должен быть осмотрен офтальмологом.

    Физиотерапевты играют решающую роль в уходе за пациентами со СпА и могут иметь с ними даже больше контактов, чем представители других специальностей. Боль является распространенным симптомом, и пациенты со СпА получат большую пользу от фармакологического и немедикаментозного подхода к боли с помощью PM&R. Кроме того, физиотерапевты могут оценить состояние опорно-двигательного аппарата и выписать индивидуальные рецепты терапии.

    Обучение пациентов и семей

    Обучение может проводиться в рамках формальной группы поддержки или индивидуальной программы самоконтроля. 23,25 Несмотря на то, что существует множество обучающих веб-сайтов, практикующий врач должен подсказать пациенту, как использовать заслуживающие доверия сайты, основанные на фактических данных.

    Пациентов следует информировать о генетических последствиях СпА. Например, если у человека моложе 40 лет есть член семьи с АС, у которого положительный HLA-B27, вероятность развития АС у этого человека составляет 20%. 12

    Новые/уникальные вмешательства

    Результаты лечения можно оценить с помощью анализа крови (СРБ > СОЭ), 12 визуализации (рентгенографии и МРТ суставов), физикального обследования (включая тест Шобера) и функциональных исследований (наблюдение за повседневной деятельностью) и обследования (индекс Освестри, краткая форма-36, визуальная аналоговая шкала боли). Мерой результата, специально разработанной для АС, является индекс активности анкилозирующего спондилита Бата (BASDAI). 18

    Преобразование в практику: практические «жемчужины»/улучшение эффективности на практике (PIP)/изменения в клиническом поведении и навыках

    Ранняя диагностика и лечение являются важнейшей концепцией СпА. Для этого физиотерапевты должны распознавать признаки и симптомы СПА, а затем незамедлительно направлять пациентов к ревматологам. Зайпер и Рудвалейт опубликовали алгоритм, помогающий в этом. Шаги описаны ниже. 54

    Если у пациента наблюдается ≥ 3 месяцев БНС в возрасте до 45 лет, перейдите к шагу 1.

    1. Не заказывайте новые изображения, а просмотрите уже имеющиеся изображения (МРТ/рентген). При наличии признаков сакроилеита следует обратиться к ревматологу. В противном случае перейдите к шагу 2.
    1. Предполагают ли симптомы пациента воспалительную БНС? Эти симптомы:
      • утренняя скованность, продолжающаяся более 30 минут
      • БНС возникает в основном поздно ночью/ранним утром
      • Боль уменьшается при физических нагрузках
      • Если симптомы пациента не указывают на воспалительную БНС, перейдите к шагу 3
    2. Проверьте HLA-B27 , если положительный, обратитесь к ревматологу.

    Другие клинические жемчужины на заметку:

    SpA обычно хорошо реагируют на НПВП, и если нет противопоказаний, следует назначить НПВП. Воздержитесь от использования пероральных глюкокортикоидов. Физиотерапевты могут играть решающую роль в уходе за пациентами со СпА. Физиотерапевты могут видеть этих пациентов с хронической формой чаще, чем другие специалисты. В связи с этим мы должны быть осведомлены об осложнениях этой группы заболеваний и направлять и координировать свои действия с ревматологами.

    Передовые/новые и уникальные концепции и практика

    Как упоминалось выше, это захватывающее время в области исследований для SpAs. В сентябре 2016 г. на Международном конгрессе по спондилоартритам (SPA) изучалась эффективность ИЛ-17, ингибиторов ИЛ-17А. В 2017 году рандомизированное контролируемое двойное слепое исследование показало, что секукинумаб, моноклональное антитело к IL-17A, дает значительное улучшение на срок до одного года по многим исходам, включая боль, функцию и активность заболевания у пациентов с умеренным и тяжелым АС. 55 Больше света проливается на блокаторы TNF, роль IL-23 и IL-17 и взаимодействие генетики и факторов окружающей среды. Это дает надежду на многообещающие методы лечения и новые стратегии лечения.

    Существуют также интересные потенциальные возможности для исследования КТ с низкой дозой облучения и модификаций, которые могут быть внесены в традиционные методы КТ (косое или аксиальное сканирование), которые могут максимизировать диапазон сканирования при минимальном облучении. Другие технические усовершенствования (такие как итеративная реконструкция) также могут быть использованы для уменьшения шума, связанного с КТ с низкой дозой облучения. 48,51,52

    Пробелы в доказательных знаниях

    Как обсуждалось выше, роль HLA-B27 в этой группе заболеваний требует более глубокого понимания. Необходимы дальнейшие исследования патофизиологических процессов подтипов СпА, чтобы определить, являются ли они разными фенотипами одного и того же патологического процесса или же вовлечены разные процессы. С точки зрения визуализации, хотя МРТ не включает лучевую нагрузку, она лучше подходит для выявления ранних воспалительных изменений, а не структурных повреждений (синдесмофитов), учитывая отсутствие сигнала от кортикального слоя кости.По этой причине необходимы более обширные исследования для сравнения чувствительности и специфичности низкодозовой КТ с обычными/полнодозовыми КТ для выявления структурных поражений, характерных для сакроилеита, в попытке свести к минимуму лучевую нагрузку.

    Ссылки

    1. Zochling J, et al. Серонегативный спондилоартрит. Передовая практика и исследования в области клинической ревматологии . 2010; 24:747-756.
    2. Зохлинг Дж., Брандт Дж., Браун Дж. Текущая концепция спондилоартрита с особым акцентом на недифференцированный спондилоартрит.Ревматология (декабрь 2005 г.) 44 (12): 1483-1491. http://doi.org/10.1093/rheumatology/kei047
    3. http://www.spondylitis.org/Learn-About-Spondyloarthritis/Overview. По состоянию на 19 сентября 2016 г.
    4. М. БЕНДЖАМИН и Д. МакГОНАГЛ (2001). Анатомические основы локализации заболевания при серонегативной спондилоартропатии в энтезисах и связанных с ними локализациях. Журнал анатомии, 199, стр. 503-526. дои: 10.1017/S0021878201008561.
    5. Хан М.А. Актуальная информация о спондилоартропатиях. Энн Интерн Мед. 2002;136:896-907
    6. Rudwaleit M, Landewé R, van der Heijde D, et al.Разработка критериев классификации спондилоартрита международного общества для аксиального спондилоартрита (части I и II). Анналы ревматических болезней . 2009;68:770–83.
    7. Лондоно Дж., Сантос А.М., Пенья П. и др. Анализ HLA-B15 и HLA-B27 при спондилоартритах с периферической и аксиальной клинической картиной. BMJ Open 2015;5:e009092. doi:10.1136/bmjopen-2015-009092
    8. Столвейк, К., Боонен, А., ван Туберген, А., и Ревейл, Дж. Д. (2012).Эпидемиология спондилоартрита. Клиники ревматических заболеваний Северной Америки, 38(3), 441–476. http://doi.org/10.1016/j.rdc.2012.09.003
    9. Недифференцированная спондилоартопатия: диагностические проблемы и варианты лечения. http://www.apiindia.org/pdf/medicine_update_2010/rheumatology_05.pdf
    10. Колменья И., Кучакович Р. и Эспиноза Л. Р. (2004). HLA-B27-ассоциированный реактивный артрит: патогенетические и клинические аспекты. Clinical Microbiology Reviews , 17 (2), 348–369.http://doi.org/10.1128/CMR.17.2.348-369.2004
    11. Эренфельд М. Спондилоартропатии. Передовая практика и исследования в области клинической ревматологии . 2012;26:135-45.
    12. Риццо А. и др. Роль хламидийной и хламидофильной инфекций в реактивном артрите. Стажер-медик . 2012;51:113-117.
    13. Люббертс Э. Ось IL-23-IL-17 при воспалительном артрите. Нат Рев Ревматол. 2015 июль; 11 (7): 415-29. doi: 10.1038/nrrheum.2015.53.
    14. Ван Дуйвенворде, Л. М., Доррис, М.Л., Сатумтира, Н., ван Ток, М.Н., Редлих, К., Так, П.П., … Баетен, Д.Л. (2012). Взаимосвязь между воспалением, разрушением костей и остеопролиферацией при спондилоартрите у трансгенных крыс HLA-B27/Huβ2m. Артрит и ревматизм, 64 (10), 3210–3219. http://doi.org/10.1002/art.34600
    15. El Maghraoui A, Внесуставные проявления анкилозирующего спондилита: распространенность, характеристики и терапевтические последствия, Eur J Intern Med (2011), doi:10.1016/j.ejim. 2011.06.006
    16. Ван дер Вейден, М.А.К., ван Дендерен, Дж.К., Лемс, В.Ф., Хейманс, М.В., Дийкманс, Б.А.С., и ван дер Хорст-Брюинсма, И.Е. (2011). Низкая минеральная плотность костной ткани связана с мужским полом и сниженной функциональной способностью при ранних спондилоартропатиях. Клиническая ревматология, 30(4), 497–503. http://doi.org/10.1007/s10067-010-1538-8
    17. Seiper J et al. Справочник Международного общества по оценке спондилоартрита (ASAS): руководство по оценке спондилоартрита. Энн Реум Дис; 2009; ii1-ii44 doi: 10/1136/ard.2008.104018
    18. Зохлинг Дж., Браун Дж. Оценка анкилозирующего спондилита. Clin Exp Rheumatol 2005; 23 (дополнение 39): S133-S141.
    19. Калин А., Джонс С.Д., Гарретт С.Л., Кеннеди Л.Г. Банный анкилозирующий спондилоартрит Функциональный индекс. Бр Дж. Ревматол 1995; 34:793–4.
    20. Анкилозирующий спондилит и псориатический артрит. В DynaMed [база данных онлайн]. Издательство ЭБСКО. http://web.ebscohost.com. Обновлено 12 июня 2012 г., 10:22:00 и 17 сентября 2012 г., 11:49:00. По состоянию на 8 октября 2012 г.
    21. Астрид ван Туберген, Ульрих Вебер.Диагностика и классификация спондилоартрита: выявление хамелеона. Нат Рев Ревматол. 2012 27 марта; 8(5): 253–261. Опубликовано в Интернете 27 марта 2012 г. doi: 10.1038/nrrheum.2012.33
    22. Элиан М. и Хан М.А. (2011) Спондилоартропатии: обновленная информация о диагностике и терапии. http://www.consultant360.com/articles/spondyloarthropathies-update-diagnosis-and-therapy
    23. Rudwaleit M, van der Heijde D, Landewé R, Listing J, Akkoc N, et. др. Разработка критериев классификации аксиального спондилоартрита Международного общества оценки спондилоартрита (часть II): проверка и окончательный выбор.Энн Реум Дис, 2009 г .; 68: 777-783
    24. Ward MM, Deodhar A, Akl EA, et al. Американский колледж ревматологии / Американская ассоциация спондилита / Сеть исследований и лечения спондилоартрита 2015 г. Рекомендации по лечению анкилозирующего спондилита и нерадиографического аксиального спондилоартрита. Arthritis Rheumatol 2015.
    25. Millner JR et al «Упражнения при анкилозирующем спондилите: консенсусное заявление, основанное на фактических данных» Semin. Артрит. Реум. 2015 г.; DOI: 10.1016/j.semarthrit.2015.08.003.
    26. Лечение аксиального спондилоартрита: http://nass.co.uk/exercise/exercise-for-your-as/ По состоянию на 19 сентября 2016 г.
    27. Браун Дж., Зипер Дж. Анкилозирующий спондилоартрит. Ланцет. 2007; 369:1379-1390.
    28. Sieper, J. & Rudwaleit, M. Рекомендации по раннему направлению пациентов с анкилозирующим спондилитом (включая дорентгенографические и рентгенографические формы) в учреждения первичной медико-санитарной помощи. Анна. Реум. Дис. 64, 659–663 (2005).
    29. 10 Международный конгресс по спондилоартритам (СПА), план программы http://spa-congress.орг/программа. По состоянию на 19.09.16
    30. Акассу, А., и Бакри, Ю. (2018). Влияет ли статус HLA-B27 на фенотип анкилозирующего спондилита? Знания клинической медицины. Артрит и заболевания опорно-двигательного аппарата , 11 , 1179544117751627. https://doi.org/10.1177/1179544117751627
    31. Акассу А., Бакри Ю. Влияет ли статус HLA-B27 на анкилозирующий фенотип? Clin Med Insights Артрит Расстройство опорно-двигательного аппарата. 2018 8 января; 11:1179544117751627. дои: 10.1177/1179544117751627.PMID: 29343996; PMCID: PMC5764146.
    32. Беннет Дж. Э., Долин Р., Блазер М. Дж. Принципы и практика инфекционных заболеваний Манделла, Дугласа и Беннета . Эльзевир Сондерс; 2015
    33. Fragoulis GE, Liava C, Daoussis D, Akriviadis E, Garyfallos A, Dimitroulas T. Воспалительные заболевания кишечника и спондилоартропатии: от патогенеза к лечению. Мир J Гастроэнтерол. 2019 14 мая; 25 (18): 2162-2176. дои: 10.3748/wjg.v25.i18.2162. PMID: 31143068; PMCID: PMC6526158.
    34. Денис Уэйкфилд, Джон Х.Чанг, Шахриар Амджади, Зои Маконочи, Ахмед Абу эль-Асрар и Питер МакКласки (2011) Что такое новый острый передний увеит HLA-B27?, Глазная иммунология и воспаление, 19:2, 139-144, DOI: 10.3109/09273948.2010.542269
    35. Ruiz DG, Azevedo MN, Lupi O. Частота HLA-B27 в группе больных псориатическим артритом. Бюстгальтеры Дерматол. 2012 ноябрь-декабрь;87(6):847-50. doi: 10.1590/s0365-05962012000600004. PMID: 23197202; PMCID: PMC3699907.
    36. Довард, Л. К., Спуренберг, А., Кук, С. А., Уолли, Д., Хеллиуэлл, П.С., Кей, Л.Дж., Маккенна, С.П., Теннант, А., ван дер Хейде, Д., и Чемберлен, М.А. (2003). Разработка ASQoL: инструмент качества жизни, характерный для анкилозирующего спондилита. Анналы ревматических болезней , 62 (1), 20–26. https://doi.org/10.1136/ard.62.1.20
    37. Regnaux JP, Davergne T, Palazzo C, Roren A, Rannou F, Boutron I, Lefevre-Colau MM. Программы упражнений при анкилозирующем спондилите. Cochrane Database Syst Rev.2019 2 октября; 10 (10): CD011321. doi: 10.1002/14651858.CD011321.pub2. Epub перед печатью. PMID: 31578051; PMCID: PMC6774752.
    38. Карахан А.Ю., Ток Ф., Йилдирим П., Ордахан Б., Туркоглу Г., Сахин Н. Эффективность экзергеймов у пациентов с болезнью Бехтерева: рандомизированное контролируемое исследование. Adv Clin Exp Med. 2016 сен-октябрь;25(5):931-936. дои: 10.17219/acem/32590. PMID: 28028958.
    39. Şilte Karamanlioğlu D, Aktas I, Ozkan FU, Kaysin M, Girgin N. Эффективность ультразвукового лечения с лечебной физкультурой у пациентов с анкилозирующим спондилитом: двойное слепое рандомизированное плацебо-контролируемое исследование.Ревматол Интерн. 2016 май; 36(5):653-61. doi: 10.1007/s00296-016-3441-3. Epub 2016 Feb 29. PMID: 26923690.
    40. Kingsley GH, Kowalczyk A, Taylor H, Ibrahim F, Packham JC, McHugh NJ, Mulherin DM, Kitas GD, Chakravarty K, Tom BD, O’Keeffe AG, Maddison PJ, Scott ДЛ. Рандомизированное плацебо-контролируемое исследование метотрексата при псориатическом артрите. Ревматология (Оксфорд). 2012 авг; 51 (8): 1368-77. doi: 10.1093/ревматология/kes001. Epub 2012, 17 февраля. PMID: 22344575; PMCID: PMC3397466.
    41. Гонсалес-Лопес Л., Гарсия-Гонсалес А., Васкес-Дель-Меркадо М., Муньос-Валле Х.Ф., Гамес-Нава Х.И.Эффективность метотрексата при анкилозирующем спондилите: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование. J Ревматол. 2004 г., 31 августа (8): 1568-74. PMID: 152
    42. .
    43. Roychowdhury B, Bintley-Bagot S, Bulgen DY, Thompson RN, Tunn EJ, Moots RJ. Эффективен ли метотрексат при анкилозирующем спондилите? Ревматология (Оксфорд). 2002 г., ноябрь; 41 (11): 1330-2. doi: 10.1093/ревматология/41.11.1330. PMID: 12422010.
    44. Алтан Л., Бингол У., Каракоч Ю., Айдинер С., Юрткуран М., Юрткуран М. Клиническое исследование метотрексата при лечении анкилозирующего спондилита.Scand J Ревматол. 2001;30(5):255-9. дои: 10.1080/030097401753180318. Опечатка в: Scand J Rheumatol. 2003;32(6):380. PMID: 11727838.
    45. Тан С. и Уорд М. М. (2018). Компьютерная томография при аксиальном спондилоартрите. Современное мнение в области ревматологии 30 (4), 334–339. https://doi.org/10.1097/BOR.0000000000000507
    46. Melchior, J., Azraq, Y., Chary-Valckenaere, I., Rat, A.C., Reignac, M., Texeira, P., Blum, A. и Лёй, Д. (2017). Рентгенография, КТ брюшной полости и МРТ в сравнении с КТ крестцово-подвздошного сустава в диагностике структурного сакроилеита. Европейский журнал радиологии , 95 , 169–176. https://doi.org/10.1016/j.ejrad.2017.08.004
    47. Мельхиор, Дж., Азрак, Ю., Чари-Валькенаре, И., Рат, А.-К., Тексейра, П., Блюм , А., и Лёй, Д. (2017). Рентгенография и КТ брюшной полости в сравнении с КТ крестцово-подвздошного сустава в диагностике сакроилеита. Acta Radiologica , 58 (10), 1252–1259. https://doi.org/10.1177/0284185116688377
    48. де Брюин Ф., де Конинг А., ван ден Берг Р., Баралиакос, X., Браун, Дж., Рамиро, С., ван Гаален, Ф.А., Рейньерс, М., и ван дер Хейде, Д. (2018). Развитие CT Syndesmophyte Score (CTSS) у пациентов с анкилозирующим спондилитом: данные когорты SIAS. Анналы ревматических болезней , 77 (3), 371–377. https://doi.org/10.1136/annrheumdis-2017-212553
    49. де Конинг А., де Брюин Ф., ван ден Берг Р., Рамиро С., Баралиакос Х., Браун Дж., ван Гаален Ф.А., Рейньерс М., ван дер Хейде Д. , КТ с низкими дозами выявляет большее прогрессирование остеогенеза по сравнению с обычной рентгенографией у пациентов с анкилозирующим спондилитом: результаты когорты SIAS.Энн Реум Дис. 2018 фев; 77 (2): 293-299. doi: 10.1136/annrheumdis-2017-211989. Epub 2017, 10 ноября. PMID: 2
    50. 92.
    51. Тан С., Яо Л. и Уорд М. М. (2017). Грудные синдесмофиты обычно встречаются при отсутствии поясничных синдесмофитов при анкилозирующем спондилите: компьютерное томографическое исследование. Журнал ревматологии , 44 (12), 1828–1832. https://doi.org/10.3899/jrheum.170340
    52. Тан С., Яо Дж., Флинн Дж. А., Яо Л. и Уорд М. М. (2017). Слияние зигапофизарных суставов при анкилозирующем спондилите по данным компьютерной томографии: ассоциации с синдесмофитами и движением позвоночника. Журнал ревматологии , 44 (7), 1004–1010. https://doi.org/10.3899/jrheum.161462
    53. Дикхофф Т., Германн К.Г., Гриз Дж., Швенке К., Поддубный Д., Хамм Б. и Зипер Дж. ( 2017). Сравнение МРТ с рентгенографией для выявления структурных поражений крестцово-подвздошного сустава с использованием КТ в качестве эталона: результаты исследования SIMACT. Анналы ревматических болезней , 76 (9), 1502–1508. https://doi.org/10.1136/annrheumdis-2016-210640
    54. Ли, С.Г., Лю С., Чжоу Х. и Чжан К. (2018). Межэкспертная достоверность и дозировка облучения косой коронарной компьютерной томографии при сакроилеите по сравнению с аксиальной компьютерной томографией. The British Journal of Radiology , 91 (1081), 20150700. https://doi.org/10.1259/bjr.20150700
    55. Зипер Дж., Поддубный Д. и Миоссек П. Ил-23 Путь IL-17 как терапевтическая мишень при аксиальном спондилоартрите. Nat Rev Rheumatol 15, 747–757 (2019).https://doi.org/10.1038/s41584-019-0294-7
    56. Рудвалейт М., ван дер Хейде Д., Хан М.А., Браун Дж., Зипер Дж. Как диагностировать аксиальный спондилоартрит на ранней стадии. Энн Реум Дис. 2004 г., май; 63(5):535-43. doi: 10.1136/ard.2003.011247. PMID: 15082484; PMCID: PMC1754994.
    57. Павелка К., Кивитц А., Докупилова Э., Бланко Р., Марадиага М., Тахир Х., Прикоп Л., Андерссон М., Риди А. и Портер Б. (2017). Эффективность, безопасность и переносимость секукинумаба у пациентов с активным анкилозирующим спондилитом: рандомизированное двойное слепое исследование 3 фазы, MEASURE 3. Исследования и терапия артрита , 19 (1), 285. https://doi.org/10.1186/s13075-017-1490-y

    Исходная версия темы

    Дэвид С. Фитч, DO, MS, PT. Серонегативные спондилоартропатии. 05.02.2013.

    Предыдущие редакции темы

    Притеш Патель, Мэриленд. Серонегативные спондилоартропатии. 04.04.2017.

    Раскрытие информации автором

    Брайан Мерто, доктор медицины
    Нечего раскрывать

    Ханни Батал, доктор медицины
    Нечего раскрывать

    Стивен Джоу, доктор медицины
    Нечего раскрывать

    Исследование

    RECOVERY показало, что комбинация моноклональных антител Regeneron снижает смертность среди госпитализированных пациентов с COVID-19, у которых не развился собственный иммунный ответ. риск смерти при назначении пациентам, госпитализированным с тяжелой формой COVID-19, у которых не развился собственный естественный ответ антител.

    В лечении используется комбинация двух моноклональных антител (казиривимаб и имдевимаб, известных в США как REGEN-COV), которые специфически связываются с двумя разными участками шиповидного белка коронавируса, нейтрализуя способность вируса инфицировать клетки.

    Предыдущие исследования пациентов с COVID-19, не находящихся на госпитализации, показали, что лечение снижает вирусную нагрузку, сокращает время до исчезновения симптомов и значительно снижает риск госпитализации или смерти. В небольшом исследовании с участием госпитализированных пациентов предварительные данные свидетельствовали о клинической пользе у пациентов, у которых не развился собственный естественный ответ антител на момент начала исследования (были серонегативными).RECOVERY — это первое достаточно крупное исследование, чтобы окончательно определить, снижает ли это лечение смертность у пациентов, госпитализированных с тяжелой формой COVID-19.

    В период с 18 сентября 2020 г. по 22 мая 2021 г. 9785 пациентов, госпитализированных с COVID-19, были случайным образом распределены для получения обычной помощи плюс комбинированное лечение антителами (казиривимаб 4 г с имдевимабом 4 г путем внутривенной инфузии) или только обычное лечение в рамках исследования RECOVERY. Из них около одной трети были серонегативными на исходном уровне (т. е. у них не развился собственный естественный гуморальный ответ), половина была серопозитивной (т. е. у них уже выработались естественные антитела) и одна шестая имела неизвестный серостатус.Среди пациентов, получавших только обычную помощь, 28-дневная смертность была в два раза выше у серонегативных (30%) по сравнению с серопозитивными (15%) на момент включения в исследование. Последующее наблюдение завершено для 99% участников, и сегодня объявлены предварительные результаты.

    Среди пациентов, которые были серонегативными на исходном уровне (популяция первичного анализа для этого сравнения), комбинация антител значительно снижала первичный исход 28-дневной смертности на одну пятую по сравнению с обычным лечением (24% пациентов в группе комбинации антител). умерли по сравнению с 30% пациентов в группе обычного ухода, отношение частоты 0,80, 95% доверительный интервал 0,70–0,91, p = 0,001).Таким образом, на каждые 100 таких пациентов, получавших лечение комбинацией антител, было бы на шесть смертей меньше.

    Имелись четкие доказательства того, что эффект лечения у серонегативных пациентов отличался от такового у серопозитивных пациентов (критерий гетерогенности p=0,001). При объединении большей серопозитивной группы (а также пациентов с неизвестным статусом) с серонегативными пациентами больше не наблюдалось значительного влияния на 28-дневную смертность (в целом 20% пациентов в группе комбинированной терапии антителами умерли по сравнению с 21% пациентов в группе комбинированной терапии). группа обычного ухода, соотношение частот 0,96, 95% доверительный интервал 0,86–1,03, p=0,17).

    Для серонегативных пациентов продолжительность пребывания в стационаре была на четыре дня короче (в среднем 13 дней против 17 дней) среди пациентов, получавших комбинацию антител, по сравнению с группой обычного лечения, а доля пациентов, выписанных живыми на 28-й день, была выше ( 64% по сравнению с 58%, отношение скоростей 1,19, 95% доверительный интервал от 1,08 до 1,30). Среди серонегативных пациентов, не получавших инвазивную искусственную вентиляцию легких на исходном уровне, риск прогрессирования до комбинированной конечной точки инвазивной искусственной вентиляции легких или смерти был ниже среди пациентов, получавших комбинацию антител, чем в группе обычного лечения (30% по сравнению с 30%).37%; отношение риска 0,83, 95% доверительный интервал от 0,75 до 0,92). В общей популяции исследования (включая пациентов с отрицательным, положительным или неизвестным серостатусом) таких преимуществ не наблюдалось.

    Сэр Питер Хорби, профессор новых инфекционных заболеваний медицинского факультета Наффилда Оксфордского университета и главный исследователь исследования RECOVERY, сказал: «Эти результаты очень интересны. Была надежда, что, дав комбинацию антител, нацеленных на вирус SARS-CoV-2, мы сможем уменьшить худшие проявления COVID-19.Однако существовала большая неопределенность в отношении ценности противовирусной терапии на поздних стадиях заболевания COVID-19. Замечательно узнать, что даже на поздних стадиях заболевания COVID-19 нацеливание на вирус может снизить смертность у пациентов, у которых не удалось создать собственный ответ антител».

    Сэр Мартин Лэндрей, профессор медицины и эпидемиологии Департамента здравоохранения Наффилда Оксфордского университета и главный исследователь, сказал: «Теперь мы знаем, что эта комбинация антител не только вредна для вируса, но и полезна для самые больные пациенты, у которых не удалось выработать собственный естественный иммунный ответ.Это отличная новость — впервые было показано, что какое-либо противовирусное лечение спасает жизни госпитализированных пациентов с COVID-19. Мы невероятно благодарны многим сотрудникам и пациентам NHS, которые внесли свой вклад в сегодняшнее открытие».

    Участник программы

    RECOVERY, Кимберли Фезерстоун (37 лет), проходил лечение в Королевской больнице Хаддерсфилда и Королевской больнице Калдердейла и был случайным образом распределен для получения комбинации моноклональных противовирусных антител. Она сказала: «Конечно, я была рада принять участие в исследовании RECOVERY.Мне очень повезло, что к тому времени, когда меня доставили в больницу с COVID-19, испытание уже было запущено, и я смог получить это новаторское лечение. Я счастлив, что, участвуя, я сыграл свою роль в том, чтобы узнать, что это лечение успешно».

    Предварительные результаты этой оценки комбинации моноклональных антител доступны в виде препринта на medRxiv и будут представлены в ведущем рецензируемом медицинском журнале.

    Профессор Фиона Уотт, исполнительный председатель Совета по медицинским исследованиям, который помог финансировать исследование, сказала: «Флагманское исследование RECOVERY еще раз лидирует, демонстрируя важность хорошо спланированных клинических испытаний для определения жизненно важных методов лечения.Это очень важное открытие означает, что для пациентов, госпитализированных с COVID-19, у которых не вырабатываются собственные антитела к вирусу, лечение препаратами на основе антител к шиповидному белку может снизить риск смерти и время, проведенное в больнице. Пациенты, у которых выработались собственные антитела к вирусу, не получают пользы от нового лечения, что также является важной информацией, учитывая стоимость лекарств».

    Профессор Ник Лемуан, медицинский директор Сети клинических исследований NIHR, сказал: «Это фантастическая новость, что исследование RECOVERY предоставило доказательства для создания еще одного жизненно важного лечения против COVID-19 с помощью этой комбинации моноклональных противовирусных антител.Невероятное влияние, которое испытание продолжает оказывать, является свидетельством не только ученых и медицинских работников, но и десятков тысяч пациентов, принявших в нем участие. Мы искренне хотим поблагодарить каждого из них за их вклад».

    Диагностика

    Слабость и утомляемость являются обычными жалобами среди населения в целом, но степень и характер этих симптомов — особенно диплопия , птоз,  и другие признаки слабости глазных мышц — должны насторожить невролога о возможности миастении. (МГ).

    Невролог задаст много вопросов и проведет медицинский осмотр, чтобы определить степень слабости. Чтобы найти признаки усиления слабости после нагрузки, невролог может попросить пациента смотреть вверх, не моргая, в течение одной или двух минут, держать руки как можно дольше или подниматься по ступенькам.

    Прикроватные тесты

    Тест со льдом можно использовать как часть неврологического обследования у пациентов с птозом (слабостью мышц век). Охлаждение мышц век помогает пациентам преодолеть птоз и служит признаком того, что у пациента может быть миастения.Чувствительность теста с пакетом со льдом составляет всего 80%, так как часто наблюдаются ложноположительные результаты. Этот тест не следует рассматривать как самостоятельный тест, а скорее как дополнение к физикальному обследованию. 1, 2

    Серологическое исследование

    Серологические тесты проверяют наличие антител в сыворотке (компоненте крови). Сероположительный означает наличие антитела в крови, а серонегативный означает, что антитело не обнаружено.

    Если физикальное обследование соответствует миастении, невролог обычно назначает анализ крови, предназначенный для обнаружения антител к рецептору ацетилхолина (АХ).Также доступен анализ крови на антитела к мышечной тирозинкиназе (MuSK). Примерно у 90% пациентов с миастенией положительный результат теста подтверждает диагноз миастении. Однако от 6 до 12 % пациентов с миастенией могут иметь отрицательный результат как на антитела к AchR, так и на антитела к MuSK. Эти пациенты имеют серонегативную миастению и чаще имеют глазную миастению, чем серопозитивные. 3 Антитела к белкам организма, отличным от AChR и MuSK антител, были обнаружены в некоторых случаях серонегативного МГ, однако четкая причинно-следственная связь пока не установлена. 4, 5, 6

    Электродиагностическое тестирование

    Следующим этапом обычно  является электродиагностическое тестирование , при котором электроды используются для измерения электрических сигналов в мышцах. Поверхностные электроды (аналогичные тем, которые используются в электрокардиограммах) производят небольшие импульсы к нерву в руке, ноге или лице, в то время как другие поверхностные электроды регистрируют реакции в мышцах. При миастении реакция мышцы на повторную стимуляцию нерва быстро снижается. Для подтверждения диагноза миастении можно провести два типа тестов:

    .
    • Повторяющаяся стимуляция нервов (RNS) обычно используется с точностью от 75% до 80% и описана выше. 7
    • Одноволоконная электромиография (SFEMG) является более чувствительным тестом (с точностью 95%), но он менее широко доступен и технически сложен. 4, 7

    Если диагноз миастении подтвердится, для исследования вилочковой железы и поиска признаков опухоли вилочковой железы, которая встречается примерно у 15% людей, будет использоваться компьютерная томография, рентген грудной клетки или магнитно-резонансная томография (МРТ). с МГ.

    Каталожные номера
    1. Benatar, M. Систематический обзор диагностических исследований миастении. Нервно-мышечная. Беспорядок. (2006 г.). doi:10.1016/j.nmd.2006.05.006
    2. Гольник К.С., Пена Р., Ли А.Г. и Эггенбергер Э.Р. Тест на льду для диагностики миастении. Офтальмология (1999). дои: 10.1016/S0161-6420(99)00709-5
    3. Deymeer, F. и др. Клиническое сравнение анти-MuSK- и анти-AChR-положительной и серонегативной миастении гравис. Неврология (2007). doi:10.1212/01.wnl.0000254620.45529.97
    4. Николь, М.W. Миастения Гравис и миастенический синдром Ламберта-Итона. НЕПРЕРЫВНОЕ обучение неврологии на протяжении всей жизни (2016). doi:10.1212/CON.0000000000000415
    5. Винсент, А. и др. Антитела при миастении и родственных расстройствах. в Анналах Нью-Йоркской академии наук (2003). doi: 10.1196 / анналы.1254.036
    6. Decroos, E.C., Hobson-Webb, L.D., Juel, VC, Massey, JM & Sanders, D.B. Предсказывают ли ацетилхолиновый рецептор и антитела к поперечно-полосатым мышцам наличие тимомы у пациентов с миастенией? Мышцы и нервы (2014).doi: 10.1002/mus.23882
    7. О, С.Дж., Ким, Д.Е., Куруоглу, Р., Брэдли, Р.Дж. и Дуайер, Д. Диагностическая чувствительность лабораторных тестов при миастении. Мышечный нерв (1992). doi: 10.1002 / mus.880150616

    (PDF) Период серонегативного окна ВИЧ: диагностические проблемы и решения

    Последние трансляционные исследования в области ВИЧ/СПИДа

    200

    NACA (2007). Национальное координационное агентство по СПИДу (2007 г.) 2008 г. Отчет о ходе реализации

    Национального ответа на Декларацию о приверженности делу борьбы с ВИЧ/СПИДом ССГАООН,

    Государственное министерство Президент, Национальное координационное агентство по СПИДу,

    , декабрь 2007 г.

    НАКА (2008 г.). «Национальное координационное агентство по СПИДу с октября по декабрь 2007 г. Национальный отчет Совета по СПИДу

    , BHRIMS, февраль 2008 г.».

    Наджиулла Ф., В. Барлет и др. (2004). «Отказ и успех тестов на ВИЧ для предотвращения передачи

    ВИЧ-1 при донорстве крови и тканей». J Med Virol 73(3): 347-9.

    Новиков, И. и Т. Джехуда-Коэн (2009). «ВИЧ-инфекция типа 1 среди эфиопских иммигрантов

    в Израиль: усиленная стимуляция антителами in vitro для оценки продолжительности периода окна

    .AIDS Res Hum Retroviruses 25(2): 165-74.

    Ольшанский А. (2008). «Возможности применения SMARTube для оптимизации диагностики гепатита С

    и ВИЧ-инфекции». VIII Международная конференция «Вирусные гепатиты:

    Проблемы эпидемиологии, диагностики, лечения и профилактики, Москва,

    Россия

    Оренштейн Дж. М. (2001) «Макрофаги при ВИЧ-инфекции» Иммунобиология 204(5):

    598-602.

    Оуэн , S.M., C. Yang, et al.(2008). «Альтернативные алгоритмы диагностики вирусной инфекции иммунодефицита человека

    с использованием тестов, лицензированных в США». J Clin

    Microbiol 46(5): 1588-95.

    Панталео Г., К. Грациози и др. (1994). «Роль лимфоидных органов в патогенезе инфекции

    вируса иммунодефицита человека (ВИЧ)». Иммунол Rev 140: 105-30.

    Patterson, K.B., P.A. Leone, et al. (2007). «Частое выявление острой ВИЧ-инфекции у

    беременных.Aids 21(17): 2303-8.

    Phelps, R., K. Robbins, et al. (2004). «Передача вируса иммунодефицита человека оконного периода

    двум реципиентам от подростка-донора крови». 44(6):

    929-33

    Pilcher, C.D., J.J.Eron, Jr., et al. (2001) «Передача половым путем во время инкубационного периода

    первичной ВИЧ-инфекции». Jama 286(14) : 1713-4.

    Pilcher, C.D., HC Tien, et al. (2004) «Кратко, но эффективно: острая ВИЧ-инфекция и половая

    передача ВИЧ.J Infect Dis 189(10): 1785-92.

    Пинкертон, С. Д. (2008). «Вероятность передачи ВИЧ во время острой инфекции в Ракаи,

    , Уганда». AIDS Behav 12(5): 677-84.

    Пауэлл, Дж. Д., Д. П. Беднарик и др. (1991). «Регулирование иммунной активации/ретровирусной репликации

    с помощью CD8+ Т-клеток». Ann NY Acad Sci 636: 360-2. Ву и др. (2011 г.) «Поражение головного мозга проявляется на ранних стадиях ВИЧ-инфекции», 8-я конференция

    по ретровирусам и оппортунистическим инфекциям (CROI 2011), Бостон.

    Richman, D.D., T. Wrin, et al. (2003). «Быстрая эволюция реакции нейтрализующих антител

    на инфекцию ВИЧ 1 типа». Proc Natl Acad Sci U S A 100(7): 4144-9.

    Розенберг Э. С., М. Альтфельд и др. (2000). «Иммунный контроль ВИЧ-1 после раннего лечения острой инфекции

    ». Природа 407 (6803): 523-6.

    Шакер, Т. (2008). «Роль вторичной лимфатической ткани в иммунодефиците инфекции ВИЧ

    ». СПИД 22 Приложение 3: S13-8.

    Шмидт М., К. Корн и др. (2009). «Первая передача вируса иммунодефицита человека

    типа 1 клеточным продуктом крови после обязательного скрининга нуклеиновых кислот в

    Германии». Переливание 49 (9): 1836-44.

    Что такое серонегативный артрит? Почему это называется фатальным состоянием?

    История жалобы, анализы крови и визуализация (рентген/сканирование) являются основным диагнозом любого заболевания.Термин «сероположительный/серонегативный» относится к результатам анализа крови.

    Вопрос в том, существует ли серонегативный ревматоидный артрит?

    Быстрый ответ на этот вопрос — ДА. Когда у человека отрицательный результат теста на ревматоидный фактор, также известный как РФ, и циклические цитруллинированные пептиды (ЦЦП), это состояние определяется болезненными и опухшими суставами, возникающими с возрастом.

    Будучи серонегативным, вы не имеете анти-ЦЦП в крови вообще или их очень мало.Однако, если вы получили отрицательный результат теста на анти-КЦП и у вас есть симптомы РА, то шансы быть серонегативным РА выше.

    Основное различие между людьми с серопозитивным ревматоидным артритом и серонегативным типом РА обычно заключается в том, что у серопозитивных людей обычно больше боли, и они также чаще:

    • Наличие узелков (припухлости под кожей)
    • Васкулит (воспаление кровеносных сосудов)
    • Имеют ревматоидные заболевания легких
    • Имеют другие заболевания наряду с ревматоидным артритом, например сердечно-сосудистые заболевания.
    • Курильщики подвержены высокому риску заражения серопозитивным РА

    Вот блок-схема, показывающая классификацию артрита-

    Источник- Доктора Гейтс

    Обычно это происходит, когда слизистая оболочка ваших суставов атакует иммунную систему организма, это чаще всего встречается у женщин среднего возраста.

    Термин «серонегативный» происходит от того факта, что анализ крови, который не обнаруживает индикатора для обнаружения, приводит к неудовлетворительному анализу крови, когда в крови человека не обнаруживается РФ и анти-ЦЦП, это антитела, которые образуются иммунная система человека, которая помогает атаковать здоровые ткани в нашем организме

    Однако, в отличие от других отрицательных результатов, серонегативный результат артрита может означать положительный диагноз чего-то еще опасного.

    Если мы посмотрим на группу людей, страдающих артритом, то увидим, что почти 71-80% пациентов с симптомами РС являются серопозитивными ревматоидными артритами.

    В случае РА очень важна ранняя диагностика, среднее время между появлением симптомов и постановкой диагноза составляет 6-9 месяцев, однако, если РА не лечить в течение 2 лет, существует высокая вероятность развития у людей эрозии суставов, свидетельствующие о прогрессировании заболевания.

    Симптомы и течение РА могут варьироваться от человека к человеку, а также могут меняться ежедневно, но могут включать:

    Источник- Genentech, 2016

    Пациенты, которые, в свою очередь, показывают серонегативные результаты, не имеют ясных симптомов.

    Основные различия между серопозитивными и серонегативными людьми?

    Существует более высокая вероятность развития более серьезного заболевания у серопозитивных пациентов, поскольку они также более склонны к внесуставным осложнениям (таким как узелки и пустоты, отеки), чем у серонегативных пациентов.

    Источник- Медицинская сеть, 2010

    Однако наличие серопозитивных или серонегативных возбудителей не влияет на эффективность большинства препаратов .

    В течение первых шести месяцев болезни примерно половина больных РА являются серонегативными

    Однако исследование показывает, что после 2 лет болезни только 15-20% пациентов с РА остаются серонегативными в отношении RF-фактора.

    Что такое лечение?

    Независимо от типа РА лечение, вероятно, будет одинаковым

    Цитирую несколько ниже-

    • Противовоспалительное лекарственное средство
    • Кортикостероидный препарат,
    • Болезнь-модифицирующий противоревматический препарат
    • Физиотерапия
    • Терапия горячей водой
    • Трудотерапия
    • Упражнения стоя
    • Хирургия — крайняя мера

    Однако важно отметить, что эти лекарства не вылечат ваш ревматоидный артрит.Они просто облегчают симптомы и замедляют рост и боль

    .

    Лучшая новость о серонегативном ревматоидном артрите или серонегативной спондилоартропатии, серонегативном артрите заключается в том, что у пациентов с серонегативными результатами тестов на РФ и анти-ЦЦП, как правило, развивается менее серьезное заболевание суставов и меньше осложнений, чем у пациентов с серопозитивными результатами.

    Типы серонегативного артрита –
    • Анкилозирующий спондилит – Основными причинами являются боль в пояснице и скованность.В тяжелых случаях пораженные суставы вызывают сильную скованность в спине. Другие части тела, такие как грудная клетка, пятки и бедра, также могут болеть. Однако симптомы у детей начинаются от бедер до колен, а затем достигают позвоночника.
    • Реактивный артрит  – Острая боль в крестцово-подвздошном суставе, вызывающая боль, отек и воспаление сустава. Также может быть небольшой отек пальцев; однако реактивный артрит вызывает потерю веса, раздражение кожи и лихорадку.
    • Псориатический артрит-   Это форма артрита, связанная с кожными заболеваниями, известными как псориаз. Однако важно отметить, что тяжесть сыпи не отражает тяжести артрита. Также наблюдается утолщение и желтый оттенок вокруг ногтей рук и ног, а проблемы с суставами возникают из-за крупных суставов, таких как тазобедренные и крестцово-подвздошные суставы.
    • Энтеропатический артрит — Это тип артрита, который возникает в спинном мозге и также включает воспаление кишечной стенки.Этот тип артрита обычно поражает крупные суставы, такие как колени, бедра, лодыжки и локти. У детей артрит может начаться до воспаления кишечника.

    Лечение с годами менялось, так же как и отношение к ревматоидному артриту в некоторых случаях. Есть надежда, что лучшее понимание различий между заболеваниями, которые мы называем ревматоидным артритом, может дать понимание, которое в конечном итоге может привести к новым способам лечения и, возможно, в некоторых случаях даже предотвратить его.

    .

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.