Прием желатина внутрь отзывы: Желатин во внутрь для роста волос и ногтей

9.2. Применение желатина на рынке

9.2.1. Пищевые продукты

Производство пищевых продуктов включает добавление множества добавок и ингредиентов для улучшения качества, вкуса, текстуры и цвета пищевых продуктов.Некоторые из дополнительных ингредиентов включают глутамат натрия (MSG), красители, желатин, например [58]. Многие лепешки, вафли и леденцы содержат до 1% желатина. В этих случаях желатин снижает скорость растворения. В мясных продуктах, таких как консервированные ветчины, различные мясные закуски, солонина, куриные рулеты, холодец из говядины и другие аналогичные продукты; желатин можно использовать в качестве осветлителя в соке гуавы для получения прозрачного сока путем удаления взвешенных частиц [55, 59].

9.2.2. Применение в фармацевтике

В фармацевтике желатин находит широкое применение, например, для покрытия капсул, связывающих таблеток и губок для лечения ран, а также в качестве компонента витаминных составов и косметических средств [8]. Производство капсул с использованием желатина включает комбинацию желатина с водой или водными многоатомными спиртами. При приеме лекарств капсулы обычно предпочтительнее таблеток. Другой тип эластичных или мягких капсул изготавливается с помощью вращающейся головки из двух пластифицированных желатиновых листов, которые образуют герметичную капсулу вокруг инкапсулируемого материала [59].

10. Гидрогели на основе желатина

Гидрогели на основе желатина — это гидрогели, в основе которых лежит желатин в качестве основных полимерных цепей. Гидрогели из ресурсов на основе белков особенно полезны из-за своих функциональных групп. Гидрогели на основе желатина, такие как желатин сам по себе, в сочетании с другими природными и синтетическими полимерами, такими как желатин с альгинатом, желатин с хитозаном, желатин с гиалуронаном, желатин с фибриногеном, желатин с серицином, желатин с альгинатом и фибриногеном и желатин с альгинатом , фибриноген и гиалуронан обладают уникальными свойствами, такими как превосходная биосовместимость, быстрая биоразлагаемость и неиммуногенность, в медицинских приложениях [60].

Эти гидрогели на основе желатина используются в производстве контактных линз, матриц для тканевой инженерии и систем доставки лекарств. Разработка новых применений гидрогелей на основе желатина — еще одна важная область академических исследований. Гидрогели на основе желатина можно изготавливать химически модифицируя желатин, или можно просто использовать желатин со сшивающими агентами и так далее [53].

10.1. Применение гидрогелей на основе желатина для медицинского текстиля

Гидрогели, образованные из гидрофильных компонентов, являются трехмерными, пористыми и взаимопроникающими полимерными сетками, содержащими большие количества биологических жидкостей, сохраняющих свою структуру стабильной при физиологическом pH и температуре.Высокое сродство гидрогеля к воде придает гидрогелям сходные физические свойства с живыми тканями, такие как низкое межфазное натяжение и компактность с водной средой [61]. Благодаря эффективному контролю кинетики набухания и высокой водоудерживающей способности гидрогели широко используются в биомедицинских приложениях. «Самовосстанавливающиеся и формирующиеся in situ гидрогели очень важны с биомедицинской точки зрения, поскольку они могут предоставить средства для простой индивидуальной диагностики» [62, 63]. В качестве сырья для получения гидрогеля могут быть использованы различные типы биополимеров [64–66].

Гидрогели на основе желатина обладают свойствами реагирования на раздражители, такими как термореактивность и реакция на раздражители, демонстрируя переход золь-гель к температуре тела человека, совместимой с тканями человека. Благодаря этим свойствам гидрогели на основе желатина находят различное применение в доставке лекарств, тканевой инженерии и медицинском текстиле [67]. Термически сшитые гидрогели на основе желатина также могут быть использованы в производстве композитного живого волокна, которое состоит из синтетического полимера в качестве материала сердцевины и слоев гидрогеля, содержащих живую клетку в качестве материала покрытия.Этот новый и усовершенствованный текстильный материал может быть использован для биопроизводства волокнистых каркасов, применяемых в тканевой инженерии [64, 68].

В настоящее время применение гидрогелей на основе желатина в текстиле началось в системах доставки лекарств, где был успешно достигнут трансдермальный транспорт лекарств, а термореактивные гидрогели на основе желатина эффективно формируют системы транспортировки лекарств для текстильных приложений [69, 70]. Трансдермальная терапия на текстильной основе с использованием гидрогеля на основе желатина, содержащего лекарственные препараты, становится эффективной в уходе за кожей человека [64].Функционализированный текстиль, покрытый гидрогелем на основе желатина (реагирующий на раздражители), может уравновешивать температуру тела, контролируя влажность кожи, и обеспечивает комфорт для пользователей умного текстиля [67, 70].

Bioink является основой трехмерной биопечати и состоит из смеси клеток, биоматериалов и биоактивных молекул в жидком растворе прегеля, который превращает отпечатанное изделие в трехмерный каркас или на поверхность. Гидрогели на основе желатина широко используются в качестве биочернил.Желатин, модифицированный метакриламидом (GelMA), в последнее время привлекает все большее внимание, в основном в области биомедицинских приложений [32]. Кроме того, гидрогель на основе желатина используется для функции заживления ран в различных формах, таких как пластырь, гель, мазь и т. Д. Он поддерживает влажность раненой области и ускоряет процесс заживления, поглощая экссудаты, сохраняя при этом продукты восстановления тканей, включая лизосомы. и факторы роста при контакте с областью ранения [10].

11. Заключение

Медицинские текстильные изделия — это текстильные материалы, используемые в медицине и здравоохранении.Гидрогели — это полимеры, которые представляют собой нерастворимые, сшитые, гидрофильные и трехмерные сетки, и они обладают способностью поглощать большое количество жидкостей. Классификация гидрогелей может быть основана на их источнике, сшивании, количестве полимеров, чувствительности к окружающей среде и других факторах, большинство из которых было рассмотрено в этой статье. Гидрогели на основе природных полимеров обладают большим преимуществом в отношении биосовместимости, разлагаемости и нетоксичности. Желатин — это природный полимер, который является производным коллагена и может быть получен из белковой части тела животного, включая кожу, кости, соединительные ткани, куриные лапки, чешую рыбы и насекомых.Гидрогели на основе желатина используются в биомедицинском и медицинском текстиле, поскольку желатин обладает свойством неиммуногенности, нетоксичности, низкой стоимости и высокой доступности. В общем, гидрогель на основе желатина может найти применение в носителях для доставки лекарств, биочернилах, трансдермальной терапии, заживлении ран и восстановлении тканей.

Доступность данных

Данные будут доступны по запросу.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Авторы очень благодарны за финансовую поддержку, полученную от Эфиопского института текстильных и модных технологий при университете Бахир Дар, Бахир Дар, Эфиопия.

Разрушителей мифов: полезен ли желатин для волос?

Мягкий, нежный и довольно вкусный в приготовлении. Вот некоторые из слов, которыми можно описать желатин. Вы знаете, тот же ингредиент, из которого сделаны ваши мармеладные мишки. но вы не знаете, что некоторые люди на самом деле используют желатин для волос.Да, желатин.

Это может показаться странным выбором для натурального ухода за волосами, но мы не из тех, кто сразу бросает вызов, не так ли? Итак, в сегодняшнем выпуске ZALA Mythbusters мы увидим, верны ли слухи: полезен ли желатин для волос?

Что такое желатин?

Желатин — это продукт, получаемый при варке коллагена, разновидности природного белка.

Возможно, вы слышали об этом раньше, и, честно говоря, это неудивительно. В наши дни индустрия красоты подталкивает коллаген к антивозрастным и другим косметическим свойствам.На самом деле, коллаген может быть естественным образом обнаружен как у людей, так и у животных. Различные части тела, такие как кости, связки и кожа, содержат коллаген.

Когда этот коллаген варится в кипящей воде, он превращается в желатин. В таком виде желатин не имеет цвета и аромата. Вы можете растворить его в теплой воде, чтобы добавить ингредиенты, необходимые для вашего рецепта, а затем охладить в холодильнике, чтобы он принял обычную желеобразную форму.

Влияние желатина на волосы

Желатин почти полностью состоит из белка, того же самого, из которого состоят ваши волосы.Он также содержит множество уникальных аминокислот, которые, как доказано, помогают восстанавливать и восстанавливать волосы, кожу и ногти. Вот почему существует множество научных исследований, направленных на изучение положительных эффектов желатина.

В одном исследовании 106 женщин съели либо плацебо, либо 10 граммов рыбного и свинины коллагена, из которых получают желатин до того, как его приготовят. Те, кто действительно принимал коллаген, показали увеличение влажности кожи на 28% и волос на 12% всего после восьми недель добавления его в свой рацион.Между тем в группе плацебо таких эффектов не наблюдалось.

В другом исследовании исследователи дали желатиновую добавку одной группе и плацебо другой группе, которые нужно было принимать в течение 50 недель. Все участники страдали алопецией, заболеванием, вызывающим частичное или полное выпадение волос. Результаты были невероятными. Рост волос в группе желатина составил 29% за 50 недель по сравнению с 10% в группе плацебо. Масса волос в группе желатина также увеличилась на 40%, а в группе плацебо — на 10%.Нельзя сказать, что желатин может бороться с алопецией, но, похоже, он действительно помогает при выпадении волос.

Наконец, в одном исследовании исследователи давали участникам 14 граммов желатина каждый день. По окончании исследования у участников, которые ежедневно ели желатин, толщина волос увеличилась в среднем на 11%.

Использование желатина для ухода за волосами

Есть два способа использовать желатин для ухода за волосами.

Очевидно, первый состоит в том, чтобы на самом деле съесть желатин.Второй — использовать его в средствах для ухода за волосами своими руками, что довольно просто, поскольку желатин растворяется в теплой воде. Кроме того, в наши дни вы можете получить даже порошкообразный желатин, что делает процесс еще проще.

Все, что вам нужно, — это пачка сухого желатина, молоко и кондиционер. Сначала подогрейте молоко, затем добавьте желатин. Оставьте на 15 минут, затем добавьте кондиционер. Полученная смесь должна выглядеть как гель, который вы затем нанесете на волосы.Вы можете накинуть на волосы шапочку для душа, чтобы запечатать смесь и позволить волосам все впитать. Оставьте на 30-40 минут. После этого тщательно вымойте волосы шампунем и высушите. Повторяйте это хотя бы раз в неделю, и если вам повезет, вы увидите результаты всего через несколько недель!

Полезен ли желатин для волос?

Удивительно, но это не просто миф. Желатин действительно может быть полезен для волос, особенно если его съесть. Трудно представить, что такой безвкусный и бесцветный ингредиент можно использовать так разными способами, да?
Чтобы узнать больше о ZALA Mythbusters, не забудьте заглянуть в наш блог !

История желатина и желе, Whats Cooking America

«Смотрите, как он покачивается, смотрите, как он покачивается, марка JELL-O, желатин…» и «Всегда есть место для JELL-O.
Эти рекламные лозунги запомнились многим американцам.

Jell-O — самый продаваемый готовый десерт, известный во всем мире. Торговая марка Jell-O обычно используется в Соединенных Штатах как общее и нарицательное название любого желатинового продукта. Я был на многих обедах, пикниках, барбекю и семейных сборах, где всегда предлагали вкусную плесень для желе или салат. В этом сладком, прохладном, трясущемся десерте с плавающими фруктами и взбитыми сливками есть что-то такое освежающее.

Многие могут быть удивлены, узнав, что происхождение JELLO-O — это белок, производимый из коллагена (гелеобразного вещества), который извлекается из кипящих костей животных. Французы первыми использовали желатин в кулинарии. Французы, склонные к гурманам, любят свою еду en gelee-aontnd , которую они называют желатином. Предпочтительное написание — без последнего e , независимо от того, имеете ли вы в виду ароматизированный или неароматизированный желатин.

Jell-O продается готовым к употреблению или в виде порошка, он доступен во многих различных цветах и ​​фруктовых вкусах.Порошок содержит порошкообразный желатин и ароматизаторы, в том числе сахар или искусственные подсластители. растворяют в очень горячей воде, затем охлаждают и дают застыть. Можно добавить фрукты, овощи, взбитые сливки или другие ингредиенты, чтобы приготовить сложные закуски, которым можно придать различные формы. Jell-O необходимо положить в холодильник до тех пор, пока он не будет подан, а после того, как он застынет должным образом, его обычно едят ложкой. — из Википедии.

Слово «желатин» происходит от латинского «gelatus» и означает «заливной, замороженный».«Желатин впервые использовали в египетские времена. Следы желатина были найдены в могиле фараона в виде клея.

Желатин когда-то считался признаком богатства, до появления готового желатина его могли себе позволить только представители элитного класса. Потребовались часы, чтобы сделать желатин, осветлить и превратить его в причудливые смеси, салаты и десерты. Использование желатина было знаком того, что у хозяина или хозяйки были средства, чтобы поддержать кухонный персонал умением и временем для создания такого блюда.Когда желатин стал коммерчески доступным, он все еще был символом кулинарной изысканности.

1682 — Первые упоминания желатина в истории:

Француз по имени Дени Папен (1647-1712) записал свои исследовательские эксперименты на эту тему. Его эксперименты привели к способу удаления клейкого материала с костей животных путем кипячения. Он не имеет вкуса, запаха и в сочетании с жидкостью не имеет цвета, но это чистый белок.

«Желе из говяжьих костей» было упомянуто в дневнике англичанина Джона Эвелина (1620–1706) в 1682 году при описании результатов демонстрации первой скороварки.

1754 — Получен первый в Англии патент на производство желатина. Я не могу найти этому доказательств.

1800 — 1815 — Пищевая ценность желатина была признана еще во время наполеоновских войн, когда французы использовали его в качестве источника белка во время английской блокады.

1845 — Сухой желатин без запаха стал доступен в 1842 году от компании J and G из Эдинбурга, Шотландия. В том же году компания J and G начала экспортировать желатин Cox’s Gelatin в США.

1845 — Питер Купер (1791-1883), промышленник, изобретатель и филантроп, получил патент (патент США 4084) на желатиновый десертный порошок под названием Portable Gelatin , требующий только добавления горячей воды. Еще пятьдесят лет с этим патентом ничего не делалось. Мистер Купер не собирался специально открывать для себя десертный желатин. Его больше интересовал клей. В течение многих лет производители продуктов питания экспериментировали с желатином, но никому не удавалось создать привлекательный продукт.Это выглядело плохо и не было очень вкусным. Хотя Купер запатентовал его производство, он мало что сделал для его коммерциализации. Он упаковал его для продажи поварам, но это не вызвало особого интереса. Он продал патент Перл Уэйт, производителю сиропа от кашля, в 1895 году. Изобретатель паровоза получил патент на желатиновый десертный порошок под названием Portable Gelatin, требующий только добавления горячей воды.

1874 — Hartley’s — британский бренд, производящий и продающий мармелад, джемы и желе.Этот бренд был создан сэром Уильямом Пиклзом Хартли, а в 1874 году началось производство желе.

1889 — Plymouth Rock Gelatin Company из Бостона запатентовала свой фосфатированный желатин в 1889 году.

1894 — Чарльз Нокс разработал первый в мире предварительно гранулированный желатин. Он наблюдал, как его жена проходит долгий и трудный процесс изготовления желатина, и решил найти более простой метод. Он экспериментировал, пока не нашел процесс, в результате которого был получен продукт, превосходящий все имеющиеся на рынке.Нокс упаковал высушенные листы желатина, а затем нанял продавцов, которые ходили от двери к двери, чтобы показать женщинам, как добавлять жидкость в листы и использовать ее для приготовления леденцов, форм и десертов. В 1896 году Роуз Нокс опубликовала книгу рецептов Dainty Desserts с использованием желатина Нокса.

1895 — У Перл Б. Уэйт, производителя сиропа от кашля в Ле-Руа, Нью-Йорк, были проблемы с бизнесом. Он решил отказаться от производства сиропа от кашля и заняться пищевой промышленностью. Он и его жена Мэй экспериментировали с добавлением фруктовых сиропов (клубники, малины, апельсина и лимона) в желатин.Пудра состояла из 88% сахара. Мэй переименовал десерт в «Jell-O». Однако им также не удалось продать продукт. К несчастью для мистера Уэйта, ему не хватало средств и знаний, чтобы правильно продавать свой продукт, поэтому он в конечном итоге продал формулу Jello-O своему соседу, Оратору Фрэнсису Вудворду.

1899 — Оратор Фрэнсис Вудворд приобрел название Jello-O и бизнес за 450 долларов. В первые годы Оратору Фрэнсису Вудворду также не удавалось добиться взлета популярности Jell-O, и, как сообщается, он пытался продать бизнес Jell-O всего за 35 долларов своему руководителю завода Эндрю Сэмюэлю Нико! Рекламные усилия Вудворда начали приносить плоды, когда ухоженных продавцов в красивых конных экипажах отправляли в общины, на ярмарки, сельские собрания и церковные собрания, чтобы проповедовать и предлагать образцы желе.Эти усилия, наряду с новыми технологиями, такими как охлаждение и упаковка в порошкообразной форме, помогли Jell-O стать популярным и вошедшим в моду для сервировки банкетов и изысканных ужинов.


1902 — Woodward запустил рекламную кампанию «Самый любимый десерт Америки». Рисунки, плакаты, рекламные щиты и реклама в журналах с рецептами желе были распространены по всему американскому ландшафту. Было напечатано и распространено среди американских семей более 15 миллионов буклетов с рецептами желе.Известные художники, такие как Норман Роквелл, даже предоставили цветные иллюстрации в этих буклетах, чтобы сделать Jell-O нарицательным. В 1904 году была представлена ​​девушка JELL-O, а в 1934 году Джека Бенни можно было услышать по радио, рекламируя «J-E-L-L-O».

1904 — Jell-O представляет девушку Jell-O, четырехлетнюю Элизабет Кинг, отец которой Франклин Кинг был художником, связанным с Dauchy Company — рекламным агентством Jell-O. В правой руке девочка держала чайник, а в левой — пакет Jell-O.Там был девиз: «Без этого нельзя быть ребенком».

1923 — Компания Woodward’s Genesee Pure Food была переименована в JELL-O Company в 1923 году, а в 1925 году слилась с Postum Cereal, Inc., которая впоследствии стала General Foods Corporation. Сегодня Jell-O принадлежит и производится компанией Kraft / General Foods. Фото любезно предоставлено Kraft / General Foods.

1927 — Шоколадное желе было выпущено и снято с производства в 1927 году

1930 — Jell-o вышел вместе с очень популярным сейчас лаймовым желе-0.

1934 — Реклама идет в ногу со временем, и поэтому в 1934 году компания General Foods, пионер продаж по радио, подписала контракт с Джеком Бенни, и весь мир узнал «J-E-L-L-O».

1936 — Шоколад вернулся в линейку Jell-O как пудинг быстрого приготовления с молоком. Пудинг стал настолько популярным, что в него были добавлены другие ароматы пудинга, такие как ваниль, тапиока, кокос, фисташки, ириски, яичный заварной крем, флан и рисовый пудинг.

1942 — Южный салат с кока-колой был представлен в какой-то момент путем замены части жидкости в застывшем салате небольшими бутылками кока-колы.Он стал настолько популярным, что Jello-O очень кратко представил желатин со вкусом колы. Однако все прошло не очень хорошо.

1950-е годы — Шот Jell-O, который смешивается со спиртом (водкой или ромом) до половины жидкой части рецепта желе, как утверждается, был изобретен Томом Лерером, американским певцом и композитором, как способ получить вокруг ограничений на употребление алкоголя в армии, где он находился.

1960-е годы — Jell-O выпускает острые и овощные вкусы, такие как сельдерей, итальянский (овощной и приправленный помидор).Популярные рецепты желе дня включали такие ингредиенты, как капуста, сельдерей, зеленый перец и даже приготовленные макароны. С тех пор производство пикантных вкусов прекращено.

1964 — Рекламный слоган «Желе-О есть место всегда», чтобы продвигать продукт как «легкий десерт» после тяжелой еды.

1974 — Продажи желе снижались, так как работающие мамы с маленькими детьми больше не покупали желе. Рекламная кампания была запущена, чтобы повторно представить Jigglers, закуски Jell-O, отформованные в забавные формы, которые можно было есть руками.Эта кампания помогла продажам Jell-O снова подняться.

2001 — Представитель штата Юта Леонард М. Блэкхэм представил Постановление штата 5 «Резолюция, призывающая к признанию Jell-O». Закон был принят только двумя голосами против, и Jell-O стал официальной закуской в ​​штате Юта.

JELL-O особенно популярен среди членов Церкви Иисуса Христа Святых последних дней, также называемых мормонами. Данные о продажах, опубликованные Kraft Foods, показали, что в Солт-Лейк-Сити, штат Юта, самое высокое потребление JELL-O на душу населения.Регион Мормонского коридора в штате Юта прозвали «поясом желе». Считается, что JELL-O пользуется популярностью среди мормонов, поскольку его члены имеют сильные семейные ценности.


2002 — Зеленая олимпийская булавка Jell-O к Зимним Олимпийским играм 2002 года. На булавке была большая миска с зеленым желе. Значок быстро разошелся, и его стало трудно найти коллекционером. Коллекционирование булавок — это олимпийский вид спорта, о котором мало кто может знать, это коллекционирование и торговля булавками. По мнению некоторых поклонников пинов, собирать кегли так же увлекательно, как и сами игры.

Рецепт салата с клубничным кренделем Judy’s

Это всегда хит! Советы, которыми я живу, чтобы это получалось каждый раз. 1) НЕ выпекайте слой кренделя дольше 10 минут. 2) Удвойте количество желе, чтобы оно было пропорционально количеству сливочного сыра. 3) Дайте желе немного остыть перед тем, как намазывать его на слой сливочного сыра.

Я делал это несколько раз и давал прекрасные результаты. Я прочитал обзоры перед его приготовлением и нашел чрезвычайно полезным сделать следующее: 1) вместо 2 стаканов воды используйте 1 стакан кипятка, чтобы растворить пакет желатина, затем добавьте 3/4 стакана клубничного сока / сироп, а затем добавить клубнику; и 2) поставьте смесь желатина и клубники в холодильник примерно на час, чтобы она немного загустела, прежде чем вылить ее поверх смеси сливочного сыра (это очень важно для успеха десерта).Я действительно думаю, что эти изменения помогли улучшить текстуру и вкус желатинового слоя. Я очень рекомендую попробовать это. Я взял его с собой на два ужина и не могу сказать, сколько комплиментов я получил, мои друзья были полностью впечатлены. Спасибо за фантастический рецепт !!!

Это было действительно хорошо! Я добавила немного ванили (1/2 чайной ложки) в слой сливочного сыра. Я также думаю, что корочка должна быть немного слаще — в следующий раз попробую с белым и коричневым сахаром. Как предупреждали другие читатели, эта корочка превратится в ЦЕМЕНТ, если вы будете готовить ее слишком долго.Выньте его через 10 минут, даже если думаете, что он не готов. Будет тяжело, так как он сидит! Переверните бокал по корке на сковороде — это позволяет легко его вдавить.

Это определенно пятизвездочный рецепт, который существует уже много лет. Если бы это не было предложено во время Дня Благодарения и Рождества моей семьи, они бы взбунтовались! Единственная рекомендация, которую я бы сделал, — использовать крендели с золотым маслом, так как это усиливает вкус. ПОЖАЛУЙСТА, ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ: это НЕ рецепт, который можно хранить в течение нескольких дней… его нужно съесть в течение первых 48 часов, так как корочка кренделя ломается и становится мягче, и это не делает этого должным — Поднимите руки к хрусту в этом салате, он победитель.

Я занимаюсь этим как минимум 15 лет, и все борются за это. Они хотят получить свою долю. Мой рецепт немного отличается. Требуется 2 чашки кренделя, маржа. вместо сливочного масла и 3 ч. л. (я использую с горкой ч. л.) сахара. для корочки. Для сырной середины то же самое, только для сливочного сыра требуется 1-8 унций вместо 2.Верхний слой — 2 маленьких упаковки. желе, полить так же, но использовать 2-10 унций. картонные коробки замороженной клубники. Мне нравится марка Birdseye в сиропе. Если ягоды целые, я их измельчаю. Ему действительно нужно несколько часов остыть. Это мой самый востребованный рецепт желе! Это действительно похоже на десерт! Когда я впервые сделал это, никто не мог понять, из чего сделано дно! Вы действительно должны попробовать. Спасибо, Том!

Вкусно! Это отличный десерт! Два предложения: 1) не выпекайте корочку дольше, чем отведенные 10 минут, даже если вы добавляете в нее дополнительные крендели, масло и сахар.Если смесь масла и сахара станет слишком горячей, она превратится в цемент, и потребуется долото, чтобы вынуть ее из посуды — я выяснил на собственном горьком опыте и 2) при выборе клубники обратите внимание на количество сока, которое они сидят. и уменьшите два стакана воды на это количество. Наслаждаться!

Я делал это несколько раз для работы на обедах. Я делал это накануне вечером, и всегда получалось красиво (это большой успех!). Однажды я приготовил его днем ​​на ужин тем вечером, и корочка кренделя оказалась слишком твердой.Я думаю, что уловка состоит в том, чтобы оставить на ночь достаточно, чтобы корочка стала мягкой. Это определенно мой фаворит!

Это действительно было неплохо. Я сделал это точно, как сказано в инструкции, включая всю замороженную клубнику, сок и полные 2 стакана воды, и желе было идеальным. Я выпекал ТОЛЬКО 10 минут, как все предлагали, и сначала оставил желе / ​​клубнику на час в холодильнике. Даже тогда казалось, что они все еще наливаются на слой сливочного сыра довольно жидкими, поэтому я беспокоился, что он не загустеет, но затвердеет идеально.Желе не просочилось в сливочный сыр. Корочка кренделя, безусловно, становится более мягкой, чем дольше она находится в вашем холодильнике после приготовления, поэтому, если вы можете съесть все это за 1-3 дня, это предпочтительнее.

Я приготовил это на День благодарения, и это было одно из первых блюд, которые нужно было съесть. Единственное изменение, которое я сделал, это то, что я использовал замороженную нарезанную клубнику (2 кадки), поэтому кусочки клубники были не такими большими.

Я дал эти 3 звезды только на случай, если я сделал что-то не так. Мы думали, что это ужасно.Корка презеля была влажной, смесь желе просачивалась через смесь сливочного сыра, а замороженные клубники были большой ошибкой. Я просто не понимаю, что могло пойти не так. Я последовал рецепту на «Т». Я не буду делать это снова. (Пожалуйста, посмотрите мои другие обзоры, я дал только один отрицательный отзыв)

Natrol® Melatonin Gummies, Sleep Support, Strawberry

В: Что такое мелатонин?

A: Мелатонин, также известный как «гормон сна», представляет собой естественный гормон, вырабатываемый шишковидной железой головного мозга.Он регулирует цикл сна и бодрствования, сообщая организму, когда пора спать.

В: Какие побочные эффекты могут возникнуть при приеме мелатонина?

A: Наиболее частые побочные эффекты, связанные с мелатонином, включают головную боль, дискомфорт в желудке, утреннюю сонливость, дневное «похмелье» или ощущение «тяжести в голове». Если вы чувствуете вялость, тяжесть в голове или чувство похмелья, вероятно, вы принимаете слишком много для своего тела или принимаете их слишком поздно ночью.Дайте себе пару выходных и попробуйте снизить дозу до миллиграмма.

В: Кому не следует принимать мелатонин?

A: Если вы принимаете лекарства, страдаете каким-либо заболеванием, беременны или кормите грудью, страдаете аутоиммунным заболеванием или депрессивным расстройством, проконсультируйтесь с врачом перед использованием этого продукта. Не принимать во время работы с механизмами или за рулем транспортного средства. Не для детей младше 4 лет. Перед применением у детей проконсультируйтесь с врачом.

В: Какое максимальное количество мелатонина я могу принимать каждый день?

A: Эксперты указывают, что краткосрочное использование (т.е., 3 месяца и менее) мелатонина в суточном количестве 10 мг не вызывает опасений о вреде для здоровых взрослых. Длительное использование в этой дозировке требует рекомендации и наблюдения со стороны медицинского работника. Индивидуальные результаты будут отличаться от приема мелатонина, и иногда чем меньше, тем лучше.

Q: Когда лучше всего принимать жевательные конфеты с мелатонином?

A: Рекомендуется принять мелатонин за 20 минут до сна.

В: Могу ли я стать зависимым от мелатонина?

A: Natrol Мелатонин не вызывает привыкания и не является лекарством.

В: Как Natrol обеспечивает качество своих жевательных конфет?

A: Жевательные конфеты Natrol производятся на предприятии действующей надлежащей производственной практики (cGMP) с использованием высочайших стандартов качества и в соответствии с правилами FDA. Каждая партия тщательно проверяется на нескольких этапах производственного процесса, чтобы гарантировать целостность продукта.

Q: Есть ли пшеница в жевательных мармеладках с мелатонином?

A: жевательные конфеты с мелатонином не содержат пшеницу.

Вопрос: Какие подсластители используются для жевательных конфет?

A: Natrol использует только 100% натуральные источники, включая органический тростниковый сахар и органический сироп тапиоки в качестве подсластителей. Жевательные конфеты Natrol не содержат искусственных подсластителей «без сахара».

В: Является ли Natrol Melatonin Gummies вегетарианским?

A: Да, жевательные конфеты с мелатонином Natrol не содержат желатин и вегетарианские.

Q: Почему мои жевательные конфеты немного отличаются по цвету с тех пор, как я их впервые купил?

A: Поскольку мы используем только натуральные цвета, полученные из фруктов и овощей, цвета могут со временем измениться.Такое изменение цвета является естественным и не повлияет на питательные вещества, срок годности которых гарантирован.

Сохранение малых внеклеточных пузырьков в желатине-мета

Введение

Маленькие внеклеточные везикулы (sEV) — это маленькие везикулы с естественной наноразмерной двухслойной фосфолипидной структурой, секретируемой живыми клетками. sEV считаются естественным носителем для доставки компонентов, таких как белки, липиды и нуклеиновые кислоты, от донорских клеток к реципиентным клеткам, что обеспечивает возможность клеточной коммуникации на различных расстояниях. ¹ sEV широко используются в регенерации тканей, ² прицельной доставке лекарств, ³ биологической терапии и жидкостной биопсии, ^4,5 и имеют очень широкую перспективу применения.

Для терапевтических применений эффективное сохранение изолированных sEV стало проблемой. sEV были сохранены с помощью нескольких основных методов консервации, включая криоконсервацию, лиофилизацию и распылительную сушку. ^6–10 Неудивительно, что эти методы, основанные на традиционной криоконсервации клеток или консервировании лекарств, также имеют ограничения, включая зависимость от низких температур (-20 ° C, -80 ° C или -196 ° C) и оборудования, ¹¹ неблагоприятная транспортировка, ^12,13 сложные операции, ^12,13 нестабильный эффект консервации, ¹⁰ повреждение круга замораживания-оттаивания ¹⁴ и затрудненное удаление криопротекторов и лиопротекторов. ^7,15 Следовательно, очень важно найти эффективный, удобный и недорогой метод сохранения изолированных sEV. sEV представляют собой везикулы с мембранной структурой, инкапсулированные белками, нуклеиновыми кислотами и липидами. ¹⁶ При 4 ° C белки, нуклеиновые кислоты и липиды в интактной мембранной структуре относительно стабильны. ^17,18 Препарат sEV можно рассматривать как коллоид — раствор, суспендированный с наноразмерными диспергированными частицами, ¹⁹ sEV в растворе совершают нерегулярный броуновский транспорт и, таким образом, агрегируются друг с другом, что приводит к разрыву структуры мембраны и инактивация его содержимого без защиты мембранной структуры. ^18,20–23 Таким образом, активность sEV, сохраненная в фосфатно-солевом буфере (PBS), значительно снижается уже через несколько дней при 4 ° C. ^14,18,24 Мы предположили, что если агрегация sEV может быть уменьшена путем ограничения движения sEV, может быть достигнуто эффективное сохранение sEV, а также может быть уменьшено повреждение sEV за счет процесса замораживания-оттаивания.

Гидрогели — это чрезвычайно гидрофильные гели с трехмерной сетчатой ​​структурой. В последние годы многие исследования показали, что загрузка гидрогелей sEV может быть эффективной для поддержания высвобождения sEV in vivo. ^2,25–35 sEV в гидрогеле медленно высвобождается в окружающие ткани в течение длительного периода, до 1 месяца ^33,34,36 и sEV, высвобождаемый из гидрогелей в разные дни, все еще имеет ту же структуру . ³² Размер пор многих гидрогелей после сшивки составляет 10-40 нм. ^25,37 Это может эффективно ограничить движение sEV и удовлетворить наши требования по сохранению sEV. Гидрогели метакрилоила желатина (GelMA) синтезируются путем прививки метакрилового ангидрида (MA) на молекулярные цепи желатина. ²⁵ Может подвергаться чувствительному к температуре физическому сшиванию (обратимое) и химическому сшиванию, чувствительному к ультрафиолету (УФ) (необратимое). ³⁸ Гидрогели GelMA находятся в гелеобразном состоянии при 4 ° C и постепенно переходят в жидкое состояние при комнатной температуре. Некоторые из основных свойств гидрогелей GelMA очень похожи на естественный внеклеточный матрикс (ЕСМ), что делает его биосовместимым с sEV. . Гидрогели GelMA также могут быть изготовлены на микроуровне с использованием различных методологий, включая микролитье, ^39,40 фотошаблон, ⁴¹ био-3D-печать, ⁴² самосборку ⁴³ и микрофлюидные методы ⁴⁴ для создания искусственно созданных конструкций, которые имеют очень широкий диапазон перспектива применения.Недавние исследования подтвердили эффективность sEV, загруженного в гидрогели GelMA, для регенерации костно-хрящевых дефектов. ³⁶

Как показано на рисунке 1, в этом исследовании sEV, полученный из жировой ткани, был инкапсулирован в гидрогели GelMA, которые ограничивали случайное движение sEV и снижали агрегацию sEV, таким образом достигая долгосрочного сохранения sEV при 4 ° C, и экспериментально подтвердили, что консервированные с помощью этого метода sEV имели такую ​​же терапевтическую эффективность, что и свежие sEV. Сохраненный комплекс sEV-GelMA проявлял сильную ангиогенную способность и достигал контролируемого высвобождения sEV in vivo за счет регулирования времени УФ-поперечного сшивания, что показало большие перспективы для терапевтического применения.

Материалы и методы

Животные

экспериментальных животных были приобретены у Dashuo Experimental Animal Co. Ltd. (Чэнду, Китай). Уход и использование лабораторных животных соответствовали рекомендациям Институционального комитета по уходу и использованию животных Западно-Китайской школы стоматологии Сычуаньского университета. Эксперименты на животных были рассмотрены и одобрены (WCHSIRB-D-2020-391) комитетом по этике Государственной ключевой лаборатории стоматологических заболеваний Западно-Китайской школы стоматологии Сычуаньского университета.Экспериментальные животные содержались в биологической лаборатории с подходящей температурой (около 23 ± 1 ° C), влажностью (около 60–75%), циклом свет-темнота 12:12, большим количеством корма и чистой воды. Все операции на животных проводились в среде биочистки.

Изоляция sEV

Паховые жировые подушечки от 4-недельных крыс Sprague-Dawley разрезали на 1 мм ³ частей и переносили во вращающуюся бутылку Celstir (Wheaton). Через 2 дня культивирования клеток получали экстракты жировой ткани (ATE), как описано в нашем предыдущем исследовании. ⁴⁸ Затем ATE фильтровали через фильтры 0,22 мкм (Millipore, США), а затем последовательно концентрировали с мембранами Ultracel-3 (Millipore, США) и мембраной Ultracel-100 (Millipore, США) при 5000 g, 4 ° C в течение 30 минут. Реагент Total Exosome Isolation ^TM (Life Technologies) был добавлен в окончательный раствор в соответствии с инструкциями производителя для получения свежих sEV.

Дифференциальная сканирующая калориметрия

Дифференциальная сканирующая калориметрия была выполнена для определения распределения пор гидрогеля по размерам путем выполнения калориметрии.Вкратце, кусок гидрогеля 10 мг помещали в герметичный алюминиевый поддон внутри дифференциального сканирующего калориметра (NETZSCH DSC 200F3). Температуру образца доводили до -30 ° C, выдерживали в течение 5 минут, затем нагревали до 15 ° C, выдерживали в течение 5 минут, а затем снова охлаждали до -30 ° C, при этом температура изменялась со скоростью 5 ° C мин. ^-1 . Распределение пор по размерам рассчитывали по ΔV / ΔRp, где Rp — радиус поры. ^37,45

Консервация sEV

В этом исследовании было выбрано несколько методов для сохранения sEV.После промывания (i) частицы sEV осторожно ресуспендировали в PBS и хранили при 4 ° C, (ii) частицы sEV осторожно ресуспендировали в PBS, содержащем 10% диметилсульфоксид (DMSO), аликвотируя 1 мл в каждую пробирку для криоконсервации, оборачивание пробирок теплоизолированными материалами и хранение в морозильной камере с температурой -80 ° C в течение ночи (около 16 ч), а затем удаление теплоизолированных материалов; (iii) частицы sEV осторожно ресуспендировали в 5%, 10%, 15%, 20 % (мас. / об.) гидрогеля GelMA (EFL) и 0,25% (мас. / об.) фотоинициатора ацилфосфината лития (EFL) при 28–35 ° C, хранить в темном месте и хранить при 4 ° C.Консервационная концентрация sEV составляла 1 × 10 ⁹ частиц мкл ^-1 . Когда необходимо было снова выделить sEV, sEV, сохраненные при -80 ° C, оттаивали на льду в течение 30 мин или 1-2 мин при 37 ° C, промывали один раз в 20 мл PBS и смешивали с Total Exosome Isolation ^TM . реагент (Life Technologies), следующие этапы выделения были выполнены, как показано выше. Что касается sEV, инкапсулированного в гидрогеле GelMA, гель необходимо повторно нагреть до жидкого состояния (28–35 ° C), добавить 1 микролитр лизата GelMA (EFL) на миллилитр, а затем добавить реагент Total Exosome Isolation ^TM Reagent.Следующие шаги описаны в предыдущем разделе.

Трехмерное слежение за частицами sEV

Выделенные sEV метили карбоцианиновым красителем DiO (life tech, США) в соответствии с инструкциями по визуализации in vivo. Меченные DiO sEV инкапсулировали в гидрогели Gelma, помещали на чашки с толщиной покровного стекла (MatTek) и отображали при × 60 с иммерсионным маслом с использованием конфокальной микроскопии (Olympus FV1000). Канал зеленой флуоресценции 1024 × 1024 × 256 пикселей изображения и видео были собраны с 0.Расстояние 1 мкм при использовании обычного режима визуализации. Через 30 мин было получено 30 стеков. После получения с помощью функции «Пятна» IMARIS X64 9.3.0 (Bitplane) для имитации следов частиц. Скорость частицы рассчитывается с помощью программного обеспечения IMARIS.

Вестерн-блот

Белки из 30 мкг (1 × 10 ¹⁰ частиц) sEV были обнаружены с помощью антител против CD9 (Zen Bioscience, 220642) и CD81 (ZenBioscience, 381296). Образцы с одинаковым исходным числом частиц sEV хранили в течение 0, 14 и 28 дней с использованием разных методов.

Анализ слежения за наночастицами (NTA)

Свежие sEV хранили при 4 ° C в PBS, 4 ° C в 10% гидрогелях GelMA или -80 ° C в 10% ДМСО соответственно. Распределение частиц и концентрацию sEV анализировали в свежем виде или после хранения (4, 7, 10, 14, 21 и 28 дней) с использованием NTA (Particle Metrix ’ZetaView) и соответствующего программного обеспечения ZetaView 8.04.02. Приготовьте образцы гидрогелей PBS, 10% DMSO и 10% GelMA по отдельности, храните их в течение разных дней и рассчитайте количество частиц.Сохраненные частицы sEV минус сохраненные частицы среды были истинным числом частиц sEV во время консервации. Измерения NTA были записаны и проанализированы в 11 положениях при 25 ° C. Аппарат ZetaView был нормализован с использованием гомогенных частиц полистирола размером 100 нм.

Просвечивающий электронный микроскоп (ТЕМ)

Свежие sEV и sEV, которые хранились в течение 28 дней при 4 ° C в PBS, 4 ° C в 10% гидрогеле GelMA или -80 ° C в 10% DMSO в течение 28 дней, капали на медные сетки, покрытые пленкой и окрашенные. с 2% фосфорновольфрамовой кислотой.Изображения были получены с помощью электронного микроскопа (FEI).

Анализ флуоресцентной визуализации in vitro

sEV с одинаковым начальным числом частиц (1 × 10 ¹⁰ частиц) хранили в течение разных дней (0, 14, 28 дней) при разных условиях хранения, затем помечали красителем DiO (Sigma Aldrich) в соответствии с инструкцией. Свежие sEV с градиентным числом частиц были помечены DiO таким же образом. Величину флуоресценции DiO-меченного sEV анализировали с помощью системы визуализации Meastro EX pro in vivo (PerkinElmer, США) и исследовали линейную корреляцию между частицами sEV и сигналами DIO.

Выделение клеток и культивирование

Паховые жировые подушечки крыс SD разрезали на 1 мм ³ частей и обрабатывали коллагеназой в течение 30 мин. Ткань промывали PBS и центрифугировали при 1000 об / мин в течение 5 минут, а оставшийся осадок культивировали в α-модифицированной среде Игла (α-MEM; HyClone), 10% фетальной бычьей сыворотке (FBS; Gibco) с пенициллин-стрептомицином. rASC культивировали при 37 ° C в 5% CO2, и пассирование клеток выполняли, когда монослои прикрепленных клеток достигли 90% слияния.Человеческая пуповина была получена из отделения акушерства больницы Второго Западно-Китайского университета Сычуаньского университета. Номер утверждения: WCHSIRB-D-2021-015. Мы получили информированное согласие, подписанное родителями в соответствии с Хельсинкской декларацией. Собранные пуповины дважды промывали фосфатно-солевым буфером. Для выделения HUVEC вены заполняли 0,2% коллагеназой и выдерживали в течение 30 минут во влажной атмосфере при 37 ° C и 5% CO2 в течение 30 минут.Затем были получены HUVEC и культивированы в ECM (ScienCell, США).

Анализ пролиферации клеток

HUVEC засевали с плотностью 8 × 10 ² клеток на лунку и через 1 день заменяли ЕСМ (100 мкл), содержащим 0 sEV, 4 × 10 ¹⁰ свежих частиц sEV, 4 × 10 ¹⁰ частиц sEV сохранены гидрогелем GelMA соответственно. Число клеток оценивали с помощью набора для подсчета клеток-8 (CCK8, KeyGEN BioTECH, Китай). Кривые пролиферации рассчитывали по значениям оптической плотности (n = 3).Затем образцы были разделены на 3 группы: (i) Бланк: HUVEC, культивированные с ECM, (ii) свежие sEV: HUVEC, культивированные с ECM и свежим sEV, (iii) GelMA sEV: HUVEC, культивированные с ECM, и sEV хранятся в гидрогеле GelMA. Кривая пролиферации rASC была обнаружена тем же методом.

Анализ миграции клеток

Анализы миграции клеток выполняли с помощью вставки из поликарбонатной мембраны с порами 8,0 мкм Transwell ^® (Corning). HUVEC засевали 20 000 клеток на образец в верхней камере и 600 мкл среды, разделенной на группы, как описано выше, добавляли в нижнюю камеру.Через 18 часов HUVEC фиксировали 4% параформальдегидом и окрашивали окрашивающим раствором кристаллическим фиолетовым. Мигрировавшие клетки подсчитывали в трех случайно выбранных регионах и повторяли 3 раза. Тот же метод был использован для анализа миграции rASCs.

Анализ миграции царапин

HUVEC подвергали голоданию в течение ночи и создавали однородную бесклеточную зону с помощью 200 мкл стерильных пластиковых желтых наконечников. Движение и миграцию клеток в бесклеточную зону собирали и контролировали в течение 12 часов.Количество клеток, перемещающихся в поцарапанную область, подсчитывали с использованием программного обеспечения для анализа Image J (NIH, Bethesda, MD) для количественного анализа. Тот же метод был использован в анализе миграции царапин rASCs.

Анализ образования пробирок

8000-клеток-HUVEC в 50 мкл среды ECM добавляли на u-слайд ангиогенеза (Ibidi, Gräfelfing), покрытый 10 мкл Matrigel (Corning), и группы делили, как указано выше, через 4 часа изображения получали с помощью микроскопа. (Olympus, Th5-200). Общая длина трубок и узлов рассчитывалась с помощью программы Image J.

qRT-PCR

HUVEC культивировали до 90% слияния в 6-луночных тканевых планшетах, а затем среду для культивирования клеток заменяли культуральную среду и клетки собирали после 4 дней культивирования. Результаты ПЦР анализировали с использованием метода 2 ^-ΔΔCT и нормализовали по GAPDH. Праймеры можно найти в дополнительной таблице S1 .

Оценка реологических свойств

Гидрогели GelMA толщиной 1 мм с разной степенью сшивания были получены сшиванием 0 с, 3 с и 5 с на коже мыши C57BL / 6J с источником видимого света 405 нм.Реометр TA (TA-AR2000ex) был использован для анализа реологических свойств 3 групп 10% гидрогеля GelMA при 30 ° C, включая модуль накопления (G ‘), модуль потерь (G’ ‘) и вязкость при различных условиях. условия (время, деформация колебаний и скорость сдвига).

Флуоресцентный анализ in vivo

Спина мышей C57BL / 6J была без шерсти, в центре спины был сделан подкожный разрез, имплантирована силиконовая трубка 12 × 2 мм и разрез зашит. Два набора смешанных материалов, т. Е. Меченый диоптриями sEV, инкапсулированный в нефлуоресцентный гидрогель GelMA, и нефлуоресцентный sEV, инкапсулированный в красный флуоресцентно меченный GelMA (EFL), вводили в силиконовые пробирки, и гидрогели GelMA подвергали УФ-сшиванию для 0 с, 3 с и 5 с соответственно на слое кожи мыши.Затем мышей визуализировали с помощью системы визуализации Meastro EX pro in vivo (PerkinElmer), чтобы сразу же визуализировать мышей. Сигналы визуализации биолюминесценции (BLI) от дня 0 до дня 6 были рассчитаны путем усреднения сигналов от ROI.

Анализ ангиогенеза in vivo

Как упоминалось в анализе флуоресценции in vivo, силиконовые трубки 12 × 2 мм имплантировали подкожно мышам C57BL / 6J под анестезией. Инъекции были разделены на 4 группы: (i) 60 мкл гидрогелей GelMA с 10% консервантом (ii) 8 × 10 ¹⁰ свежих sEV, капсулированных в 60 мкл гидрогелей GelMA с 10% консервантами (iii) 8 × 10 ¹⁰ начальное количество частиц, капсулированных sEV в 60 мкл 10% гидрогелей GelMA 60 мкл, сохраняемых при 4 ° C в течение 28 дней (iv) 8 × 10 ¹⁰ начальное количество частиц sEV, сохраняемых в 30 мкл PBS при 4 ° C в течение 28 дней, капсулированных в 30 мкл гидрогелей GelMA с 20% -ной консервацией.Через шесть дней после инъекций все мыши были умерщвлены с одобрения Комитета по этике. После удаления кожи с помощью программного обеспечения Image J были сделаны цифровые фотографии для измерения площади неоваскуляризации. Затем для оценки ангиогенеза использовали окрашивание гематоксилином и эозином (H&E) и иммунохимическое окрашивание CD31.

Статистический анализ

Результаты выражены как среднее ± стандартное отклонение. Значимые различия между двумя группами были рассчитаны с помощью теста однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с тестом posthoc для Турции.Значимые различия между данными повторных измерений были рассчитаны с помощью дисперсионного анализа данных повторных измерений (MANOVA). Статистически значимым считалось P <0,05. Для корреляционного анализа использовался линейный корреляционный анализ. R> 0,5 считалось сильной корреляцией. Статистические расчеты проводились с помощью GraphPad Prism 6.0.

Результаты

Гидрогели GelMA, уменьшенное движение sEV

Размер пор гидрогелей с различными концентрациями GelMA или sEV был измерен термическим методом, и мы обнаружили, что средний размер пор (Рисунок 2A) и распределение пор по размерам ( Дополнительный Рисунок S1 ) 5–20% гидрогелей не показали. многое изменить.Размер пор гидрогелей увеличивался с увеличением концентрации sEV, но оставался менее 30 нм. Затем мы исследовали варианты двух типов сшивания гидрогелей, инкапсулированных sEV (1 × 10 ⁹ частиц мкл ^-1 ) с различными концентрациями гидрогеля ( Дополнительный рисунок S2 ), и обнаружили, что sEV не оказал никакого эффекта. в результате низкотемпературного физического сшивания и УФ-сшивания.

С помощью наблюдения с помощью конфокальной микроскопии и программного анализа мы визуализировали движение sEV в различных средах. Было обнаружено, что sEV претерпевает быстрое нерегулярное броуновское движение в PBS (Рисунок 2B; дополнительный рисунок S3 , дополнительный видео 1 ), в то время как sEV, инкапсулированный в гидрогели, претерпевает значительно более медленное движение (Рисунок 2B, дополнительный рисунок S3 , Supplementary Video 2 ) со значительно меньшей протяженностью и траекторией, чем движение sEV в PBS одновременно ( Supplementary Video 3 , левая частица: движение sEV в GelMA.правая частица: движение sEV в PBS. Помещение двух частиц в одно и то же пространство). Мы проанализировали движение отдельных частиц (рис. 2C) и получили те же результаты. Количественный анализ конкретных скоростей частиц показал, что sEV в PBS перемещались более чем в 40 раз быстрее, чем в гидрогелях GelMA (рис. 2D), предполагая, что 10% гидрогели GelMA эффективно ограничивали нерегулярное движение sEV.

sEV, инкапсулированный в гидрогелях GelMA, сохранил свое количество частиц, размер, структуру и белок

sEV сохраняли до 4 недель, и добавляли криоконсервацию при -80 ° C с 10% диметилсульфоксидом (ДМСО) в качестве положительного контроля (ПК).Результаты анализа отслеживания наночастиц (рис. 3A) показали, что как криоконсервация при -80 ° C (ПК), так и сохранение гидрогеля GelMA при 4 ° C (4 ° C-GelMA) были эффективными в предотвращении значительного уменьшения количества частиц sEV. В течение 4-недельного периода хранения количество частиц sEV уменьшилось примерно на 20%. Напротив, количество sEV было значительно снижено при обычном хранении при 4 ° C (4 ° C-PBS), упав наполовину примерно через 10 дней, что согласуется с некоторыми опубликованными результатами. ^6,7 Далее мы провели корреляцию между числом частиц и значениями флуоресценции с помощью меченого DiO sEV ( дополнительный рисунок S4 ), а затем количественно оценили флуоресценцию сохраненного sEV (рисунки 3B и C) и подтвердили аналогичные выводы. Таким образом, гидрогели GelMA могут эффективно поддерживать количество частиц sEV.

Мы также исследовали изменения размера частиц sEV после различного времени хранения. Мы обнаружили, что размер частиц значительно увеличивался со временем при хранении PBS при 4 ° C (рис. 3D), что также согласуется с предыдущими выводами. ^8,12,46 Что касается распределения частиц по размерам, пик стал больше, а доля уменьшилась, а доля везикул с большим размером частиц (200–300 нм) увеличилась, что указывает на агрегацию sEV. Напротив, размер частиц sEV, хранящихся при замораживании -80 ° C и гидрогелях, немного увеличился, и изменение распределения частиц по размерам не было значительным (рис. 3E).

Как показали результаты просвечивающей электронной микроскопии (рис. 3F), свежий sEV имел стандартную структуру sEV, состоящую из круглых везикул, окруженных двойным слоем мембраны.Обычно сохраняемые sEV при 4 ° C демонстрировали отчетливую агрегацию sEV с нарушением структуры везикул и нечеткими границами между везикулами. Напротив, структура везикул sEV, сохраненных при замораживании -80 ° C и гидрогелях Gelma при 4 ° C, была относительно нормальной и неотличимой от структуры свежих sEV. В сочетании с результатами просвечивающей электронной микроскопии sEV, сохраненный при 4 ° C-PBS в нашем исследовании, показал значительную агрегацию, но это явление не наблюдалось в 4 ° C-GelMA и ПК.

Кроме того, мы обнаружили, что sEV стабильно экспрессировал некоторые маркерные белки, но с увеличением дней хранения. Как сообщалось в некоторых исследованиях, экспрессия белка sEV значительно снижалась при хранении при 4 ° C (рис. 3G), ¹¹ , тогда как sEV, замороженный при -80 ° C (ПК), и те, которые хранятся в гидрогелях GelMA при 4 ° C, существенно не изменились. , поэтому у нас есть веские основания полагать, что белки sEV, хранящиеся в гидрогелях GelMA, не изменились.

Сохраненные sEV обладают сильной способностью стимулировать пролиферацию, миграцию и ангиогенез клеток

Была исследована скорость выделения частиц sEV в различных средах, и эффективная скорость выделения (рис. 4A) sEV в гидрогелях GelMA составила около 70%, что было достаточно для проведения клеточных экспериментов.В анализе пролиферации клеток, анализе миграции клеток и анализе царапин промотирующий эффект sEV, сохраненный в гидрогелях GelMA в течение 28 дней (GelMA-sEV-28Days) по сравнению со свежим sEV (Fresh sEV), был в основном таким же для эндотелиальных клеток пупочной вены человека ( HUVEC) (рис. 4B – D) и стволовые клетки жировой ткани крысы (rASC) (дополнительный рисунок S5A — C ). Сохраненные гидрогелем sEVs GelMA также проявляли проангиогенную способность, относительно совместимую с таковой свежих sEV в анализах образования пробирки (фиг. 4E) и анализах ПЦР генов, связанных с ангиогенезом (фиг. 4F).Эти результаты были весьма удовлетворительными и полностью продемонстрировали эффективность и полезность нашего метода консервации.

Сохраненный комплекс sEV-GelMA достигнуто контролируемое высвобождение sEV in vivo

Здесь мы обрабатывали 28 дней консервированных 1 × 10 ⁹ частиц мкл ^-1 sEV в 10% гидрогелях Gelma как комплекс и исследовали эффект замедленного и контролируемого высвобождения этого комплекса. Результаты показали, что различная продолжительность УФ-сшивания гидрогелей GelMA может изменять свойства комплекса GelMA-sEV.Общий вид показывает, что GelMA-sEV без УФ-сшивающего комплекса представляет собой вязкую жидкость с некоторым поверхностным натяжением. Когда время сшивания достигает 3 секунд, комплекс частично затвердевает и плохо закрепляется. Когда время сшивания достигло 5 секунд, комплекс полностью затвердел и мог оставаться в форме круглой формы (фиг. 5A). Реологические испытания показали, что вязкости, модуль упругости и модуль потерь комплекса GelMA-sEV, очевидно, изменяются с разным временем сшивания (рис. 5B и C).Затем мы провели эксперименты in vivo, в которых силиконовые пробирки с комплексами GelMA-sEV, сохраненными в течение 28 дней, имплантировали в подкожный слой спины мышей C57BL / 6J (рис. 5D), и обнаружили, что значения флуоресценции красного флуоресцентно меченного гидрогеля сам по себе (фиг. 5E) изменился очень аналогично таковым для меченого DiO sEV, завернутого только в гидрогель GelMA (фиг. 5F) в течение 0-6 дней. Разница в изменении скорости поглощения геля и скорости высвобождения sEV от 0 до 5 с УФ-сшивания была более чем в 5 раз (рис. 5G).Мы обнаружили, что скорость абсорбции гидрогеля сильно коррелирует со скоростью высвобождения sEV in vivo. Следовательно, скорость абсорбции гидрогелей in vivo можно контролировать, контролируя степень УФ-сшивки, которая косвенно регулирует высвобождение sEV, что приводит к искусственно контролируемой системе высвобождения sEV-GelMA.

Сохраненный sEV, способствующий ангиогенезу in vivo

Проангиогенный эффект sEV, сохраненный в гидрогелях GelMA, можно было четко наблюдать через 6 дней подкожной имплантации в силиконовые трубки путем инъекции систем sEV-гидрогелей с различными методами и днями хранения.Проангиогенный эффект sEV, сохраненный в гидрогелях (GelMA-sEV-28 дней), соответствовал таковому для свежего sEV (Fresh sEV) с равномерным распределением и четко определенными неоваскулярными границами, тогда как проангиогенный эффект sEV сохранялся в PBS. в течение 28 дней (PBS-sEV-28 дней) эффект был немного хуже, но также четко отличался от группы отрицательного контроля (NC) (рис. 6A и B). В окрашенных HE срезах неоваскуляризация фасциального слоя, заполненного, была очевидна в группах Fresh sEV и GelMA-sEV-28days, заполненных большим количеством эритроцитов, тогда как в группе PBS-Sev-28days сосудов было меньше, их диаметры были тоньше (рис. 6С).В иммуногистохимически окрашенных срезах наблюдалось, что было больше сосудистых эндотелиальных клеток, экспрессирующих CD31-позитивность, в группах Fresh sEV и GelMA-sEV-28 дней, тогда как было меньше сосудистых эндотелиальных клеток, экспрессирующих CD31-позитивность в группе PBS-sEV-28 дней. и в группе NC почти не наблюдалось эндотелиальных клеток сосудов, экспрессирующих CD31 (фиг. 6D). Таким образом, мы пришли к выводу, что сохраненные sEV гидрогели GelMA обладают способностью стимулировать ангиогенез in vivo в соответствии со свежими sEV.

Обсуждения

В последние годы sEV широко использовались в медицине, но сохранение sEV все еще сталкивается с множеством проблем.В настоящее время не существует метода консервации, который сочетал бы в себе высокую скорость извлечения, низкую стоимость, удобство и простоту транспортировки. Чтобы решить проблему агрегатов sEV при 4 ° C, приводящих к разрыву мембраны и снижению активности, мы разработали новую стратегию сохранения sEV, инкапсулируя sEV в гидрогеле GelMA для уменьшения агрегации, таким образом достигнув цели сохранения sEV.

Чтобы выбрать подходящую концентрацию гидрогеля GelMA, мы сначала исследовали размер пор гидрогелей с различными концентрациями GelMA или sEV.Сканирующий дифференциальный термический метод — классический способ измерения размера пор гидрогелей. ^37,45 Сообщается, что размер пор гидрогелей GelMA обратно пропорционален концентрации, наши результаты показали ту же тенденцию. ³⁸ Размер пор гидрогелей GelMA был значительно меньше, чем размер пор sEV, что ограничивало движение sEV.

Как описано во многих исследованиях, загрузка sEV в гидрогели мало влияла на основные свойства гидрогелей. ^25,33,47 Учитывая, что сохраненные GelMA и sEV можно использовать непосредственно in vivo, мы выбрали концентрацию 1 × 10 ⁹ частиц мкл ^-1 sEV и 10% гидрогелей GelMA, что является обычной концентрацией. для регенерации тканей. ^36,40,48,49 Недавние исследования показали, что жировая ткань может продуцировать и секретировать широкий спектр медиаторов, регулирующих жировую ткань и важные удаленные мишени в качестве эндокринного органа. ⁵⁰ sEV, полученные из жировой ткани, легко доступны и, как было показано, способствуют липогенезу, дифференцировке ангиогенеза и иммуномодуляции. ^48,51–54 Существует множество методов выделения sEV, и осаждение полиэтиленгликолем (PEG) является быстрым, удобным и высокопроизводительным методом выделения, который широко используется для выделения больших количеств sEV. ⁵⁵ Недавнее исследование показало, что sEV, полученный осаждением ПЭГ, имел такую ​​же высокую чистоту, как и выделенный ультрацентрифугированием. ⁵⁶ Таким образом, для выделения sEV в нашем исследовании было выбрано осаждение ПЭГ. Стоит отметить, что выделенный коллагеназой sEV ⁵⁷ не подходит для сохранения этим методом, поскольку остаточная коллагеназа будет ферментативно растворять гидрогели GelMA.

Согласно предыдущим исследованиям, гидрогели, нагруженные sEV, могут иметь эффект замедленного высвобождения in vivo в течение более одного месяца, а высвобожденный sEV остается физиологически функциональным. ^33,34,36 Некоторые исследования показали, что высвободившиеся sEV в любое время все еще имеют ту же структуру, что и свежие sEV. ³² Однако, как упоминалось выше, sEV будет деактивирован через несколько дней при температуре окружающей среды 4 ° C, а температура тела намного выше 4 ° C, что, по-видимому, указывает на то, что гидрогели оказывают определенное защитное действие на sEV. , но точный механизм неизвестен.На основании наших экспериментальных результатов было подтверждено, что скорость движения sEV, инкапсулированного в гидрогели GelMA, была значительно замедлена, в основном из-за ограничений гидрогелей GelMA, что соответствовало нашим первоначальным предположениям.

В настоящее время наиболее распространенными методами сохранения sEV являются криоконсервация и лиофилизация. Криоконсервация — это стратегия консервации, которая снижает температуру ниже температуры, необходимой для биологических реакций для поддержания функциональной стабильности, и обычно применяется при t −20 ° C, −80 ° C и −196 ° C.Исследования показали, что скорость разложения белка при хранении при -20 ° C выше, чем при хранении при −80 ° C. ¹⁵ Скорость разложения sEV белков, таких как ALIX, HSP70 и TSG101, снизилась, а скорость разложения при -80 ° C была меньше, чем при -20 ° C. ¹⁴ Однако не было существенной разницы между криоконсервацией при –196 и –80 ° C. ²³ Метод криоконсервации может привести к «обморожению». Описанное здесь «обморожение» в основном связано с дисбалансом давления осмоса во время процесса замораживания и образованием кристаллов льда внутри биологических частиц. ⁷ Чтобы избежать явления обморожения, часто используются криопротекторы некоторых подходящих концентраций для увеличения времени хранения. Криопротекторы проницаемости и непроницаемости используются для защиты структуры мембраны. Некоторые исследования показали, что диметилсульфоксид (ДМСО) можно использовать в качестве криопротектора проницаемости, чтобы помочь сохранить морфологию этих везикул для длительного хранения, хотя ДМСО не смог сохранить морфологию всех везикул в образце. ¹² Несмотря на то, что криоконсервация имела несколько отрицательных отзывов, ^23,24 она по-прежнему широко использовалась. Для лиофилизации также необходимы лиопротекторы, такие как трегалоза и поливинилпирролидон 40, для стабилизации структуры мембраны. ⁵⁸ Учитывая удобство эксплуатации, мы выбрали криоконсервацию ДМСО в качестве положительного контроля (ПК), строго соблюдая стандартные процедуры криоконсервации и оттаивания. ¹²

Изменение размера частиц sEV имеет большое значение для сохранения.Как правило, существует две причины увеличения размера частиц sEV. Один из них — это агрегация, которая, как было показано, увеличится через несколько дней при 4 ° C. ⁶ Распределение по размерам нескольких перекрывающихся гауссовых распределений по размерам привело к появлению длиннохвостых смесей, предполагая, что замораживание привело к образованию популяции более крупных агрегатов нанопузырьков диаметром до 400 нм, ¹⁸ Кроме того, после обработки поверхности sEV, пузырькам трудно контактировать друг с другом и вызывать агрегацию.Было замечено, что размер частиц может оставаться постоянным в течение примерно 1 месяца. ²² Другой сценарий — увеличение размера отдельного пузырька, которое в основном вызывается гипотонической средой. ⁷ Кроме того, также сообщалось о везикулах меньшего размера, которые в основном представляют собой фрагменты, возникающие в результате разрыва везикул. ^12,46 Наши результаты показали, что количество, размер, структура и белок частиц 28-дневных sEV были аналогичны таковым для свежих sEV, этот метод консервации позволяет избежать криогенного процесса, значительно сохраняет структуру и количество sEV , и имеет то преимущество, что он дешев, удобен и транспортабелен.

Защитные агенты следует добавлять во время криоконсервации, лиофилизации, как указано выше. В предыдущем исследовании сохранения sEV сохраненные sEV никогда не подвергались повторной изоляции для функциональной проверки, а остаточные протекторы (ДМСО, трегалоза, альбумин или поливинилпирролидон 40) не подходили для клеточных экспериментов. ⁵⁹ Относительно низкая эффективность повторного выделения sEV в ДМСО относительно низкая посредством осаждения ПЭГ, что может быть важной причиной, ограничивающей широкое использование этого метода консервации.Несмотря на то, что функция sEV, сохраненная в ДМСО при -80 ° C, может соответствовать свежей sEV с тем же числом частиц, разница в эффективности повторного выделения sEV из разных консервантов (> 20%) сделала ненужным тестирование функция sEV сохраняется в ДМСО при -80 ° C. Высокая степень изоляции обеспечивает эффективность нанесения, а наш метод консервации показал относительно высокий уровень изоляции — 75%.

В исследованиях, связанных с сохранением sEV, физическое сшивание гидрогелей GelMA происходит при низких температурах, гели обратимы и могут быть переведены в жидкое состояние при комнатной температуре для повторного выделения sEV и последующего использования.Химическое УФ-сшивание гидрогелей GelMA можно использовать для образования необратимых гелей для применения in vivo. Лечение и регенерация тканей при многих заболеваниях требуют длительного приема лекарств, таких как заживление ран, восстановление сердца ⁶⁰ , повреждение спинного мозга ⁶¹ , дефект костно-хрящевой ткани ²⁵ и восстановление почек. ⁶² Период полувыведения sEV in vivo очень короткий, и они метаболизируются в печени в течение нескольких часов. ⁶³ Длительное высвобождение sEV требуется во многих случаях для уменьшения травм и неудобств, связанных с повторным дозированием.Мы обнаружили, что комплексная система sEV-GelMA, сохраненная в течение 28 дней, может обеспечивать как замедленное высвобождение, так и контролируемое высвобождение sEV in vivo. Степень сшивания гидрогелей регулируется временем сшивания. Мы наблюдали изменение реологических свойств гидрогелей и изменение абсорбции in vivo, что согласуется с предыдущими сообщениями. ⁶⁴ Когда гидрогели GelMA находились в жидком состоянии, sEV мог свободно перемещаться в гидрогелях и внеклеточном матриксе и быстро поглощаться окружающими тканями.Поскольку скорость абсорбции геля в то же время очень высока, скорость абсорбции геля близка к высвобождению sEV. В нашем исследовании после 5 секунд УФ-сшивания мы обнаружили, что скорость высвобождения sEV практически не изменилась. как скорость абсорбции гидрогелей, что не согласуется с результатами многих исследований. ^25,36 В некоторых исследованиях скорость высвобождения sEV обычно проверялась изменением количества частиц sEV или изменениями белка в PBS в условиях in vitro. ^2,33,65 В действительности гидрогели in vivo не набухают, размер пор не сильно меняется, и sEV трудно высвобождаться в окружающие ткани их собственным движением. Основным фактором, определяющим высвобождение sEV, является абсорбция самих гидрогелей. Стоит упомянуть, что некоторые специально разработанные гидрогели могут контролировать степень сшивания геля in vitro или in vivo, позволяя ему расщепляться после сшивания, например, гидрогели, активируемые светом, ⁴⁷ матричная металлопротеиназа-2, чувствительная само- сборка пептидных гидрогелей, ⁶⁶ PH-чувствительных самособирающихся пептидных гидрогелей, ³⁴ , которые также могут достигать относительно точного эффекта контролируемого высвобождения in vitro.Наши эксперименты полностью подтвердили взаимосвязь между абсорбцией геля и высвобождением sEV и заложили основу для разработки будущих исследований устойчивого и контролируемого высвобождения sEV через комплексную систему гидрогели-sEV.

После определения взаимосвязи между высвобождением sEV и абсорбцией гидрогеля GelMA мы разработали эксперимент in vivo с относительно короткой продолжительностью и значительными эффектами. Сначала силиконовые пробирки помещали в слой подкожной фасции мышей C57BL / 6J, а затем образцы, содержащие комплекс sEV-GelMA, вводили в силиконовую трубку.Комплекс sEV-GelMA подвергали УФ-сшиванию в течение 3 секунд, и образцы собирали и наблюдали через 6 дней. Область дорсального подкожного фасциального слоя выбрана потому, что здесь отсутствуют естественные поверхностные кровеносные сосуды, что очень удобно для сравнительного исследования. Согласно предыдущим исследованиям, sEV из жировой ткани был высокоэффективным в стимулировании ангиогенеза. ^48,54 Следовательно, способность стимулировать ангиогенез подходит для тестирования функции сохраненных sEV.Наши результаты продемонстрировали, что GelMA не влияет на ангиогенез, тогда как способность сохраненных sEV стимулировать ангиогенез все еще очевидна.

GelMA широко используются в различных медицинских целях благодаря своим подходящим биологическим свойствам и настраиваемым физическим характеристикам. ³⁸ Он обладает хорошей биосовместимостью, так как имеет свойства, аналогичные свойствам нативного внеклеточного матрикса (ЕСМ). Мы обнаружили следующие преимущества гидрогелей GelMA для консервации, (i): наличие термочувствительного обратимого физического поперечного сшивания облегчает загрузку и изоляцию sEV.(ii): возможность необратимого УФ-поперечного сшивания in vivo. (iii): хорошая биосовместимость, вводимые вместе, не влияя на активность sEV. (iv): отработанная технология приготовления, которая позволяет синтезировать или покупать готовые продукты. Благодаря хорошей совместимости между гидрогелями sEV и GelMA, эта терапевтическая комбинация может широко использоваться для лечения и регенерации тканей описанными выше методами. Помимо эффективного сохранения sEV и контролируемого высвобождения sEV, сконструированный нами консервированный комплекс sEV-GelMA также имеет очень многообещающие применения in vivo.

Заключение

Основываясь на терапевтическом потенциале sEV в контексте будущего клинического применения, мы разработали эффективную, недорогую, удобную, высокую скорость изоляции и переносимую стратегию сохранения sEV при 4 ° C путем инкапсуляции sEV в гидрогели GelMA для ограничения движения. sEV и уменьшить агрегацию sEV. Результаты показали, что sEV, сохраненный в гидрогелях GelMA в течение 28 дней при 4 ° C, имел такое же количество частиц, размер и характеристики, как свежий sEV. Сохраненный sEV может быть впоследствии выделен и стимулировать пролиферацию, миграцию и дифференцировку клеток в той же степени, что и свежий sEV.In vivo мы наблюдали, что sEV, сохраняющийся в течение 28 дней, все еще обладает сильной способностью стимулировать ангиогенез. Кроме того, мы исследовали и сконструировали систему контролируемого высвобождения консервированного комплекса sEV-GelMA, которая является троичной системой консервации-изоляции-применения.

Благодарности

Эта работа была поддержана Национальной программой ключевых исследований и разработок Китая (2017YFA0104800) и Программой исследований и разработок ключевых технологий провинции Сычуань (2019YFS0312).

Раскрытие информации

Все авторы сообщили об отсутствии конфликта интересов в этой работе.

Список литературы

1. Ткач М., Тери С. Коммуникация внеклеточными пузырьками: где мы находимся и куда нам нужно идти. Ячейка . 2016; 164 (6): 1226–1232. DOI: 10.1016 / j.cell.2016.01.043

2. Zhang S, Yang Y, Jia S, et al. Подобные экзосомам везикулы, происходящие из эпителиальных клеток оболочки корня Гертвига, способствуют регенерации ткани дентин-пульпа. Тераностика . 2020; 10 (13): 5914–5931. DOI: 10.7150 / thno 43156

3. Ван Дж., Ли Дж., Ту С. и др.Высокопроизводительный одноклеточный анализ двойной доставки лекарств, опосредованной экзосомами, судьбы in vivo и синергической терапии опухолей. Наноразмер . 2020; 12 (25): 13742–13756. DOI: 10.1039 / D0NR02344B

4. Ян ХХ, Сунь Ц., Ван Л, Го XL. Новый взгляд на изоляцию, методы идентификации и медицинские применения экзосом. J Control Release . 2019; 308: 119–129. DOI: 10.1016 / j.jconrel.2019.07.021

5. Kohaar I, Chen Y, Banerjee S, et al. Панель экспрессии генов экзосом мочи различает вялотекущий и агрессивный рак простаты при биопсии. Дж Урол . 2021. 205 (2): 420–425. DOI: 10.1097 / JU.0000000000001374

6. Чжан И, Би Дж, Хуанг Дж, Тан Й, Ду С., Ли П. Экзосома: обзор ее классификации, методов выделения, хранения, диагностики и применения таргетной терапии. Int J Nanomedicine . 2020; 15: 6917–6934. DOI: 10.2147 / IJN.S264498

7. Кусума Г.Д., Барабади М., Тан Дж.Л., Мортон Д.А.В, Фрит Дж.Э., Лим Р. Защищать и сохранять: новые стратегии сохранения внеклеточных везикул. Фронт Фармакол .2018; 9: 1199. DOI: 10.3389 / fphar.2018.01199

8. Bosch S, de Beaurepaire L, Allard M и др. Трегалоза предотвращает агрегацию экзосом и криоповреждения. Научная репутация . 2016; 6: 36162. DOI: 10.1038 / srep36162

9. Мунагала Р., Акил Ф., Джеябалан Дж., Гупта Р.К. Экзосомы из коровьего молока для доставки лекарств. Рак Летт . 2016; 371 (1): 48–61. DOI: 10.1016 / j.canlet.2015.10.020

10. Ву Дж.Й., Ли Й.Дж., Ху ХБ, Хуанг С., Сян Д. Сохранение мелких внеклеточных пузырьков для функционального анализа и терапевтического применения: сравнительная оценка условий хранения. Доставка лекарств . 2021. 28 (1): 162–170. DOI: 10.1080 / 10717544.2020.1869866

11. Ли М., Бан-Дж. Дж., Им В., Ким М. Влияние условий хранения на восстановление экзосом. Biotechnol Bioprocess Eng . 2016; 21 (2): 299–304. DOI: 10.1007 / s12257-015-0781-x

12. Wu Y, Deng W., Klinke DJ. Экзосомы: улучшенные методы характеристики их морфологии, содержания РНК и поверхностных белковых биомаркеров. Аналитик . 2015. 140 (19): 6631–6642. DOI: 10.1039 / C5AN00688K

13.Франк Дж., Рихтер М., де Росси С., Лер С.М., Фурманн К., Фурманн Г. Внеклеточные везикулы защищают модельные ферменты глюкуронидазы во время сублимационной сушки. Научная репутация . 2018; 8 (1): 12377. DOI: 10.1038 / s41598-018-30786-y

14. Cheng YZQ, Han Q. Влияние pH, температуры и замораживания-оттаивания.pdf. Белковая клетка . 2018; 10 (4): 298–299.

15. Лоринц А.М., Тимар К.И., Маросвари К.А. и др. Влияние хранения на физические и функциональные свойства внеклеточных везикул, полученных из нейтрофильных гранулоцитов. J Экстраклеточные везикулы . 2014; 3: 25465. DOI: 10.3402 / jev.v3.25465

16. Каллури Р., Леблеу В.С. Биология, функции и биомедицинские применения экзосом. Наука . 2020; 367: 6478. DOI: 10.1126 / science.aau6977

17. Jin Y, Chen K, Wang Z, et al. ДНК во внеклеточных везикулах сыворотки стабильна при различных условиях хранения. BMC Рак . 2016; 16 (1): 753. DOI: 10.1186 / s12885-016-2783-2

18. Марото Р., Чжао Ю., Джамалуддин М. и др.Влияние температуры хранения на целостность экзосом дыхательных путей для диагностических и функциональных анализов. J Экстраклеточные везикулы . 2017; 6 (1): 1359478. DOI: 10.1080 / 20013078.2017.1359478

19. Худ Дж., Скотт М., Виклайн С.Дж. Максимальное повышение коллоидной стабильности экзосом после электропорации. Анал Бионанл Хим . 2014; 448: 41–49.

20. Евтушенко Е.Г., Багров Д.В., Лазарев В.Н., Лившиц М.А., Хомякова Е. Адсорбция внеклеточных везикул на стенках пробирки при хранении в растворе. PLoS Один . 2020; 15 (12): e0243738. DOI: 10.1371 / journal.pone.0243738

21. Херрманн И.К., Вуд М.Я., Фурманн Г. Внеклеточные везикулы как платформа доставки лекарств следующего поколения. Нат Нанотехнологии . 2021. 16 (7): 748–759. DOI: 10.1038 / s41565-021-00931-2

22. Латвал С., Ернени С.С., Бойе С. и др. Конструирование полимерных гибридов экзосом методом радикальной полимеризации с переносом атома. Proc Natl Acad Sci U S A . 2021; 118 (2): e2020241118. DOI: 10.1073 / pnas.2020241118

23.Донг Х, Ли М, Ли Кью и др. Влияние криоконсервации на концентрацию микрочастиц, прокоагулянтную функцию, распределение по размерам и морфологию. Медицинский Научный Монит . 2019; 25: 6675–6690. DOI: 10.12659 / MSM.917962

24. Jeyaram A, Jay SJ. Сохранение и стабильность внеклеточных везикул для терапевтического применения. AAPS J . 2017; 20 (1): 1. DOI: 10.1208 / s12248-017-0160-y

25. Чен П., Чжэн Л., Ван И и др. Настольная стереолитография. 3D-печать радиально ориентированного биочувствительного элемента внеклеточного матрикса / экзосомы мезенхимальных стволовых клеток для регенерации костно-хрящевых дефектов. Тераностика . 2019; 9 (9): 2439–2459. DOI: 10.7150 / thno.31017

26. Zhang K, Zhao X, Chen X, et al. Усиление терапевтических эффектов экзосом, полученных из мезенхимальных стволовых клеток, с инъекционным гидрогелем для лечения ишемии задних конечностей. Интерфейсы приложения ACS Mater . 2018; 10 (36): 30081–30091. DOI: 10.1021 / acsami.8b08449

27. Silva AKA, Perretta S, Perrod G и др. Термореактивный гель, залитый внеклеточными везикулами, полученными из стволовых жировых клеток, способствует заживлению свищей пищевода в стратегии термической доставки. САУ Нано . 2018; 12 (10): 9800–9814. DOI: 10.1021 / acsnano.8b00117

28. Эрнандес М.Дж., Гаэтани Р., Питерс В.М. и др. Гидрогели децеллюляризованного внеклеточного матрикса как платформа доставки для лечения микроРНК и внеклеточных везикул. Адв Тер (Вайн) . 2018; 1 (3). DOI: 10.1002 / adtp.201800032

29. Шафей С., Ханмохаммади М., Хейдари Р. и др. Альгинатный гидрогель, содержащий экзосомы, способствует регенерации тканей в полнослойных кожных ранах: исследование in vivo. J Биомедицинская Материал Res A . 2020; 108 (3): 545–556. DOI: 10.1002 / jbm.a.36835

30. Xu N, Wang L, Guan J, et al. Эффекты заживления ран полисахарида Curcuma zedoaria с экзосомами богатой тромбоцитами плазмы, собранными на губке из хитозана / шелкового гидрогеля, на модели крыс с диабетом. Инт Дж Биол Макромол . 2018; 117: 102–107. DOI: 10.1016 / j.ijbiomac.2018.05.066

31. Shi Q, Qian Z, Liu D, et al. Экзосомы, полученные из GMSC, в сочетании с губкой из хитозана / шелкового гидрогеля ускоряют заживление ран на модели дефекта кожи у крыс с диабетом. Передняя физиология . 2017; 8: 904. DOI: 10.3389 / fphys.2017.00904

32. Li L, Zhang Y, Mu J, et al. Трансплантация экзосом, полученных из мезенхимальных стволовых клеток человека, иммобилизованных в адгезивном гидрогеле, для эффективного лечения повреждений спинного мозга. Nano Lett . 2020; 20 (6): 4298–4305. DOI: 10.1021 / acs.nanolett.0c00929

33. Мардпур С., Ганиан М. Х., Садеги-абандансари Н. и др. Опосредованная гидрогелем устойчивая системная доставка внеклеточных везикул, полученных из мезенхимальных стволовых клеток, улучшает регенерацию печени при хронической печеночной недостаточности. Интерфейсы приложения ACS Mater . 2019; 11 (41): 37421–37433. DOI: 10.1021 / acsami.9b10126

34. Mol EA, Lei Z, Roefs MT, et al. Инъекционные супрамолекулярные гидрогели уреидопиримидинона обеспечивают замедленное высвобождение терапевтических средств для внеклеточных везикул. Adv Healthc Mater . 2019; 8 (20): e1

7. DOI: 10.1002 / adhm.201

7

35. Лин Дж., Ван З., Хуанг Дж. И др. Экзосома-гидрогель с защитой от микросреды для облегчения регенерации эндометрия, восстановления фертильности и живорождения потомства. Малый . 2021; 17 (11): e2007235. DOI: 10.1002 / smll.202007235

36. Ху Х, Донг Л., Бу Зи и др. Обильные miR-23a-3p мелкие внеклеточные везикулы, высвобождаемые из гидрогеля Gelma / наноглины для регенерации хряща. J Экстраклеточные везикулы . 2020; 9 (1): 1778883. DOI: 10.1080 / 20013078.2020.1778883

37. Lenzini S, Bargi R, Chung G, Shin JW. Механика матрикса и проницаемость воды регулируют транспорт внеклеточных пузырьков. Нат Нанотехнологии . 2020; 15 (3): 217–223.DOI: 10.1038 / s41565-020-0636-2

38. Юэ К., Трухильо-де-Сантьяго Дж., Альварес М.М., Тамайол А., Аннаби Н., Хадемхоссейни А. Синтез, свойства и биомедицинские применения желатинметакрилоиловых (GelMA) гидрогелей. Биоматериалы . 2015; 73: 254–271. DOI: 10.1016 / j.biomaterials.2015.08.045

39. Лю Т., Вэн В, Чжан И, Сунь Х, Ян Х.М. Применение желатинметакрилоиловых (GelMA) гидрогелей в тканевой инженерии с использованием микрофлюидных технологий. Молезлы .2020; 25 (22): 5305.

40. Юань З., Юань Х, Чжао Ю. и др. Инъекционные микросферы криогеля GelMA для модульной доставки клеток и потенциальной васкуляризованной регенерации костей. Малый . 2021; 17 (11): e2006596. DOI: 10.1002 / smll.202006596

41. Никол Дж., Коши С., Бэ Х., Хван С., Яманлар С., Хадемхоссейни А.Д. Микроинженерные клеточные гидрогели метакрилата желатина. Биоматериалы . 2010. 31 (21): 5536–5544. DOI: 10.1016 / j.biomaterials.2010.03.064

42.Buyuksungur S, Hasirci V, Hasirci NJ. Напечатанные на 3D-принтере гибридные костные конструкции из PCL и стволовых клеток пульпы зуба, загруженные GelMA. J Биомедицинская Материал Res A . 2021; 109: 2425–2437. DOI: 10.1002 / jbm.a.37235

43. Qi H, Ghodousi M, Du Y, et al. ДНК-направленная самосборка гидрогелей с контролируемой формой. Нац Коммуна . 2013; 4: 2275. DOI: 10.1038 / ncomms3275

44. Эбрахими М, Островидов С, Салехи С и др. Усиленное формирование скелетных мышц на микрофлюидных пряденых желатинметакрилоиловых (GelMA) волокнах с использованием поверхностного рисунка и обработки агрином. J Tissue Eng Regen Med . 2018; 12 (11): 2151–2163. DOI: 10.1002 / term.2738

45. Бусмина М.И. Определение распределения пор по размерам для мезопористых материалов и полимерных гелей с помощью измерений ДСК: термопорометрия. Полимер . 2000; 129: 607–615.

46. Соколова В., Людвиг А.К., Хорнунг С. и др. Характеристика экзосом, полученных из клеток человека, с помощью анализа отслеживания наночастиц и сканирующей электронной микроскопии. Colloids Surf B Биоинтерфейсы .2011; 87 (1): 146–150. DOI: 10.1016 / j.colsurfb.2011.05.013

47. Энрикес-Антунес Х., Кардосо РМС, Зонари А. и др. Кинетика доставки мелких внеклеточных пузырьков влияет на регенерацию кожной ткани. САУ Нано . 2019; 13 (8): 8694–8707. DOI: 10.1021 / acsnano.9b00376

48. Dong J, Wu Y, Zhang Y, Yu M, Tian W. Сравнение терапевтического эффекта аллогенных и ксеногенных малых внеклеточных пузырьков при восстановлении мягких тканей. Инт Дж. Наномед . 2020; 15: 6975–6991.DOI: 10.2147 / IJN.S269069

49. Cuvellier M, Ezan F, Oliveira H, et al. 3D-культура клеток HepaRG в GelMa и ее применение для биопечати многоклеточной модели печени. Биоматериалы . 2021; 269: 120611. DOI: 10.1016 / j.biomaterials.2020.120611

50. Ailhaud GJ. Жировая ткань как секреторный орган: от адипогенеза до метаболического синдрома. С Р Биол . 2006; 329 (8): 570–577; обсуждение 653–575. DOI: 10.1016 / j.crvi.2005.12.012

51. Флаэрти С., Грихалва А., Сюй Х, Аблес Е., Номани А., Ферранте А. Дж.Независимый от липазы путь высвобождения липидов и иммуномодуляции адипоцитами. Наука . 2019; 363 (6430): 989–993. DOI: 10.1126 / science.aaw2586

52. Dai M, Yu M, Zhang Y, Tian W. Экзосомоподобные везикулы, полученные из жировой ткани, обеспечивают биохимические сигналы для регенерации жировой ткани. Ткань Eng Часть A . 2017; 23 (21–22): 1221–1230. DOI: 10.1089 / ten.tea.2017.0045

53. Zhang Y, Yu M, Dai M, et al. miR-450a-5p в пузырьках, подобных экзосомам жировой ткани крысы, способствует адипогенной дифференцировке путем нацеливания на WISP2. J Cell Sci . 2017; 130 (6): 1158–1168. DOI: 10.1242 / jcs.197764

54. Хуанг Дж., Ван Л., Тиан В. Небольшие внеклеточные везикулы, полученные из жировой ткани, предотвращают связанный с бисфосфонатами остеонекроз челюсти, способствуя ангиогенезу. Инт Дж. Наномед . 2021; 16: 3161–3172. DOI: 10.2147 / IJN.S305361

55. Ли М., Лу Д., Чен Дж. И др. Глубокое погружение в протеом внеклеточных везикул слюны: сравнение ультрацентрифугирования и выделения преципитации на основе полимеров. Анал Бионанл Хим . 2021. 413 (2): 365–375. DOI: 10.1007 / s00216-020-03004-w

56. Куанг Й., Чжэн Х, Чжан Л. и др. Полученные из жировой ткани мезенхимальные стволовые клетки снижают аутофагию у мышей, перенесших инсульт, за счет переноса miR-25 во внеклеточные пузырьки. J Экстраклеточные везикулы . 2020; 10 (1): e12024. DOI: 10.1002 / jev2.12024

57. Crescitelli R, Lässer C, Lötvall JJ. Выделение и характеристика субпопуляций внеклеточных везикул из тканей. Нат Протокол . 2021. 16 (3): 1548–1580.DOI: 10.1038 / s41596-020-00466-1

58. Эль Баради КБИ, Ноух М., О’Брайен III Ф. и др. Сублимированные внеклеточные везикулы из стволовых клеток, полученных из жировой ткани, предотвращают повреждение мышечных клеток, вызванное гипоксией. Front Cell Dev Biol . 2020; 8: 181. DOI: 10.3389 / fcell.2020.00181

59. Хеблинг Дж., Бьянки Л., Бассо Ф. и др. Цитотоксичность диметилсульфоксида (ДМСО) при прямом контакте с одонтобластоподобными клетками. Вмятина . 2015; 31 (4): 399–405. DOI: 10.1016 / j.dental.2015.01.007

60. Ван М., Ван С., Чен М. и др. Эффективное заживление диабетических ран / реконструкция кожи на основе ангиогенеза за счет биоактивного антибактериального адгезива, экранирующего ультрафиолетовое излучение, нанодрессинга с высвобождением экзосом. САУ Нано . 2019; 13 (9): 10279–10293. DOI: 10.1021 / acsnano.9b03656

61. Хань Ц., Чжоу Дж., Лян Ц. и др. Экзосомы, полученные из мезенхимальных стволовых клеток пуповины человека, инкапсулированные в функциональные пептидные гидрогели, способствуют восстановлению сердца. Биоматер Науки .2019; 7 (7): 2920–2933. DOI: 10.1039 / C9BM00101H

62. Zhang C, Shang Y, Chen X, et al. Супрамолекулярные нановолокна, содержащие пептиды аргинин-глицин-аспартат (RGD), повышают терапевтическую эффективность внеклеточных везикул в восстановлении почек. САУ Нано . 2020; 14 (9): 12133–12147. DOI: 10.1021 / acsnano.0c05681

63. Ван Дж, Чен Д, Хо Э.А. Проблемы в разработке и создании систем доставки лекарств на основе экзосом. J Control Release . 2020; 329: 894–906.

64. Zheng K, Du D. Последние достижения биоматериалов на основе гидрогеля для лечения тканей межпозвонкового диска: обзор литературы. J Tissue Eng Regen Med . 2021. 15 (4): 299–321. DOI: 10.1002 / term.3172

65. Лю Х, Ян И, Ли И и др. Интеграция экзосом, полученных из стволовых клеток, с гидрогелевым клеем in situ в качестве многообещающего тканевого пластыря для регенерации суставного хряща. Наноразмер . 2017; 9 (13): 4430–4438. DOI: 10.1039 / C7NR00352H

66. Zhou Y, Liu S, Zhao M, et al.Инъекционный гидрогель из самособирающихся пептидных нановолокон, высвобождаемых из внеклеточных везикул, в качестве улучшенной бесклеточной терапии для регенерации тканей. J Control Release . 2019; 316: 93–104.