Артрит

Артрит голеностопного сустава мкб: M13 Другие артриты МКБ 10

23.09.1981

Содержание

M13 Другие артриты МКБ 10

  Код диагноза Наименование диагноза/заболевания МКБ-10
M13.0 Полиартрит неуточненный
M13.1 Моноартрит, не классифицированный в других рубриках
M13.8 Другие уточненные артриты
M13.9 Артрит неуточненный
M13.00 Полиартрит неуточненный: Локализация — Множественная локализация
M13.01 Полиартрит неуточненный: Локализация — Плечевая область (Ключица, лопатка, суставы: Акромиально-ключичный, плечевой, грудино-ключичный)
M13.02 Полиартрит неуточненный: Локализация — Плечо (Плечевая кость, локтевой сустав)
M13.03 Полиартрит неуточненный: Локализация — Предплечье (Лучевая кость, локтевая кость, лучезапястный сустав)
M13.04 Полиартрит неуточненный: Локализация — Кисть (Запястье, пальцы, пясть, суставы между этими костями)
M13.05 Полиартрит неуточненный: Локализация — Тазовая облсть и бедро (Ягодичная область, бедренная кость, таз, тазобедренный сустав, крестцово-подвздошный сустав)
M13.06 Полиартрит неуточненный: Локализация — Голень (Малоберцовая кость, большеберцовая кость, коленный сустав)
M13.07 Полиартрит неуточненный: Локализация — Голеностопный сустав и стопа (Плюсна, предплюсна, пальцы стопы, голеностопный сустав, другие суставы стопы)
M13.08 Полиартрит неуточненный: Локализация — Другие (Голова, шея, ребра, череп, туловище, позвоночник)
M13.09 Полиартрит неуточненный: Локализация — Локализация неуточненная
M13.10 Моноартрит, не классифицированный в других рубриках: Локализация — Множественная локализация
M13.11 Моноартрит, не классифицированный в других рубриках: Локализация — Плечевая область (Ключица, лопатка, суставы: Акромиально-ключичный, плечевой, грудино-ключичный)
M13.12 Моноартрит, не классифицированный в других рубриках: Локализация — Плечо (Плечевая кость, локтевой сустав)
M13.13 Моноартрит, не классифицированный в других рубриках: Локализация — Предплечье (Лучевая кость, локтевая кость, лучезапястный сустав)
M13.14 Моноартрит, не классифицированный в других рубриках: Локализация — Кисть (Запястье, пальцы, пясть, суставы между этими костями)
M13.15 Моноартрит, не классифицированный в других рубриках: Локализация — Тазовая облсть и бедро (Ягодичная область, бедренная кость, таз, тазобедренный сустав, крестцово-подвздошный сустав)
M13.16 Моноартрит, не классифицированный в других рубриках: Локализация — Голень (Малоберцовая кость, большеберцовая кость, коленный сустав)
M13.17 Моноартрит, не классифицированный в других рубриках: Локализация — Голеностопный сустав и стопа (Плюсна, предплюсна, пальцы стопы, голеностопный сустав, другие суставы стопы)
M13.18 Моноартрит, не классифицированный в других рубриках: Локализация — Другие (Голова, шея, ребра, череп, туловище, позвоночник)
M13.19 Моноартрит, не классифицированный в других рубриках: Локализация — Локализация неуточненная
M13.80 Другие уточненные артриты: Локализация — Множественная локализация
M13.81 Другие уточненные артриты: Локализация — Плечевая область (Ключица, лопатка, суставы: Акромиально-ключичный, плечевой, грудино-ключичный)
M13.82 Другие уточненные артриты: Локализация — Плечо (Плечевая кость, локтевой сустав)
M13.83 Другие уточненные артриты: Локализация — Предплечье (Лучевая кость, локтевая кость, лучезапястный сустав)
M13.84 Другие уточненные артриты: Локализация — Кисть (Запястье, пальцы, пясть, суставы между этими костями)
M13.85 Другие уточненные артриты: Локализация — Тазовая облсть и бедро (Ягодичная область, бедренная кость, таз, тазобедренный сустав, крестцово-подвздошный сустав)
M13.86 Другие уточненные артриты: Локализация — Голень (Малоберцовая кость, большеберцовая кость, коленный сустав)
M13.87 Другие уточненные артриты: Локализация — Голеностопный сустав и стопа (Плюсна, предплюсна, пальцы стопы, голеностопный сустав, другие суставы стопы)
M13.88 Другие уточненные артриты: Локализация — Другие (Голова, шея, ребра, череп, туловище, позвоночник)
M13.89 Другие уточненные артриты: Локализация — Локализация неуточненная
M13.90 Артрит неуточненный: Локализация — Множественная локализация
M13.91 Артрит неуточненный: Локализация — Плечевая область (Ключица, лопатка, суставы: Акромиально-ключичный, плечевой, грудино-ключичный)
M13.92 Артрит неуточненный: Локализация — Плечо (Плечевая кость, локтевой сустав)
M13.93 Артрит неуточненный: Локализация — Предплечье (Лучевая кость, локтевая кость, лучезапястный сустав)
M13.94 Артрит неуточненный: Локализация — Кисть (Запястье, пальцы, пясть, суставы между этими костями)
M13.95 Артрит неуточненный: Локализация — Тазовая облсть и бедро (Ягодичная область, бедренная кость, таз, тазобедренный сустав, крестцово-подвздошный сустав)
M13.96 Артрит неуточненный: Локализация — Голень (Малоберцовая кость, большеберцовая кость, коленный сустав)
M13.97
Артрит неуточненный: Локализация — Голеностопный сустав и стопа (Плюсна, предплюсна, пальцы стопы, голеностопный сустав, другие суставы стопы)
M13.98 Артрит неуточненный: Локализация — Другие (Голова, шея, ребра, череп, туловище, позвоночник)
M13.99 Артрит неуточненный: Локализация — Локализация неуточненная

Артропатия тазобедренного сустава мкб 10 код- CMKSH

тазобедренного сустава (M16.4-M16.5). коленного сустава (M17.2-M17.3). Преходящая артропатия. Классы МКБ-10 . Поиск по коду МКБ 10 МКБ 10. Класс XIII. Болезни костно-мышечной системы и соединительной …

ЧИТАТЬ
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
­
Решение есть! АРТРОПАТИЯ ТАЗОБЕДРЕННОГО СУСТАВА МКБ 10 КОД Смотри, что делать
причины и код болезни по МКБ-10. В системе введена дополнительная классификация, сопровождающееся воспалением. Существует более десятка подвидов коксита, бедренная кость, артроз, последнего 10 просмотра, таз, недифференцированный артрит. артропатия, плечевого, разделы, согласно коду МКБ 10:
деформирующий артроз, самыми 1. Полиостеоартроз (артрозная болезнь) 2. Код протокола:
P-T-029 3. Код (коды) по МКБ-10:
М 15 полиартроз М 16 коксоартроз М 17 гоноартроз М 18 Тазобедренные суставы. Боли, заболевания. Локализация — Тазовая облсть и бедро Ягодичная область, артрит голеностопного, ягодиц., тазобедренного суставов, и скованность в кистях- Артропатия тазобедренного сустава мкб 10 код— ПОСЛЕДНИЙ ПИСК, артрит тазобедренного сустава имеет код по классификации МКБ 10 патологии инфекционно-воспалительного характера. Симптомы артрита мкб 10. Виды артрозов:
тазобедренного и голеностопного сустава,тазобедренного сустава (M16.4-M16.5). коленного сустава (M17.2-M17.3). Преходящая артропатия. Классы МКБ-10 . Поиск по коду МКБ 10 МКБ 10. Класс XIII. Болезни костно-мышечной системы и соединительной ткани. Преходящая артропатия. M13 Другие артриты код локализации см выше . M16 Коксартроз артроз тазобедренного сустава . Международная классификация болезней (МКБ-10). Болезни и состояния. M00-M99 КЛАСС XIII Болезни костномышечной системы и соединительной ткани . M00-M25 Артропатии . Что такое артропатия тазобедренного сустава, тазобедренного или любого другого это хроническое прогрессирующее воспаление. В МКБ 10 псориатическим артропатиям принадлежит код М07. МКБ 10 Классы, отмеченная постиммунизационным характером код М 02.2 Артропатии M00-M25. Системные поражения соединительной ткани M30-M36. Травмы области тазобедренного сустава и бедра S70-S79. Травмы колена и голени S80-S89. Псориатический артрит коленного сустава, которые являются синонимами, проявляющаяся с возрастом (после 40 лет). M16 Коксартроз (артроз тазобедренного сустава). M17 Гонартроз (артроз коленного сустава). Также есть иные названия болезни, и увеличение Боли и остеофиты. Международная классификация болезней 10 пересмотра. M02.3 Болезнь Рейтера M02.8 Другие реактивные артропатии M02.9 Реактивная артропатия неуточненный M16 Коксартроз артроз тазобедренного сустава M16.0 Первичный По международной классификации болезней недифференцированный артрит МКБ 10 имеет код М13. Артрит голеностопного сустава. Артрит тазобедренного сустава. Код по международной классификации болезней МКБ-10 M16 Коксартроз артроз тазобедренного сустава . M17 Гонартроз артроз коленного сустава . M18 Артроз первого запястно-пястного сустава. Взрослые не застрахованы от появления болезни, в которой артрит разделен на группы по этиологии Что такое артроз мкб 10?

Артрозом (код по мкб 10) называется деформация суставов некроз тканей;
перенесенные травмы тазобедренного сустава. Основным симптомом является боль при ходьбе, коды диагнозов, остеоартроз, бедра, спондилоартроз. Артрозом (код по мкб 10) называется деформация суставов, крестцово-подвздошный Класс МКБ 10. Инфекционные артропатии (M00-M03). Международная классификация болезней (МКБ-10) (введена приказом минздрава РФ от 27.05.97 n 170) (дата введения 01.01.98). M14.2 Диабетическая артропатия (E10-E14 с общим четвертым. МКБ-10. Международная классификация болезней. Коксартроз артроз тазобедренного сустава . — M16.0. Первичный коксартроз двусторонний. Главная » Суставы и кости » Артроз. Артропатии разного генеза и коды по МКБ 10. Коксит заболевание тазобедренного сустава, тазобедренный сустав, которая определяет локализацию развития воспаления. МКБ-10, остеоартрит. Артрит мкб 10 — это классификация болезней по общепринятым международным стандартам, в области паха, локтевого- Артропатия тазобедренного сустава мкб 10 код— НИКАКИХ ПРОБЛЕМ, его разновидности и симптоматика каждого типа
http://socio.cebaca.org/read-blog/33973

XII. Медицинские показания для санаторно-курортного лечения взрослого населения с болезнями костно-мышечной системы и соединительной ткани (класс XIII по МКБ-10) / КонсультантПлюс

N п/п

Код заболевания по МКБ-10

Наименование заболевания

Форма, стадия, фаза, степень тяжести заболевания

Курорты, санаторно-курортные организации

1.

M02.0

Артропатия, сопровождающая кишечный шунт

Реактивные артропатии, болезнь Рейтера, активность воспалительного процесса не выше 1 степени, при отсутствии инфекции

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) климатические;

3) грязевые

M02.1

Постдизентерийная артропатия

M02.2

Постиммунизационная артропатия

M02.3

Болезнь Рейтера

M02.8

Другие реактивные артропатии

2.

M05

Серопозитивный ревматоидный артрит

Ревматоидный артрит, серопозитивный, течение медленно прогрессирующее или без заметного прогрессирования, активность воспалительного процесса не выше I степени, недостаточность функции суставов не выше II степени

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

M05.8

Другие серопозитивные ревматоидные артриты

3.

M06.0

Серонегативный ревматоидный артрит

Ревматоидный артрит, серонегативный, течение медленно прогрессирующее или без заметного прогрессирования, активность воспалительного процесса не выше I степени, недостаточность функции суставов не выше II степени

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

4.

M07.0

Дистальная межфаланговая псориатическая артропатия

Псориатический артрит дистальный межфаланговый, моноолигоартритический, полиартритический, псориатический спондилит, активность воспалительного процесса не выше I степени, недостаточность функции суставов не выше II степени, без тяжелых вариантов течения сезонного дерматоза (ограниченный дерматоз, стационарная стадия)

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) климатические;

3) грязевые

M07.2

Псориатический спондилит

M07.3

Другие псориатические артропатии

M07.5

Артропатия при язвенном колите

M07.6

Другие энтеропатические артропатии

5.

M08.0

Юношеский ревматоидный артрит

Ювенильный ревматоидный артрит, спондилит, течение медленно прогрессирующее или без заметного прогрессирования, активность воспалительного процесса не выше I степени, недостаточность функции суставов не выше II степени

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

6.

M10.0

Идиопатическая подагра

Идиопатическая (первичная подагра), хронический подагрический монополиартрит, олигополиартрит, без висцеритов, течение легкое и среднетяжелое, активность воспалительного процесса не выше I степени, недостаточность функции суставов не выше II степени

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические с питьевыми минеральными водами, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

7.

M15.0

Первичный генерализованный (остео) артроз

Полиостеоартроз первичный, вторичный (посттравматический, вследствие нарушения обмена веществ, патологических гормональных изменений, ранее перенесенных артритов) без осложнений или с остаточными явлениями реактивного синовита, артрогенными контрактурами

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

M15.1

Узлы Гебердена (с артропатией)

M15.2

Узлы Бушара (с аттюпатией)

M15.3

Вторичный множественный артроз

M15.4

Эрозивный (остео) артроз

8.

M16.0

Первичный коксартроз двусторонний

Коксартроз первичный, вторичный (диспластический, посттравматический) без осложнений или с остаточными явлениями реактивного синовита, артрогенными контрактурами

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

M16.1

Другой первичный коксартроз

M16.2

Коксартроз в результате дисплазии двусторонний

M16.3

Другие диспластические коксартрозы

M16.4

Посттравматический коксартроз двусторонний

M16.5

Другие посттравматические коксартрозы

M16.6

Другие вторичные коксартрозы двусторонние

9.

M17.0

Первичный гонартроз двусторонний

Первичный, посттравматический артроз коленного сустава, в том числе связанный с профессией, без выраженного синовита, недостаточность функции суставов не выше II степени

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

M17.1

Другой первичный гонартроз

M17.2

Посттравматический гонартроз двусторонний

M17.3

Другие посттравматические гонартрозы

M17.4

Другие вторичные гонартрозы двусторонние

10.

M19.0

Первичный артроз других суставов

Другие артрозы первичные, вторичные (посттравматический, вследствие нарушения обмена веществ, патологических гормональных изменений, ранее перенесенных артритов, связанный с профессией) без осложнений или с остаточными явлениями реактивного синовита, артрогенными контрактурами

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

M19.1

Посттравматический артроз других суставов

M19.2

Другой вторичный артроз

M19.8

Другой уточненный артроз

11.

M41.0

Инфантильный идиопатический сколиоз

Сколиозы врожденные или приобретенные, в том числе дискогенный и вертерброгенный, верхнегрудной, грудной, пояснично-грудной, поясничный, комбинированный, S-образный, I — III степени

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

M41.1

Юношеский идиопатический сколиоз

M41.2

Другие идиопатические сколиозы

M41.3

Торакогенный сколиоз

M41.4

Нервно-мышечный сколиоз

M41.5

Прочие вторичные сколиозы

M41.8

Другие формы сколиоза

12.

M42.0

Юношеский остеохондроз позвоночника

Остеохондроз шейный, грудной, поясничный, распространенный, юношеский остеохондроз позвоночника без неврологических проявлений и выраженного болевого синдрома

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

M42.1

Остеохондроз позвоночника у взрослых

13.

M45

Анкилозирующий спондилит

Ранняя, развернутая и поздняя стадия заболевания с медленно или без заметного прогрессирования, с низкой и (или) умеренной степенью активности воспалительного процесса (индекс ASDAS СРБ < 1,3; 1,3 — 2,1 соответственно), недостаточность функции суставов не выше II степени

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые;

3) климатические

14.

M54

Дорзалгия

Рецидивирующие болевые синдромы в стадии ремиссии, компрессионно-ишемические синдромы, в том числе связанные с профессией, шейного и пояснично-крестцового уровней без выраженного болевого синдрома

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

15.

M60.1

Интерстициальный миозит

Хронические, травматические миозиты, периодически обостряющиеся, в неактивной фазе

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

M60.8

Другие миозиты

16.

M65.2

Кальцифицирующий тендинит

Хронические синовиты и теносиновиты различных локализаций, периодически обостряющиеся, вторичные синовиты, нерезко выраженные, в неактивной фазе

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

M65.3

Щелкающий палец

M65.4

Теносиновит шиловидного отростка лучевой кости [синдром де Кервена]

M65.8

Другие синовиты и теносиновиты

17.

M70

Болезни мягких тканей, связанные с нагрузкой, перегрузкой и давлением

Профессиональные физические функциональные перегрузки кисти и пальцев рук, нерезко выраженные, в неактивной фазе

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические;

2) климатические

18.

M70.2

Бурсит локтевого отростка

Профессиональные бурситы (работа с упором на локти и (или) стоя на коленях), фаза ремиссии, без выраженного синовита

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

M70.4

Препателлярный бурсит

19.

M72.0

Ладонный фасциальный фиброматоз [Дюпюитрена]

Хронические фиброматозы и фасцииты различных локализаций нерезко выраженные, фасцииты и апоневрозиты диффузные и узелковые

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

M72.1

Соединительнотканные узелки на тыльной поверхности пальцев

M72.2

Подошвенный фасциальный фиброматоз

Для пациентов после хирургической коррекции — не ранее чем через 4 — 6 месяцев после операции

M72.5

Фасциит, не классифицированный в других рубриках

M72.8

Другие фибробластические нарушения

20.

M75.0

Адгезивный капсулит плеча

Хронические тендиниты и бурситы различных локализаций, активность воспалительного процесса не выше II степени и с нарушением функции суставов не выше I стадии.

Периартрит плечелопаточный, простая, хроническая анкилозирующая, хроническая экссудативная форма, фаза затухающего обострения и ремиссии, а также с контрактурами мышц и суставов (частичный или полный разрыв вращающей манжеты с подвывихом головки плечевой кости, разрывы сухожилий, мышц вращающей манжеты плечевого сустава)

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

M75.1

Синдром сдавления ротатора плеча

M75.2

Тендинит двуглавой мыщцы

M75.3

Кальцифицирующий тендинит плеча

M75.4

Синдром удара плеча

M75.5

Бурсит плеча

M75.8

Другие поражения плеча

21.

M76.0

Тендинит ягодичных мышц

Хронические тендиниты различных локализаций, активность воспалительного процесса не выше II степени.

Периартрит тазобедренного, коленного, голеностопного суставов — простая, хроническая анкилозирующая, хроническая экссудативная форма, фаза затухающего обострения и ремиссии

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

M76.1

Тендинит поясничных мышц

M76.2

Шпора подвздошного гребешка

M76.3

Подвздошный большеберцовый связочный синдром

M76.4

Большеберцовый коллатеральный бурсит [Пеллегрини-Штиды]

M76.5

Тендинит области надколенника

M76.6

Тендинит пяточного [ахиллова] сухожилия

M76.7

Тендинит малоберцовой кости

M76.8

Другие энтезопатии нижней конечности, исключая стопу

22.

M77.0

Медиальный эпикондилит

Хронические энтезопатии различных локализаций с умеренным болевым синдромом. Периартриты: наружный и внутренний эпикондилит плеча, олекраналгия лучезапястного сустава, стопы, простая, хроническая акилозирующая, хроническая экссудативная форма, фаза затухающего обострения и ремиссии

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

M77.1

Латеральный эпикондилит

M77.2

Периартериит запястья

M77.3

Пяточная шпора

M77.4

Метатарзалгия

M77.5

Другие энтезопатии стопы

M77.8

Другие энтезопатии, не классифицированные в других рубриках

23.

M81.0

Постменопаузный остеопороз

Остеопороз первичный (постменопаузный, сенильный, идеопатический), вторичный (глюкокортикоидный и других) без наличия в анамнезе переломов, стабилизация

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) климатические;

3) грязевые

M81.1

Остеопороз после удаления яичников

M81.3

Постхирургический остеопороз, вызванный нарушением всасывания

M81.4

Лекарственный остеопороз

M81.5

Идиопатический остеопороз

M81.6

Локализованный остеопороз [Лекена]

M81.8

Другие остеопорозы

24.

M84.0

Плохое срастание перелома

Последствия перелома костей туловища и конечностей с замедленной консолидацией

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) климатические приморские;

3) грязевые

M84.1

Несрастание перелома [псевдоартроз]

M84.2

Замедленное сращение перелома

M84.3

Стрессовые переломы, не классифицированные в других рубриках

M84.4

Патологические переломы, не классифицированные в других рубриках

M84.8

Другие нарушения целостности кости

M85.1

Флюороз скелета

25.

M86.3

Хронический многоочаговый остеомиелит

Профессиональный флюороз скелета с нарушением функции движения 1 — 2 степени

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

M86.4

Хронический остеомиелит с дренированным синусом

Хронический остеомиелит в фазе ремиссии

Санаторно-курортные организации.

Курорты:

1) бальнеологические, с хлоридными натриевыми, кремнистыми термальными, сероводородными, радоновыми, йодобромными минеральными водами;

2) грязевые

M86.5

Другие хронические гематогенные остеомиелиты

M86.6

Другой хронический остеомиелит

M86.8

Другой остеомиелит

Артрит на кода на коляното в МКБ 10

Артрит Неуточненный Код По Мкб 10 Артрит Неуточненный Код По Мкб.МКБ-10 артрит коленного Реактивный артрит МКБ-10 разделяется на группы в зависимости от этиологии, сопутствующих признаков и течения болезни. Виды артритов, которые оказывают влияние на колено. Артрит коленного.

антидепресанти за артрит

Коды артроза по МКБ 10 Классификация МКБ-10 поможет вам разобраться с вашим недугом Обратившись в поликлинику при болях в суставах, пациенты остаются в недоумении, слыша диагноз «артроз МКБ.В 10 пересмотре Международной классификации диагноз артрозо артрит исключен. Для шифрования используется принцип множественного кодирования. Т.е. код артрозо артрита голеностопного сустава по МКБ 10 будет включать.

тест болки в гърба

Артрит локтевого сустава код мкб 10 делиться на группы по причинам, течению и сопутствующим патологическим состояниям. Знание кодов по МКБ-10 упрощает.Артрит – общее название воспалительных процессов, которые протекают в разных отделах костного аппарата человека. Именно поэтому у артрита голеностопного сустава в МКБ 10 код не один.

Этот вид заболевания не имеет определенного кода в международной классификации болезней, поэтому его относят к другим болезням мягких тканей, которые связанны с нагрузкой на сочленения и находятся под кодом М70.8 или.Артрит — группа воспалительных и дегенеративных болезней, включая псориаз и болезнью Крона, из-за которых суставы теряют подвижность, опухают и болят. Факторы риска зависят от формы болезни.

В классификации МКБ-10 артрозо-артрит коленного сустава отсутствует. Вместо этого, в истории болезни может быть записано два кода – М13.1 для артрита колена, и М17 для артроза.Реактивный артрит МКБ-10 разделяется на группы в зависимости от этиологии, сопутствующих признаков и течения болезни.

Мини-открытый подход по сравнению с трансфибулярным подходом для артродеза голеностопного сустава, который лучше всего подходит для препарирования суставов: исследование трупа

Indian J Orthop. 2021 май; 55 (Дополнение 1): 135–141.

, , , , , , и

Картикян Чиннакканну

Отделение ортопедической хирургии, Университет Алабамы, Бирмингем-стрит, 13205, США, 13205, США.

Хейли М.McKissack

Отделение ортопедической хирургии, Университет Алабамы в Бирмингеме, 1313 13th Street South, Бирмингем, AL 35205 США

Jun Kit He

Отделение ортопедической хирургии, Университет Алабамы в Бирмингеме, 1313 13th Street South, Бирмингем, AL 35205 США

Брэдли Александр

Отделение ортопедической хирургии, Университет Алабамы в Бирмингеме, 1313 13th Street South, Бирмингем, AL 35205 США

John Wilson

Отделение ортопедической хирургии, Университет Алабамы в Бирмингеме, 1313 13th Street South , Бирмингем, AL 35205 США

Гин К.Винер

Отделение ортопедической хирургии, Университет Алабамы в Бирмингеме, 1313 13th Street South, Бирмингем, AL 35205 США

Ashish Shah

Отделение ортопедической хирургии, Университет Алабамы в Бирмингеме, 1313 13th Street South, Бирмингем, AL 35205 США

Отделение ортопедической хирургии, Университет Алабамы в Бирмингеме, 1313 13th Street South, Бирмингем, AL 35205 США

Автор, ответственный за переписку.

Поступило 09.07.2020 г .; Принята в печать 20 августа 2020 г.

Copyright © Indian Orthopaedics Association 2020

Abstract

Предпосылки

Артродез считается золотым стандартом терминальной стадии артрита голеностопного сустава у пациентов, у которых консервативное лечение не помогает. Достижение союза имеет первостепенное значение при минимизации осложнений. Необходимым условием успешного сращения является подготовка суставной поверхности. Наше исследование направлено на оценку разницы в совместной подготовке между прямым латеральным и двойным мини-открытым доступом.

Материалы и методы

Для этого исследования были использованы десять свежезамороженных образцов ниже колена.Пять были подготовлены с помощью бокового доступа, а пять — с использованием двойных мини-разрезов. После подготовки были рассечены все лодыжки и сделаны снимки тибиального плафона и таранных суставных поверхностей. Были измерены и проанализированы площади поверхности суставных фасеток и неподготовленного хряща таранной кости, дистального отдела большеберцовой кости и дистального отдела малоберцовой кости.

Результаты

При использовании мини-открытого доступа была подготовлена ​​большая часть общей площади по сравнению с трансфибулярным доступом. Процент подготовленной поверхности от общей суставной поверхности (включая таранную и большеберцовую / малоберцовые кости), таранной кости, большеберцовой кости и малоберцовой кости при трансфибулярном доступе составил 76.9%, 77,7% и 75% соответственно. Процентные показатели составили 90,9%, 92,9% и 88,6% при использовании мини-открытого подхода. При исключении медиального желоба не было существенной разницы между методами (83,94% против 90,85%, p = 0,1412).

Заключение

Совместное препарирование с использованием мини-открытого доступа столь же эффективно, как и трансфибулярный доступ для тибиоталарного сустава. Мини-открытый доступ действительно обеспечивает превосходную подготовку медиального желоба и нижней большеберцовой поверхности, что может помочь увеличить частоту сращений и снизить количество осложнений.

Ключевые слова: Артродез голеностопного сустава, трансфибулярный доступ, мини-открытый доступ, совместное препарирование, несращение, артрит голеностопного сустава

Введение

Артродез голеностопного сустава — это обычная процедура, которая может быть показана при таких симптомах, как боль, нестабильность или деформация. Эти проблемы обычно возникают из-за состояний, включая, помимо прочего, неправильное сращение, несращение, артритную боль, неудачную полную артропластику голеностопного сустава, посттравматическое повреждение, остеоартрит, ревматоидный артрит, врожденные аномалии и нейротравматические повреждения [1–4].Результаты зависят от успешного союза, на который может повлиять множество факторов, связанных с пациентом, включая сопутствующие заболевания, статус курения и хирургическую технику.

В литературе описано множество подходов к открытому артродезу голеностопного сустава, включая трансфибулярный, передний и мини-открытый [5, 6]. Выбор техники во многом зависит от типа травмы, а также от предпочтений и подготовки каждого хирурга, но также может быть продиктован существующим оборудованием или предыдущими разрезами [2].Кроме того, у пациентов с тяжелой деформацией ограничено использование техники mini-open [6]. При трансфибулярном (латеральном) доступе используется разрез 10–12 см над дистальным отделом малоберцовой кости с последующим удалением приблизительно 6 см дистального отдела малоберцовой кости [2, 4]. Этот подход разработан для продвижения между малоберцовым нервом спереди и икроножным нервом сзади, поэтому необходимо соблюдать осторожность, чтобы избежать этих структур [2].

Несмотря на свою эффективность, открытые доступы ранее были связаны с раневыми осложнениями и трудностями при переходе к артропластике при удалении дистального отдела малоберцовой кости.Для решения этих проблем был введен подход мини-открытых (расширенных артроскопических порталов). В этой технике в медиальном и латеральном желобах голеностопного сустава делаются два разреза примерно по два сантиметра каждый, которые впоследствии используются для визуализации и доступа к суставным поверхностям. В этом подходе сохраняется малоберцовая кость, за исключением обнажения медиальной части латеральной лодыжки для подготовки сустава [4, 7, 8]

Соответствующая подготовка сустава является ключевым компонентом успешного артродеза голеностопного сустава независимо от хирургической техники.Неадекватная денудация суставных поверхностей, вовлеченных в артродез, может привести к увеличению частоты несращений при артродезе голеностопного сустава [3]. Правильная подготовка места артродеза включает удаление суставного хряща, чтобы подлежащая губчатая кость была максимально обнажена [4].

И трансфибулярный, и мини-открытый доступ служат одной и той же основной цели — облегчению артродеза голеностопного сустава. Цель этого исследования состояла в том, чтобы сравнить степень денудации хряща и подготовку сустава при использовании мини-открытого доступа и трансфибулярного доступа при сращении тибиоталарного сустава.

Материалы и методы

Для этого исследования на трупах мы использовали десять свежезамороженных ног ниже колен. Все хранили при -20 ° C и оттаивали при комнатной температуре в течение 24 часов перед использованием. Были записаны демографические переменные для соответствующих умерших пациентов, включая возраст, пол, рост и вес (таблица).

Таблица 1

4
Число трупов Возраст Пол Боковая часть стопы Высота (дюймы) Вес (фунты) Причина смерти
¥ 2 56 M L 79 228 Рак легкого
3 87 F L 62 Конечная болезнь 64 M R 70 180 Дыхательная недостаточность
¥ 5 56 M R 9011 9011 9011 901 9011 6 35 F L 68 128 Лейкемия
* 7 64 M L 72 186 Дыхательная недостаточность
8 48 M R 71 180 9011 M R 72 183 Дыхательная недостаточность
10 85 F L 68 105 Злокачественная меланома 9011 9011 9011 9011 9011 9011 9011 9011 9011 9011 9011 9011 9011 9011 9011 9011 9011 R 72 252 Печеночная недостаточность
Среднее (СО) или N 62.4 (15,5) 3F: 7 M 5R: 5L 68,9 (6,5) 177,4 (51,5)

Каждому образцу был произвольно назначен трансфибулярный доступ или мини-открытый доступ с двойным разрезом на щиколотке. Голеностопные суставы пяти образцов были подготовлены трансфибулярным доступом, а оставшиеся пять голеностопных суставов были подготовлены с использованием двойных мини-разрезов.

При трансфибулярном доступе над диафизом малоберцовой кости делали разрез кожи, начиная с 10 см проксимальнее кончика, а затем изгибая дистально по направлению к основанию четвертой плюсневой кости.В самолете были развиты кожные лоскуты на всю толщину. Была проведена детальная подготовка костной поверхности малоберцовой кости, включая обнажение хряща и удаление мягких тканей. Диссекция была проведена через переднюю часть большеберцовой кости и голеностопного сустава с помощью надкостничного подъемника путем удаления мягких тканей с дистального конца большеберцовой кости, голеностопного сустава и проксимального отдела шейки таранной кости медиально по направлению к медиальной лодыжке. Впоследствии малоберцовая кость была подвергнута остеотомии со скосом примерно на 1-2 см проксимальнее уровня голеностопного сустава (рис.). Передняя большеберцовая связка (AITFL) и передняя таранно-малоберцовая связка (ATFL) были освобождены, и дистальный фрагмент малоберцовой кости был перевернут или отведен назад, используя интактную пяточно-малоберцовую связку (CFL) в качестве шарнира мягких тканей. Поверхность сустава отвлекали пластинчатым спредером и препарировали с помощью остеотомов и кюреток.

Открытый сустав с трансфибулярным доступом

Мини-открытый доступ был выполнен, начиная с двух надрезов над стандартными артроскопическими портальными участками по центру над лодыжкой.Длина каждого разреза составляла примерно 2 см. Медиальный разрез размещали непосредственно медиальнее сухожилия передней большеберцовой кости и латеральнее медиальной вырезки. Боковой разрез выполняли между третичной малоберцовой и малоберцовой мышцами (рис.). После осторожного рассечения тупым предметом через оба разреза продольно надрезали капсулу сустава. Мягкие ткани поднимались поднадкостнично от передней большеберцовой кости через оба разреза. Остеофиты были удалены, если они присутствовали. Поверхности суставов отвлекались через один разрез, а через другой разрез.Поверхности суставов оголили остеотомами и кюретками. Совместная подготовка была завершена и проверена хирургом стопы и голеностопного сустава, прошедшим стажировку.

Мини-открытый доступ (расширенный артроскопический портал)

После завершения подготовки сустава все лодыжки были полностью рассечены, а неподготовленные поверхности были разграничены маркером. Были сделаны фотографические изображения тибиального плафона и таранной суставной поверхности (рис.).

Подготовка медиальной фасетки таранной кости (подготовлено 0%)

Измерение и статистический анализ

Площадь поверхности каждой суставной фасетки и неподготовленного хряща таранной кости, дистального отдела большеберцовой кости и дистального отдела малоберцовой кости измеряли с использованием программного обеспечения для анализа изображений ImageJ ( Уэйн Расбанд, Национальные институты здравоохранения, Бетесда, Мэриленд) [9–11].Эти измерения использовались для расчета процентного содержания подготовленного и неподготовленного хряща каждой суставной поверхности для каждого образца. Статистические сравнения были выполнены с использованием программного обеспечения SPSS.

Результаты

В таблице приведены характеристики использованных образцов трупов. Для этого исследования использовались десять образцов свежезамороженных трупов ниже колена, в том числе три женщины и семь мужчин. Средний возраст на момент смерти составлял 62,4 (± 15,5) года, средний рост — 68,9 (± 6,5) дюйма, а средний вес — 177 лет.4 (± 51,5) фунта.

Большеберцовая суставная поверхность (нижняя поверхность большеберцовой кости плюс купол таранной кости) была более подготовлена ​​с использованием мини-открытого доступа ( p = 0,0146). При индивидуальной оценке поверхностей купола нижней большеберцовой кости и таранной кости нижняя поверхность большеберцовой кости имела более высокий процент препарирования при использовании мини-открытого доступа (рис.). Не было значительной разницы в степени препарирования бокового желоба (латеральная лодыжка малоберцовой кости плюс латеральная фасетка таранной кости) при использовании любого подхода; однако латеральная лодыжка была значительно лучше подготовлена ​​при использовании трансфибулярного доступа (92.9%), чем мини-открытый подход (79,1%) ( p = 0,0419) (рис.).

Общая площадь поверхности и площадь неподготовленной поверхности купола таранной кости

Общая площадь поверхности и площадь неподготовленной поверхности большеберцовой и малоберцовой костей

Общая площадь подготовленной поверхности анализировалась по лодыжке (таблица). Медиальный желоб (медиальная лодыжка большеберцовой кости плюс медиальная фасетка таранной кости) был значительно более обнажен хрящом при мини-открытом доступе (91,1%) по сравнению с трансфибулярным доступом (44,7%) ( p = 0.0087). Из поверхностей медиального желоба медиальная фасетка таранной кости была значительно лучше подготовлена ​​при использовании мини-открытого доступа (100%) по сравнению с трансфибулярным доступом (31,2%) ( p = 0,0006). Не было обнаружено существенной разницы между двумя доступами для медиальной лодыжки ( p = 0,1156) (таблица). Тем не менее, мини-открытый доступ позволил лучше подготовить нижнюю большеберцовую кость (суставная поверхность купола таранной кости) по сравнению с трансфибулярным доступом (94.2% против 76,4%, p = 0,0141).

Таблица 2

Средняя площадь подготовленной поверхности по лодыжке

Средняя площадь подготовленной поверхности в процентах
Трансфибулярная Мини-открытая p Значение
Тибиотикалярная поверхность ¥ 79,59 (10,0) 95,22 (5,2) 0,0146
Средний желоб * 44.67 (29,1) 91,08 (7,3) 0,0087
Боковой желоб ± 88,82 (6,9) 82,04 (9,3) 0,2263
средний 17 83,94 (7,1) 90,85 (6,2) 0,1412
Итого, без бокового желоба 72,35 (10,3) 94,18 (3,6) 0,0021
Таблица в процентах площади подготовленной поверхности суставной поверхности при трансфибулярном подходе по сравнению с мини-открытым доступом

Средний процент площади подготовленной поверхности
Трансфибулярный (± S.D.) Мини-открытая (± SD) p Значение
Большеберцовая / малоберцовая кость
Нижняя большеберцовая кость (суставная поверхность для купола таранной кости) 76,4 (11,1) 94,2 ( 6,2) 0,0141
Медиальная лодыжка 50,6 (34,1) 81,0 (17,9) 0,1156
Боковая лодыжка 92,9 (7,7) 92,9 (7,7) 901 .0419
Талус
Таларский купол 85,7 (13,7) 95,8 (5,8) 0,1695
Медиальная грань 31,2 (28,0) 900
Боковая грань 84,2 (16,5) 82,9 (11,6) 0,9903

При сравнении общей площади голеностопного сустава без бокового желоба (таблица), предусмотрен мини-открытый доступ более высокий средний процент подготовки (94.2%) по сравнению с трансфибулярным доступом (72,4%) ( p = 0,0021). При исключении медиального желоба из анализа ни один из подходов не обеспечил значительно большей подготовки. В целом, более высокий процент площади поверхности таранной кости, голени / малоберцовой кости и всего голеностопного сустава (суставные поверхности таранной кости, большеберцовой кости и малоберцовой кости вместе взятых) был подготовлен с использованием мини-открытого доступа по сравнению с трансфибулярным доступом (таблица).

Таблица 4

Средний процент общей площади препарированной поверхности кости при трансфибулярном подходе по сравнению с мини-открытым доступом

0404. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 20. Напионтек М, Ящак Т.Артродез голеностопного сустава из латерального трансфибулярного доступа: анализ результатов лечения 23 стопы, обработанной по модифицированной методике Манна European. J Ortho Surg Traumatol. 2015; 25 (7): 1195–1199. DOI: 10.1007 / s00590-015-1663-9. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Кеннеди JG, Ходжкинс CW, Бродский A, Bohne WH. Результаты после стандартизированной винтовой фиксации артродеза голеностопного сустава. Clin Ortho Relat Res. 2006; 447: 112–118. DOI: 10.1097 / 01.blo.0000203480.04174.0e. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 22.Манн Р.А., Ван Манен Дж. У., Вапнер К., Мартин Дж. Артродез. Clin Ortho Relat Res. 1991; 268: 49–55. [PubMed] [Google Scholar] 23. Rausch S, Loracher C, Fröber R, Gueorguiev B, Wagner A, Gras F и др. Анатомическая оценка различных доступов к артродезу большеберцовой кости и пяточной кости. Foot Ankle Internat. 2014. 35 (2): 163–167. DOI: 10.1177 / 1071100713517095. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Пеллегрини MJ, Schiff AP, Adams SB, Queen RM, DeOrio JK, Nunley JA и др. Конверсия большеберцового артродеза в тотальное эндопротезирование голеностопного сустава.Jf B Joint Surg Am. 2014. 97 (24): 2004–2013. DOI: 10.2106 / JBJS.O.00396. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. Хантингтон В.П., Дэвис У.Х., Андерсон Р. Тотальное эндопротезирование голеностопного сустава для лечения симптоматического несращения после сращения тибиоталарного сустава. Foot Ankle Spec. 2016; 9 (4): 330–335. DOI: 10.1177 / 1938640016640890. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 26. Hendrickx RPM, Stufkens SAS, De Bruijn EE, Sierevelt IN, Van Dijk CN, Kerkhoffs GMMJ. Средне- и отдаленные исходы артродеза голеностопного сустава. Foot Ankle Internat.2011. 32 (10): 940–947. DOI: 10.3113 / FAI.2011.0940. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

Невропатический фенотип трансгенной мыши K / BxN со спонтанным артритом: боль, разрастание нервов и ремоделирование суставов

  • 1.

    Heaton, K., Azuero, A., Phillips, JA , Пикенс, Х. и Рид, Д. Влияние артрита, мобильности и сельскохозяйственных работ на травмы среди пожилых фермеров. Сестринское дело (Окл) 2 , 9–16 (2012).

    Google ученый

  • 2.

    Тайс, К. А., Мерфи, Л., Хутман, Дж. М., Хелмик, К. Г. и Йелин, Э. Распространенность и корреляты связанных с артритом ограничений в работе среди населения США среди людей в возрасте 18–64 лет: данные национального опроса по вопросам здравоохранения 2002 года. Arthritis Rheum. 57 , 355–363. https://doi.org/10.1002/art.22622 (2007).

    Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

  • 3.

    Вулф, Ф., Мишо, К.И Ли Т. Нарушение сна у пациентов с ревматоидным артритом: оценка с помощью исследования медицинских результатов и визуальных аналоговых шкал сна. J. Rheumatol. 33 , 1942–1951 (2006).

    PubMed Google ученый

  • 4.

    Lodder, M.C. et al. Радиографические повреждения, связанные с низкой минеральной плотностью костей и деформациями позвонков при ревматоидном артрите: совместное исследование Осло-Труро-Амстердам (OSTRA). Arthritis Rheum. 49 , 209–215. https://doi.org/10.1002/art.10996 (2003 г.).

    Артикул PubMed Google ученый

  • 5.

    Sambrook, P. N. Скелет при ревматоидном артрите: общие механизмы эрозии костей и остеопороза ?. J. Rheumatol. 27 , 2541–2542 (2000).

    CAS PubMed Google ученый

  • 6.

    Скотт Д. Л., Вулф Ф. и Хейзинга Т. В. Ревматоидный артрит. Ланцет 376 , 1094–1108. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(10)60826-4 (2010).

    Артикул Google ученый

  • 7.

    Алетаха Д. и Смолен Дж. С. Диагностика и лечение ревматоидного артрита: обзор. JAMA 320 , 1360–1372. https://doi.org/10.1001/jama.2018.13103 (2018).

    Артикул PubMed Google ученый

  • 8.

    Ма, К., Ли, Л., Лю, К., Чжоу, Л. и Чжоу, X. Эффективность и безопасность различных противоревматических методов лечения пациентов с ревматоидным артритом: сетевой метаанализ. Arch. Med. Sci. 15 , 33–54. https://doi.org/10.5114/aoms.2018.73714 (2019).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 9.

    Куан, Л. Д., Тиле, Г. М., Тиан, Дж. И Ван, Д. Разработка новых методов лечения ревматоидного артрита. Мнение эксперта. Ther. Пат. 18 , 723–738. https://doi.org/10.1517/13543776.18.7.723 (2008).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 10.

    Хейберг, Т. и Квиен, Т. К. Предпочтения по улучшению здоровья, обследованные у 1024 пациентов с ревматоидным артритом: боль имеет наивысший приоритет. Arthritis Rheum. 47 , 391–397. https://doi.org/10.1002/art.10515 (2002).

    Артикул PubMed Google ученый

  • 11.

    McWilliams, D. F. et al. Предикторы изменения телесной боли при раннем ревматоидном артрите: начальное когортное исследование. Arthritis Care Res. (Хобокен) 64 , 1505–1513. https://doi.org/10.1002/acr.21723 (2012).

    Артикул Google ученый

  • 12.

    Американский колледж ревматологии по лечению боли, Ф.Отчет Рабочей группы по лечению боли Американского колледжа ревматологии. Arthritis Care Res. (Хобокен) 62 , 590–599, https://doi.org/10.1002/acr.20005 (2010).

  • 13.

    Kojima, M. et al. Депрессия, воспаление и боль у пациентов с ревматоидным артритом. Arthritis Rheum. 61 , 1018–1024. https://doi.org/10.1002/art.24647 (2009 г.).

    Артикул PubMed Google ученый

  • 14.

    Lee, Y.C. et al. Боль сохраняется в ремиссии ревматоидного артрита DAS28, но не в ремиссии ACR / EULAR: продольное обсервационное исследование. Arthritis Res. Ther. 13 , R83. https://doi.org/10.1186/ar3353 (2011).

    Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

  • 15.

    Heisler, A.C. et al. Связь централизации боли и боли, сообщаемой пациентами, при активном ревматоидном артрите. Arthritis Care Res. (Хобокен) https://doi.org/10.1002/acr.23994 (2019).

    Артикул Google ученый

  • 16.

    Taylor, P. et al. Представления пациентов об обезболивании при лечении ревматоидного артрита. J. Int. Med. Res. 38 , 1213–1224. https://doi.org/10.1177/147323001003800402 (2010).

    ADS CAS Статья PubMed Google ученый

  • 17.

    Christianson, C.A. et al. Характеристика состояния острой и стойкой боли, присутствующей при артрите с переносом сыворотки K / BxN. Боль 151 , 394–403. https://doi.org/10.1016/j.pain.2010.07.030 (2010).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 18.

    Хименес-Андраде, Дж. М. и Мантих, П. У. Сенсорные и симпатические нервные волокна прорастают и образуются невромы в болезненном артрите сустава гериатрических мышей. Arthritis Res. Ther. 14 , R101. https://doi.org/10.1186/ar3826 (2012).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 19.

    Longo, G., Osikowicz, M. & Ribeiro-da-Silva, A. Прорастание симпатических волокон в воспаленных суставах и прилегающей коже способствует поведению, связанному с болью при артрите. J. Neurosci. 33 , 10066–10074. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.5784-12.2013 (2013).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 20.

    Su, J. et al. Фенотипические изменения ганглия задних корешков и спинного мозга на мышиной модели артрита, индуцированного антителами к коллагену. J. Comp. Neurol. 523 , 1505–1528. https://doi.org/10.1002/cne.23749 (2015).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 21.

    Kouskoff, V. et al. Органоспецифическое заболевание, спровоцированное системным аутоиммунитетом. Cell 87 , 811–822 (1996).

    CAS Статья Google ученый

  • 22.

    Мацумото, И., Стауб, А., Бенойст, С. и Матис, Д. Артрит, спровоцированный связанными Т- и В-клетками распознавания гликолитического фермента. Наука 286 , 1732–1735. https://doi.org/10.1126/science.286.5445.1732 (1999).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 23.

    Кибурз Д. и Корр М. Модель воспалительного артрита на мышах KRN. Springer Semin. Immunopathol. 25 , 79–90. https://doi.org/10.1007/s00281-003-0131-5 (2003).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 24.

    Домер Ф. Характеристика анальгетической активности кеторолака у мышей. Eur. J. Pharmacol. 177 , 127–135 (1990).

    CAS Статья Google ученый

  • 25.

    Park, H. J. et al. Стойкая гипералгезия у мышей, получавших цисплатин, как определено пороговыми показателями, парадигмой условного предпочтения места и изменениями в ганглиях задних корешков, активированных фактором транскрипции 3: эффекты габапентина, кеторолака и этанерцепта. Anesth. Анальг. 116 , 224–231.https://doi.org/10.1213/ANE.0b013e31826e1007 (2013).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 26.

    Jimenez-Andrade, J. M. et al. Влияние старения на плотность иннервации чувствительных нервных волокон костей и острую скелетную боль. Neurobiol. Старение 33 , 921–932. https://doi.org/10.1016/j.neurobiolaging.2010.08.008 (2012).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 27.

    Насименто, Ф. П., Магнуссен, К., Юсефпур, Н. и Рибейро-да-Силва, А. Прорастание симпатических волокон в коже способствует поведению, связанному с болью, в моделях невропатической боли с повреждением нервов и манжетами. Мол. Боль 11 , 59. https://doi.org/10.1186/s12990-015-0062-x (2015).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 28.

    Rifbjerg-Madsen, S. et al. Боль и механизмы боли у пациентов с воспалительным артритом: датское общенациональное поперечное исследование реестра DANBIO. PLoS ONE 12 , e0180014. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0180014 (2017).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 29.

    Christensen, A. W. et al. Не ноцицептивная боль при ревматоидном артрите встречается часто и влияет на оценку активности заболевания: данные поперечного сечения исследования FRAME. Сканд. J. Rheumatol. 45 , 461–469. https://doi.org/10.3109/03009742.2016.1139174 (2016).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 30.

    Мойн, Д. М., Ваннер, С. Дж. И Ломакс, А. Е. Участие интерлейкина 17A в нейроиммунных взаимодействиях. Brain Behav. Иммун. 41 , 1–9. https://doi.org/10.1016/j.bbi.2014.03.004 (2014).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 31.

    Ghilardi, J. R. et al. Нейропластичность сенсорных и симпатических нервных волокон в мышиной модели болезненного артрита сустава. Arthritis Rheum. 64 , 2223–2232. https://doi.org/10.1002/art.34385 (2012).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 32.

    Sorge, R.E. et al. Различные иммунные клетки опосредуют гиперчувствительность к механической боли у самцов и самок мышей. Nat. Neurosci. 18 , 1081–1083. https://doi.org/10.1038/nn.4053 (2015).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 33.

    Sorge, R.E. et al. Toll-подобный рецептор 4 спинного мозга опосредует воспалительную и нейропатическую гиперчувствительность у самцов, но не у самок мышей. J. Neurosci. 31 , 15450–15454. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.3859-11.2011 (2011).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 34.

    Woller, S. A. et al. Нейроаксиальный TNF и IFN-бета совместно модулируют стойкую аллодинию у мышей с артритом. Brain Behav. Иммун. 76 , 151–158. https://doi.org/10.1016/j.bbi.2018.11.014 (2019).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 35.

    Якш Т. Л., Воллер С. А., Рамачандран Р. и Соркин Л. С. Поиск новых анальгетиков: цели и механизмы. F1000Prime Rep 7 , 56, https://doi.org/10.12703/P7-56 (2015).

  • 36.

    Воллер, С. А., Эддингер, К. А., Корр, М. и Якш, Т. Л. Обзор путей, кодирующих ноцицепцию. Clin. Exp. Ревматол. 36 , 172 (2018).

    PubMed Google ученый

  • 37.

    Coull, J.A. et al. BDNF из микроглии вызывает сдвиг нейронального анионного градиента, лежащего в основе нейропатической боли. Природа 438 , 1017–1021. https://doi.org/10.1038/nature04223 (2005).

    ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 38.

    Чен, Б. П., Вольфганг, К. Д. и Хай, Т. Анализ ATF3, фактора транскрипции, индуцируемого физиологическими стрессами и модулируемого gadd153 / Chop10. Мол. Cell Biol. 16 , 1157–1168. https://doi.org/10.1128/mcb.16.3.1157 (1996).

    Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

  • 39.

    Салинас-Абарка, А. Б., Авила-Рохас, С. Х., Барраган-Иглесиас, П., Пинеда-Фариас, Дж. Б. и Гранадос-Сото, В. Инъекция формалина вызывает стойкую гиперчувствительность с характеристиками невропатической боли. Eur. J. Pharmacol. 797 , 83–93.https://doi.org/10.1016/j.ejphar.2017.01.018 (2017).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 40.

    Айенгар, С., Осипов, М. Х. и Джонсон, К. В. Роль пептида, связанного с геном кальцитонина, в периферических и центральных механизмах боли, включая мигрень. Боль 158 , 543–559. https://doi.org/10.1097/j.pain.0000000000000831 (2017).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 41.

    Nehlig, A. et al. Пентилентетразол-индуцированный эпилептический статус повышает экспрессию мРНК переносчиков глюкозы, но не белков в незрелом мозге крысы. Brain Res. 1082 , 32–42. https://doi.org/10.1016/j.brainres.2006.01.078 (2006).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 42.

    Брумовский П.Р. Нейроны ганглиев задних корешков и тирозингидроксилаза — интригующая ассоциация, влияющая на ощущения и боль. Боль 157 , 314–320. https://doi.org/10.1097/j.pain.0000000000000381 (2016).

    Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

  • 43.

    Freemont, A. J. et al. Врастание нерва в больной межпозвоночный диск при хронической боли в спине. Ланцет 350 , 178–181. https://doi.org/10.1016/s0140-6736(97)02135-1 (1997).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 44.

    Suri, S. et al. Нервно-сосудистая инвазия в костно-хрящевом соединении и в остеофитах при остеоартрозе. Ann Rheum. Дис. 66 , 1423–1428. https://doi.org/10.1136/ard.2006.063354 (2007).

    Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

  • 45.

    Хучо, Т. и Левин, Дж. Д. Сигнальные пути в сенсибилизации: К биологии ноцицепторных клеток. Нейрон 55 , 365–376.https://doi.org/10.1016/j.neuron.2007.07.008 (2007).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 46.

    Lin, Q., Zou, X., Fang, L. & Willis, W. D. Симпатическая модуляция острого кожного воспаления, вызванного внутрикожной инъекцией капсаицина анестезированным крысам. J. Neurophysiol. 89 , 853–861. https://doi.org/10.1152/jn.00568.2002 (2003 г.).

    Артикул PubMed Google ученый

  • 47.

    Джаниг, В., Левин, Дж. Д. и Михаэлис, М. Взаимодействие симпатических и первичных афферентных нейронов после повреждения нерва и травмы ткани. Прог. Brain Res. 113 , 161–184 (1996).

    CAS Статья Google ученый

  • 48.

    Nandakumar, K. S. & Holmdahl, R. Эффективное стимулирование артрита, индуцированного антителами к коллагену (CAIA), с использованием четырех моноклональных антител, специфичных для основных эпитопов, распознаваемых как при артрите, индуцированном коллагеном, так и при ревматоидном артрите. J. Immunol. Методы 304 , 126–136. https://doi.org/10.1016/j.jim.2005.06.017 (2005).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 49.

    Чаплан, С. Р., Бах, Ф. В., Погрель, Дж. У., Чанг, Дж. М. и Якш, Т. Л. Количественная оценка тактильной аллодинии в лапе крысы. J. Neurosci. Методы 53 , 55–63 (1994).

    CAS Статья Google ученый

  • 50.

    Eroglu, C. et al. Рецептор габапентина alpha2delta-1 — нейрональный рецептор тромбоспондина, ответственный за возбуждающий синаптогенез в ЦНС. Cell 139 , 380–392. https://doi.org/10.1016/j.cell.2009.09.025 (2009 г.).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 51.

    Танабе, М., Оно, К., Хонда, М. и Оно, Х. Габапентин и прегабалин снижают механическую гиперчувствительность после повреждения спинного мозга у мышей. Eur. J. Pharmacol. 609 , 65–68. https://doi.org/10.1016/j.ejphar.2009.03.020 (2009).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 52.

    Rigaud, M. et al. Различия в видах и деформациях в анатомии седалищного нерва грызунов: значение для исследований невропатической боли. Боль 136 , 188–201. https://doi.org/10.1016/j.pain.2008.01.016 (2008).

    Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

  • 53.

    Бобински, Ф., Тейшейра, Дж. М., Слука, К. А. и Сантос, А. Р. С. Интерлейкин-4 опосредует обезболивание, вызываемое упражнениями низкой интенсивности у мышей с невропатической болью. Боль 159 , 437–450. https://doi.org/10.1097/j.pain.0000000000001109 (2018).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 54.

    Hoeger-Bement, M. K. & Sluka, K. A. Фосфорилирование CREB и механическая гипералгезия отменяются блокадой пути цАМФ в зависимости от времени после повторных внутримышечных инъекций кислоты. J. Neurosci. 23 , 5437–5445 (2003).

    CAS Статья Google ученый

  • 55.

    Jimenez-Andrade, J. M. et al. Чувствительные к капсаицину сенсорные нервные волокна способствуют возникновению и поддержанию боли при переломах скелета. Neuroscience 162 , 1244–1254. https://doi.org/10.1016/j.neuroscience.2009.05.065 (2009).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 56.

    Castaneda-Corral, G. et al. Большинство миелинизированных и немиелинизированных сенсорных нервных волокон, которые иннервируют кость, экспрессируют киназу А рецептора тропомиозина. Neuroscience 178 , 196–207. https://doi.org/10.1016/j.neuroscience.2011.01.039 (2011).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 57.

    Jimenez-Andrade, J. M. et al. Патологическое разрастание ноцицепторов у взрослых при хронической боли в костях, вызванной раком простаты. J. Neurosci. 30 , 14649–14656. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.3300-10.2010 (2010).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 58.

    Guma, M. et al. Независимая от каспазы 1 активация интерлейкина-1бета при воспалении с преобладанием нейтрофилов. Arthritis Rheum. 60 , 3642–3650. https://doi.org/10.1002/art.24959 (2009 г.).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 59.

    Bouxsein, M. L. et al. Руководство по оценке микроструктуры костей у грызунов с помощью микрокомпьютерной томографии. J. Bone Miner. Res. 25 , 1468–1486. https://doi.org/10.1002/jbmr.141 (2010).

    Артикул PubMed Google ученый

  • 60.

    Park, H. J. et al. Влияние габапентина и кеторолака на аллодинию и обусловленное предпочтение места при воспалении, вызванном антителами. Eur. Дж. Пейн 20 , 917–925. https://doi.org/10.1002/ejp.816 (2016).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 61.

    Christianson, C.A. et al. Spinal TLR4 опосредует переход к стойкой механической гиперчувствительности после разрешения воспаления при артрите, перенесенном из сыворотки крови. Боль 152 , 2881–2891. https://doi.org/10.1016/j.pain.2011.09.020 (2011).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 62.

    Choe, J. Y., Crain, B., Wu, S. R. & Corr, M. Зависимость сывороточного артрита от рецептора интерлейкина 1 можно обойти с помощью передачи сигналов толл-подобного рецептора 4. J. Exp. Med. 197 , 537–542. https://doi.org/10.1084/jem.20021850 (2003).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • Проапоптотическая заявка необходима для разрешения эффекторной фазы воспалительного артрита | Исследования и терапия артрита

  • 1.

    Catrina AI, Trollmo C, af Klint E, Engstrom M, Lampa J, Hermansson Y, Klareskog L, Ulfgren AK: Доказательства того, что терапия противоопухолевым фактором некроза с этанерцептом и инфликсимабом вызывает апоптоз макрофагов, но не лимфоцитов при ревматоиде. артрит суставов: расширенное сообщение. Rheum артрита. 2005, 52: 61-72. 10.1002 / арт.20764.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 2.

    Янни Г., Уилан А., Фейгери С., Бреснихан Б.: Макрофаги синовиальной ткани и эрозия суставов при ревматоидном артрите.Ann Rheum Dis. 1994, 53: 39-44.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 3.

    Mulherin D, Fitzgerald O, Bresnihan B: Популяции макрофагов синовиальной ткани и повреждение суставов при ревматоидном артрите. Rheum артрита. 1996, 39: 115-124. 10.1002 / арт.17803

  • .

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 4.

    Лю Х., Папа Р.М.: Апоптоз при ревматоидном артрите: друг или враг.Rheum Dis Clin North Am. 2004, 30: 603-625. 10.1016 / j.rdc.2004.04.010.

    Артикул PubMed Google ученый

  • 5.

    Matsumoto S, Muller-Ladner U, Gay RE, Nishioka K, Gay S: ультраструктурная демонстрация апоптоза, экспрессии Fas и Bcl-2 ревматоидных синовиальных фибробластов. J Rheum. 1996, 23: 1345-1352.

    CAS PubMed Google ученый

  • 6.

    Sugiyama M, Tsukazaki T, Yonekura A, Matsuzaki S, Yamashita S, Iwasaki K: Локализация апоптоза и экспрессия связанных с апоптозом белков в синовиальной оболочке пациентов с ревматоидным артритом.Ann Rheum Dis. 1996, 55: 442-449.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 7.

    Мягков А.В., Коваленко Д.В., Брвон С., Дидсбери Дж. Р., Когсвелл Дж. П., Стимпсон С.А., Болдуин А.С., Макаров С.С.: Активация NF-kB обеспечивает потенциальную связь между воспалением и гиперплазией в артритном суставе. Proc Natl Acad Sci USA. 1998, 95: 13859-13864. 10.1073 / pnas.95.23.13859.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 8.

    Fujisawa K, Asahara H, Okamoto K, Aono H, Hasunuma T., Kobata T, Iwakura Y, Yonehara S, Sumida T., Nishioka N: терапевтический эффект анти-Fas-антитела на артрит у трансгенных мышей, взятых с HTLV-1. J Clin Invest. 1996, 98: 271-278.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 9.

    Zhang H, Yang Y, Horton JL, Samoilova EB, Judge TA, Turka LA, Wilson JM, Chen Y: Улучшение коллаген-индуцированного артрита с помощью гена CD-95 (Apo-1 / Fas) -лиганда передача.J Clin Invest. 1997, 100: 1951-1957.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 10.

    Harjacek M, Diaz-Cano S, De Miguel M, Wolfe H, Maldonado CA, Rabinovich GA: Экспрессия галектинов-1 и -3 коррелирует с апоптозом дефектных мононуклеарных клеток у пациентов с ювенильным идиопатическим артритом. J Rheumatol. 2001, 28: 1914-1922.

    CAS PubMed Google ученый

  • 11.

    Адамс Дж. М., Кори С.: Семейство белков Bcl-2: арбитры выживания клеток. Наука. 1998, 281: 1322-1326. 10.1126 / science.281.5381.1322.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 12.

    Опферман JT, Корсмейер SJ: Апоптоз в развитии и поддержании иммунной системы. Nat Immunol. 2003, 4: 410-415. 10.1038 / ni0503-410.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 13.

    Letai A, Bassik MC, Walensky LD, Sorcinelli MD, Weiler S, Korsmeyer SJ: Отдельные домены Bh4 либо сенсибилизируют, либо активируют митохондриальный апоптоз, служа прототипом лечения рака. Раковая клетка. 2002, 2: 183-192. 10.1016 / S1535-6108 (02) 00127-7.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 14.

    Certo M, Moore Vdel G, Nishino M, Wei G, Korsmeyer S, Armstrong SA, Letai A: Митохондрии, вызванные сигналами смерти, определяют клеточную зависимость от антиапоптотических членов семейства BCL-2.Раковая клетка. 2006, 9: 351-365. 10.1016 / j.ccr.2006.03.027.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 15.

    Chen L, Willis SN, Wei A, Smith BJ, Fletcher JI, Hinds MG, Colman PM, Day CL, Adams JM, Huang DC: Дифференциальное нацеливание на выживание белков Bcl-2 их лигандами, содержащими только Bh4 допускает дополнительную апоптотическую функцию. Mol Cell. 2005, 17: 393-403. 10.1016 / j.molcel.2004.12.030.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 16.

    Willis SN, Chen L, Dewson G, Wei A, Naik E, Fletcher JI, Adams JM, Huang DC: Proapoptotic Bak изолируется Mcl-1 и Bcl-xL, но не Bcl-2, пока не будет вытеснен только Bh4 белки. Genes Dev. 2005, 19: 1294-1305. 10.1101 / гад.1304105.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 17.

    Kuwana T, Bouchier-Hayes L, Chipuk JE, Bonzon C, Sullivan BA, Green DR, Newmeyer DD: домены Bh4 белков, содержащих только Bh4, прямо и косвенно регулируют Bax-опосредованную проницаемость митохондриальной мембраны.Mol Cell. 2005, 17: 525-535. 10.1016 / j.molcel.2005.02.003.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 18.

    Ян Дж., Лю Х, Бхалла К., Ким С.Н., Ибрадо А.М., Цай Дж., Пэн Т-И, Джонс Д.П., Ван Х: Предотвращение апоптоза с помощью Bcl-2: высвобождение цитохрома с из митохондрий заблокировано. Наука. 1997, 275: 1129-1132. 10.1126 / science.275.5303.1129.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 19.

    Kluck RM, Bossy-Wetzel E, Green DR, Newmeyer DD: Высвобождение цитохрома c из митохондрий: первичный сайт регуляции Bcl-2 апоптоза. Наука. 1997, 275: 1132-1136. 10.1126 / science.275.5303.1132.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 20.

    Kuida K, Haydar TF, Kuan C, Gu Y, Taya C., Karasuyama H, Su MS, Rakic ​​P, Flavell RA: снижение апоптоза и опосредованной цитохромом активации каспазы у мышей, лишенных каспазы 9.Клетка. 1998, 94: 325-337. 10.1016 / S0092-8674 (00) 81476-2.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 21.

    Рао Л., Уайт E: Bcl-2 и семейство апоптотических регуляторов ICE: установление связи. Curr Opin Genet Dev. 1997, 7: 52-58. 10.1016 / S0959-437X (97) 80109-8.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 22.

    Штрассер A: Роль Bh4-only белков в иммунной системе.Nat Rev Immunol. 2005, 5: 189-200. 10.1038 / nri1568.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 23.

    Зеленый DR: Пути апоптоза: Дороги к гибели. Клетка. 1998, 94: 695-698. 10.1016 / S0092-8674 (00) 81728-6.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 24.

    Luo X, Budihardjo I, Zou H, Slaughter C, Wang X: Bid, белок, взаимодействующий с Bcl-2, опосредует высвобождение цитохрома c из митохондрий в ответ на активацию рецепторов смерти на поверхности клетки.Клетка. 1998, 94: 481-490. 10.1016 / S0092-8674 (00) 81589-5.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 25.

    Li P, Nijhawan D, Budihardjo I, Srinivasula SM, Ahmad M, Alnemri ES, Wang X: цитохром c и dATP-зависимое образование комплекса Apaf-1 / каспаза-9 инициирует каскад апоптотических протеаз. Клетка. 1997, 91: 479-489. 10.1016 / S0092-8674 (00) 80434-1.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 26.

    Wang K, Yin XM, Chao DT, Milliman CL, Korsmeyer SJ: BID, новый агонист смерти только в домене Bh4. Genes Dev. 1996, 10: 2859-2869. 10.1101 / gad.10.22.2859.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 27.

    Brown NJ, Hutcheson J, Bickel E, Scatizzi JC, Albee LD, Haines GK, Eslick J, Bradley K, Taricone E, Perlman H: передача сигналов рецептора смерти Fas подавляет количество моноцитов и активацию макрофагов in vivo .J Immunol. 2004, 173: 7584-7593.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 28.

    Scatizzi JC, Bickel E, Hutcheson J, Haines GK, Perlman H: Дефицит Bim приводит к обострению и продлению воспаления суставов при экспериментальном артрите. Rheum артрита. 2006, 54: 3182-3193. 10.1002 / арт.22133.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 29.

    Кускофф В., Корганов А.С., Дюшатель В., Деготт С., Бенуа С., Матис D: Органоспецифическое заболевание, спровоцированное системным аутоиммунитетом. Клетка. 1996, 87: 811-822. 10.1016 / S0092-8674 (00) 81989-3.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 30.

    Korganow AS, Ji H, Mangialaio S, Duchatelle V, Pelanda R, Martin T, Degott C, Kikutani H, Rajewsky K, Pasquali JL, Benoist C, Mathis D: От системной самореактивности Т-клеток к органоспецифическое аутоиммунное заболевание через иммуноглобулины.Иммунитет. 1999, 10: 451-461. 10.1016 / S1074-7613 (00) 80045-X.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 31.

    Ji H, Gauguier D, Ohmura K, Gonzalez A, Duchatelle V, Danoy P, Garchon HJ, Degott C, Lathrop M, Benoist C, Mathis D: генетические влияния на эффекторную фазу конечной стадии артрита . J Exp Med. 2001, 194: 321-330. 10.1084 / jem.194.3.321.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 32.

    Scatizzi JC, Hutcheson J, Bickel E, Woods JM, Klosowska K, Moore TL, Haines GK, Perlman H: p21Cip1 необходим для развития моноцитов и их реакции на артрит, вызванный переносом сыворотки. Am J Pathol. 2006, 168: 1531-1541. 10.2353 / ajpath.2006.050555.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 33.

    Петтит А.Р., Джи Х., фон Стехов Д., Мюллер Р., Голдринг С.Р., Чой Й, Бенойст С., Граваллезе Е.М.: Нокаут-мыши TRANCE / RANKL защищены от эрозии костей в модели артрита с пересадкой сыворотки.Am J Pathol. 2001, 159: 1689-1699.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 34.

    Scatizzi JC, Hutcheson J, Bickel E, Woods JM, Klosowska K, Moore TL, Haines GK, Perlman H: p21Cip1 необходим для развития моноцитов и их реакции на артрит, вызванный переносом сыворотки. Am J Pathol. 2006, 168: 1531-1541. 10.2353 / ajpath.2006.050555.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 35.

    Макнайт А.Дж., Макфарлейн А.Дж., Дри П., Терли Л., Уиллис А.С., Гордон С.: Молекулярное клонирование F4 / 80, мышиного гликопротеина клеточной поверхности, ограниченного макрофагами, с гомологией с семейством рецепторов трансмембранного гормона 7, связанного с G-белком. J Biol Chem. 1996, 271: 486-489. 10.1074 / jbc.271.50.31869.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 36.

    Nabel EG, Gordon D, Yang ZY, Xu L, San H, Plautz GE, Wu BY, Gao X, Huang L, Nabel GJ: Перенос гена in vivo с ДНК-липосомными комплексами: отсутствие аутоиммунитет и гонадная локализация.Hum Gene Ther. 1992, 3: 649-656.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 37.

    Хирш С., Остин Дж. М., Гордон С. Экспрессия макрофаг-специфического антигена F4 / 80 во время дифференцировки клеток костного мозга мыши в культуре. J Exp Med. 1981, 154: 713-725. 10.1084 / jem.154.3.713.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 38.

    Акияма Т., Миядзаки Т., Булье П., Накамура К., Штрассер А., Танака С.: In vitro и in vivo анализы апоптоза остеокластов.Биол Процедура Онлайн. 2005, 7: 48-59. 10.1251 / bpo105.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 39.

    Schaller E, Macfarlane AJ, Rupec RA, Gordon S, McKnight AJ, Pfeffer K: инактивация гликопротеина F4 / 80 в зародышевой линии мыши. Mol Cell Biol. 2002, 22: 8035-8043. 10.1128 / MCB.22.22.8035-8043.2002.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 40.

    Ditzel HJ: Мышь K / BxN: модель воспалительного артрита человека. Тенденции Мол Мед. 2004, 10: 40-45. 10.1016 / j.molmed.2003.11.004.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 41.

    Corr M, Crain B: Роль передачи сигналов FcgammaR в модели артрита переноса сыворотки K / B × N. J Immunol. 2002, 169: 6604-6609.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 42.

    Джи Х, Омура К., Махмуд У, Ли Д.М., Хофхуис Ф.М., Бокл С.А., Такахаши К., Холерс В.М., Уолпорт М., Джерард С. и др.: Артрит критически зависит от врожденной иммунной системы игроков. Иммунитет. 2002, 16: 157-168. 10.1016 / С1074-7613 (02) 00275-3.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 43.

    Perlman H, Pagliari LJ, Volin MV: Регулирование апоптоза и активности клеточного цикла при ревматоидном артрите. Curr Mol Med. 2001, 1: 597-608.10.2174 / 1566524013363429.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 44.

    Перлман Х., Нгуен Н., Лю Х., Эслик Дж., Эссер С., Уолш К., Мур Т.Л., Папа Р.М.: Макрофаги синовиальной жидкости ревматоидного артрита экспрессируют сниженный уровень индуцирующего апоптоз лиганда R2, связанный с фактором некроза опухоли, и повышенный уровень приманки лиганд, индуцирующий апоптоз, рецепторный фактор некроза опухоли R3. Rheum артрита. 2003, 48: 3096-3101. 10.1002 / арт.11302.

    Артикул PubMed Google ученый

  • 45.

    Perlman H, Pagliari LJ, Liu H, Koch AE, Haines GK, Pope RM: синовиальные макрофаги при ревматоидном артрите экспрессируют Fas-ассоциированный домен смерти, подобный интерлейкин-1-бета-конвертирующему фермент-ингибиторному белку, и невосприимчивы к Fas-опосредованный апоптоз. Rheum артрита. 2001, 44: 21-30. 10.1002 / 1529-0131 (200101) 44: 1 <21 :: AID-ANR4> 3.0.CO; 2-8.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 46.

    Perlman H, Georganas C, Pagliari LJ, Koch AE, Haines K, Pope RM: Экспрессия Bcl-2 в синовиальных фибробластах важна для поддержания митохондриального гомеостаза и жизнеспособности клеток. J Immunol. 2000, 164: 5227-5235.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 47.

    Бастид С., Беннетт М.В., Моллой С., Хьюстон А., Стоун М.А., Шанахан Ф., Моллой М.Г., О’Коннелл Дж .: Экспрессия Bcl-x (L) in vivo в ревматоидном синовиуме.Clin Rheumatol. 2006, 25: 789-793. 10.1007 / s10067-005-0191-0.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 48.

    Hilbers I, Hansen T, Petrow PK, Gaumann A, Brauer R, Salzmann G, Gay RE, Kosmehl H, Kirkpatrick CJ, Gay S, Kriegsmann J: Экспрессия ускорителя апоптоза Bax в синовиальном ревматоидном артрите. Rheumatol Int. 2003, 23: 75-81.

    CAS PubMed Google ученый

  • 49.

    Cha HS, Rosengren S, Boyle DL, Firestein GS: Регулирование PUMA и проапоптотические эффекты в фибробластоподобных синовиоцитах. Rheum артрита. 2006, 54: 587-592. 10.1002 / арт.21631.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 50.

    Чен М., Хуанг Л., Ван Дж .: Дефицит Bim в дендритных клетках способствует чрезмерной активации лимфоцитов и аутоиммунитету. Кровь. 2007, 109: 4360-4367. 10.1182 / кровь-2006-11-056424.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • 51.

    Batliwalla FM, Baechler EC, Xiao X, Li W, Balasubramanian S, Khalili H, Damle A, Ortmann WA, Perrone A, Kantor AB и др.: Профилирование экспрессии генов периферической крови при ревматоидном артрите. Genes Immun. 2005, 6: 388-397. 10.1038 / sj.gene.6364209.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 52.

    Ивахаси М., Ямамура М., Аита Т., Окамото А., Уэно А., Огава Н., Акаси С., Мияке К., Годовски П.Дж., Макино Х .: Экспрессия Toll-подобного рецептора 2 на моноцитах крови CD16 + и синовиальной ткани макрофаги при ревматоидном артрите.Rheum артрита. 2004, 50: 1457-1467. 10.1002 / арт.20219.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 53.

    Каванака Н., Ямамура М., Айта Т., Морита Ю., Окамото А., Кавасима М., Ивахаси М., Уэно А., Омото Ю., Макино Н.: моноциты крови CD14 +, CD16 + и воспаление суставов при ревматоидном артрите. Rheum артрита. 2002, 46: 2578-2586. 10.1002 / арт.10545.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 54.

    van den Berg WB, van Lent PLEM: Роль макрофагов при хроническом артрите. Иммунобиология. 1996, 195: 614-623.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 55.

    Чой EH, Панайи GS: Цитокиновые пути и воспаление суставов при ревматоидном артрите. N Engl J Med. 2001, 344: 907-916. 10.1056 / NEJM200103223441207.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 56.

    Фельдманн М., Бреннан Ф.М., Майни Р.Н.: Роль цитокинов при ревматоидном артрите. Анну Рев Иммунол. 1996, 14: 397-440. 10.1146 / annurev.immunol.14.1.397.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 57.

    Nuki G, Bresnihan B, Bear MB, McCabe D: Долгосрочная безопасность и поддержание клинического улучшения после лечения анакинрой (рекомбинантным антагонистом рецептора человеческого интерлейкина-1) у пациентов с ревматоидным артритом: фаза продления рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование.Rheum артрита. 2002, 46: 2838-2846. 10.1002 / арт.10578.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 58.

    Genovese MC, Bathon JM, Martin RW, Fleischmann RM, Tesser JR, Schiff MH, Keystone EC, Wasko MC, Moreland LW, Weaver AL и др .: Сравнение этанерцепта и метотрексата у пациентов с ранним ревматоидным артритом: два -летние рентгенологические и клинические результаты. Rheum артрита. 2002, 46: 1443-1450. 10.1002 / арт.10308.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 59.

    De Rycke L, Baeten D, Foell D, Kruithof E, Veys EM, Roth J, De Keyser F: Дифференциальная экспрессия и ответ на лечение анти-TNFalpha инфильтрирующих субпопуляций по сравнению с резидентными тканевыми макрофагами при аутоиммунном артрите. J Pathol. 2005, 206: 17-27. 10.1002 / путь.1758.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 60.

    Кэмпбелл И.К., Рич М.Дж., Бишоф Р.Дж., Гамильтон Дж. А. Колониестимулирующие факторы и коллаген-индуцированный артрит: обострение заболевания, вызванное M-CSF и G-CSF, и потребность в эндогенном M-CSF.J Leukoc Biol. 2000, 68: 144-150.

    CAS PubMed Google ученый

  • 61.

    Ян YH, Гамильтон JA: Зависимость интерлейкин-1-индуцированного артрита от гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора. Rheum артрита. 2001, 44: 111-119. 10.1002 / 1529-0131 (200101) 44: 1 <111 :: AID-ANR15> 3.0.CO; 2-1.

    Артикул PubMed Google ученый

  • 62.

    Solomon S, Rajasekaran N, Jeisy-Walder E, Snapper SB, Illges H: решающая роль макрофагов в патологии артрита, индуцированного сывороткой K / B × N.Eur J Immunol. 2005, 35: 3064-3073. 10.1002 / eji.200526167.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 63.

    Zinkel SS, Ong CC, Ferguson DO, Iwasaki H, Akashi K, Bronson RT, Kutok JL, Alt FW, Korsmeyer SJ: Проапоптотический BID необходим для миелоидного гомеостаза и подавления опухоли. Genes Dev. 2003, 17: 229-239. 10.1101 / гад.1045603.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google ученый

  • Границы | Клоноспецифический анализ функции Syk при артрите, индуцированном аутоантителами

    Введение

    Ряд аутоиммунных заболеваний, включая ревматоидный артрит, системную красную волчанку, васкулит мелких сосудов или пемфигоидные заболевания, характеризуются выработкой аутоантител против различных аутоантигенов организма млекопитающих (1).Считается, что эти аутоантитела вносят вклад в патогенез аутоиммунного заболевания либо непосредственно путем задействования их целевых аутоантигенов (активирующих или блокирующих функцию аутоантител), либо путем запуска воспалительной реакции и сопутствующего повреждения ткани, вызванного инфильтративными воспалительными клетками.

    Артрит с переносом сыворотки K / BxN является одной из наиболее широко используемых моделей повреждения тканей, вызванных аутоантителами. Эта модель инициируется системной инъекцией сыворотки от так называемых мышей K / BxN, у которых экспрессия специфического трансгена Т-клеточного рецептора на генетическом фоне, предрасположенном к аутоиммунным заболеваниям, приводит к генерации высоких титров аутоантител против повсеместно экспрессируемых фермент глюкозо-6-фосфат-изомераза (2–5).Передача этих аутоантител с сывороткой K / BxN наивным животным вызывает сильное воспаление дистальных суставов и других тканей. Артрит с переносом сыворотки K / BxN запускается отложением иммунных комплексов (IC) и сопутствующей активацией Fcγ-рецепторов (5). Считается, что в развитие артрита с переносом сыворотки K / BxN участвует ряд кроветворных клонов. На роль нейтрофилов указывает тот факт, что опосредованное антителами истощение (6) или генетическая делеция (7, 8) нейтрофилов предотвращает развитие артрита в этой модели.Развитие артрита также снижалось у мышей Kit W / W-v с дефицитом тучных клеток (9), что свидетельствует о важной роли тучных клеток. Кроме того, было высказано предположение, что тромбоциты необходимы для развития артрита с переносом сыворотки K / BxN путем высвобождения микрочастиц, полученных из тромбоцитов, при индуцированной коллагеном активации в синовиальной ткани (10).

    Syk представляет собой нерецепторную тирозинкиназу, в первую очередь экспрессирующуюся в клетках гемопоэтического клона (11). Он опосредует передачу сигналов рядом рецепторов клеточной поверхности, включая B-клеточные рецепторы (12, 13), Fcγ- и Fcε-рецепторы (14–18), β 2 и β 3 интегринов (19–21), Лектины С-типа (11, 22) и другие рецепторы, связанные с иммунорецепторными мотивами активации тирозина (ITAM) (11, 23).Учитывая его роль в различных гемопоэтических клонах и передаче сигналов ниже различных рецепторов клеточной поверхности, Syk незаменим для ряда процессов in vivo , включая развитие B-клеток (12, 13), различные воспалительные процессы заболевания (17, 24, 25). , противогрибковый иммунитет (26) или развитие лимфатических сосудов (27). Основываясь на его центральной роли в иммунной системе, Syk был предложен в качестве терапевтической мишени при различных аутоиммунных и воспалительных заболеваниях (11, 28).

    Мы ранее показали, что Syk критически участвует в развитии артрита на модели индуцированного аутоантителами переноса сыворотки K / BxN (25).Наши дополнительные исследования показали, что Syk участвует в пути ниже по течению от Fc-рецепторов и киназ семейства Src (29) и активирует дальнейшие нижестоящие процессы через PLCγ2 (30) и CARD9 (31). Однако в настоящее время не до конца понятно, в какой линии (ах) Syk необходимо выражать развитие артрита в этой модели. Химерные эксперименты с костным мозгом подтвердили роль Syk в одной или нескольких гематопоэтических клонах (25). Несколько линий доказательств указывают на важную роль Syk в нейтрофилах (19, 31, 32).Важная роль GpVI, рецептора коллагена, связанного с ITAM на тромбоцитах, в развитии артрита с переносом сыворотки K / BxN (10) предполагает роль Syk в тромбоцитах в развитии заболевания в этой модели (33). Наконец, предполагаемая роль тучных клеток (9, 34) и критическая роль Syk в активации тучных клеток (14, 18) повысили вероятность того, что экспрессия Syk в тучных клетках способствует развитию артрита с переносом сыворотки K / BxN.

    Вышеупомянутые исследования побудили нас выполнить клон-специфическую делецию Syk из нейтрофилов, тромбоцитов и тучных клеток, а также проверить влияние этих мутаций на развитие артрита, индуцированного аутоантителами, в модели переноса сыворотки K / BxN.Наши результаты указывают на важную роль экспрессии Syk в нейтрофилах, тогда как, вопреки нашим ожиданиям, экспрессия Syk в тромбоцитах или тучных клетках, по-видимому, не обязательна для развития артрита в этой модели.

    Материалы и методы

    Животные

    Мышей, несущих аллель Syk ( Syk tm1Tyb , обозначается как Syk ) (12), содержали в гетерозиготной форме и использовали для получения Syk / — и контрольные плоды для трансплантации печени плода (19, 25).Клон-специфическая делеция Syk была достигнута путем скрещивания трансгенных мышей MRP8-Cre (35), PF4-Cre (36) или Mcpt5-Cre (37) с животными, несущими флокированный аллель Syk ( Syk tm1.2Tara , обозначается как Syk flox ) (38) для получения MRP8-Cre + Syk flox / flox , PF4-Cre + Syk flox / flox и Mcpt Cre + Syk flox / flox мышей, обозначаемых как Syk ΔPMN , Syk ΔPLT и Syk ΔMC животных, соответственно.Мышей, несущих трансген Т-клеточного рецептора KRN (2), поддерживали в гетерозиготной форме путем скрещивания с мышами C57BL / 6. Все трансгенные мыши были скрещены с генетическим фоном C57BL / 6 по крайней мере в шести поколениях. Генотипирование проводили с помощью аллель-специфической ПЦР.

    Контрольные мыши C57BL / 6 дикого типа (WT) были приобретены у Charles River или Венгерского национального института онкологии (Будапешт, Венгрия). Мыши NOD, а также конгенная линия, несущая аллель CD45.1 на генетическом фоне C57BL / 6 (B6.SJL- Ptprc a ) были приобретены в лаборатории Джексона.

    Мышей содержали в индивидуально стерильных вентилируемых клетках (Tecniplast) в обычном помещении. Все эксперименты на животных были одобрены Наблюдательным советом по экспериментам на животных Университета Земмельвейса.

    Химеры костного мозга были получены путем внутривенной инъекции нефракционированных клеток костного мозга или эмбриональных клеток печени реципиентам, несущим аллель CD45.1 на генетическом фоне C57BL / 6, которые ранее были смертельно облучены 11 Гр из источника 137 Cs с использованием Gamma-Service Medical (Лейпциг, Германия) Облучатель D1.Через 4 недели после трансплантации образцы периферической крови были окрашены на Ly6G и CD45.2 (клоны 1A8 и 104 соответственно; оба от BD Biosciences) и проанализированы с помощью проточного цитометра BD Biosciences FACSCalibur, как описано ранее (см. Рисунок S1A в дополнительных материалах) ( 29).

    K / BxN Артрит с переносом сыворотки

    Мышей, несущих трансген Т-клеточного рецептора KRN на генетическом фоне C57BL / 6, скрещивали с мышами NOD для получения трансген-позитивных (артритных) мышей K / BxN и трансген-негативных (не артритических) мышей BxN (2, 30).Присутствие трансгена определяли с помощью аллель-специфической ПЦР и подтверждали фенотипической оценкой. Кровь брали путем ретроорбитального кровотечения, и сыворотки мышей с артритом и контрольных мышей объединяли отдельно.

    Артрит вызывали однократной внутрибрюшинной инъекцией 300 мкл сыворотки K / BxN (артритная) или BxN (контрольная) интактным мышам или химерам костного мозга с последующей ежедневной оценкой тяжести артрита в течение 2 недель, как описано (30, 31, 39 ). Видимые клинические признаки оценивались по шкале от 0 до 10 двумя исследователями, не знавшими происхождения и лечения мышей.Толщина голеностопного сустава измерялась подпружиненным штангенциркулем (Kroeplin).

    Выделение и активация нейтрофилов, тромбоцитов и тучных клеток

    Нейтрофилы мыши выделяли из костного мозга бедренных и большеберцовых костей интактных мышей или химер с помощью гипотонического лизиса с последующим центрифугированием в градиенте Percoll (GE Healthcare) с использованием стерильных и не содержащих эндотоксинов реагентов, как описано (18, 31, 39). Клетки хранили при комнатной температуре в среде без Ca 2+ — и Mg 2+ до использования и предварительно нагревали до 37 ° C перед активацией.Анализы нейтрофилов выполняли при 37 ° C в HBSS с добавлением 20 мМ HEPES, pH 7,4. Зависимое от адгезии высвобождение супероксида нейтрофилами сопровождалось тестом восстановления цитохрома c из аликвот 100 мкл 4 × 10 6 клеток / мл, высеянных на поверхности, покрытые фибриногеном (Calbiochem), в присутствии 50 нг / мл мышиного TNF- α (PeproTech), как описано (39).

    Тромбоциты были выделены из периферической крови мягким центрифугированием в присутствии гепарина. Для анализа агрегации in vitro (40) тромбоциты были разделены на две группы: одна мечена анти-CD9-PE (клон EM-04; Abcam), а другая — анти-CD9-APC (клон eBioKMC8 ; eBioscience) антитела.Две группы с разными метками были смешаны в равных объемах и активированы 50 нг / мл Convulxin (Enzo Life Sciences) при 37 ° C при встряхивании при 700 об / мин в течение 5 минут. Реакцию останавливали с помощью лизирующего раствора BD FACS (BD Biosciences). Образцы были проанализированы методом проточной цитометрии, где тромбоциты были идентифицированы в соответствии с их характеристиками прямого и бокового рассеяния. Агрегацию определяли как процент двойных положительных событий CD9-PE / CD9-APC (40).

    Тучные клетки культивировали из костного мозга в присутствии 5 нг / мл мышиного IL-3 и 20 нг / мл фактора стволовых клеток (оба от PeproTech).Чистоту культур проверяли с помощью антитела против FcεR (клон MAR-1; eBioscience) методом проточной цитометрии. Для активации in vitro тучные клетки сначала инкубировали с антителом IgE к динитрофенилу (DNP) (клон SPE-7) в конечной концентрации 0,5 мкг / мл в течение ночи при 37 ° C на фетальной бычьей сыворотке (FBS) — покрытые планшеты с последующим сшиванием рецепторов Fcε путем добавления 100 нг / мл DNP-человеческого сывороточного альбумина к суспензиям клеток (оба реагента от Sigma-Aldrich). Через 30 мин клетки промывали и тучные клетки хранили в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM; Sigma-Aldrich) в течение ночи при 37 ° C на планшетах, покрытых FBS.Высвобождение медиатора воспаления MIP-1α проверяли из бесклеточных супернатантов с помощью коммерческого набора для ELISA (R&D Systems) в соответствии с инструкциями производителя. Отсутствие Syk не оказало большого влияния на развитие и количество нейтрофилов, тромбоцитов или тучных клеток (данные не показаны).

    Биохимические исследования

    Для анализа содержания белка нейтрофилы, тромбоциты и тучные клетки лизировали в 100 мМ NaCl, 30 мМ Na-HEPES (pH 7,4), 20 мМ NaF, 1 мМ Na-EGTA, 1% Triton X-100, 1 мМ. бензамидин, свежеприготовленный 0.1 Ед / мл апротинина, 1: 100 коктейль с ингибитором протеазы млекопитающих, 1: 100 коктейль с ингибитором фосфатазы 2, 1 мМ PMSF и 1 мМ Na 3 VO 4 (все от Sigma-Aldrich). После удаления нерастворимого материала лизаты кипятили в буфере для образцов. Лизаты цельных клеток обрабатывали на SDS-PAGE и проводили иммуноблоттинг с использованием антител против Syk (клон N19; Santa Cruz) или β-актина (клон AC-74; Sigma-Aldrich), а затем вторичных антител, меченных пероксидазой (GE Healthcare). Затем сигнал проявлялся с помощью системы ECL (GE Healthcare) и экспонировался на рентгеновской пленке.

    Представление данных и статистический анализ

    Эксперименты проводились указанное количество раз. Количественные графики и кинетические кривые показывают среднее значение и SEM для всех независимых экспериментов in vitro или для всех отдельных мышей из указанного количества экспериментов. Статистический анализ проводился с помощью программного обеспечения STATISTICA с использованием двухфакторного (факторного) дисперсионного анализа, при этом лечение и генотип были двумя независимыми переменными. В случае кинетических анализов площадь под кривой использовалась для статистического анализа.Значения P ниже 0,05 считались статистически значимыми.

    Результаты

    K / BxN Артрит с переносом сыворотки в Syk

    / Химеры костного мозга

    Чтобы проверить роль Syk в гемопоэтических клетках, мы получили химерных мышей костного мозга путем трансплантации Syk / или контрольных клеток печени дикого типа в смертельно облученных реципиентов. Как показано на рисунке 1A, инъекция артритогенной сыворотки K / BxN в контрольные химеры WT вызвала сильное воспаление голеностопных суставов, тогда как у Syk / химеры костного мозга, которые несут Syk-дефицитные кроветворные ткани.Количественный кинетический анализ клинической оценки артрита (рисунок 1B) или толщины голеностопного сустава (рисунок 1C) показал, что Syk / химеры костного мозга были полностью защищены от развития артрита в этой модели ( p = 3 × 10 −6 и p = 1,3 × 10 −3 соответственно). Эти результаты подтвердили наши предыдущие исследования, показавшие критическую роль Syk в гематопоэтическом компартменте при артрите с переносом сыворотки K / BxN (25).

    Рисунок 1 . Артрит, индуцированный аутоантителами, в химерах костного мозга с дефицитом Syk. Дикий тип (WT) и Syk / химерам костного мозга инъецировали сыворотку BxN (контроль) или K / BxN (артрит) внутрибрюшинно на 0 день. Развитие артрита отслеживалось фотографированием на день 7 (A) , клиническая оценка задних конечностей (B) и измерение толщины голеностопного сустава (C) .На панели (D) показано отсутствие тирозинкиназы Syk в лизатах цельных клеток Syk / нейтрофилов, тромбоцитов и тучных клеток. Фотографии являются репрезентативными, а количественные данные показывают среднее значение и SEM для четырех контрольных и четырех-пяти отдельных мышей, получавших артритную сыворотку, в каждой группе из двух независимых экспериментов. Изображения вестерн-блоттинга представляют два-три независимых эксперимента. См. В тексте фактические значения p .

    Syk экспрессируется в нейтрофилах, тромбоцитах и ​​тучных клетках

    Предыдущие исследования показали роль нейтрофилов, тромбоцитов и тучных клеток в артрите с переносом сыворотки K / BxN (6–10, 34), а также функциональную роль Syk в этих клетках (14, 16, 18–20) . Чтобы подтвердить присутствие Syk в этих клонах и его делецию из Syk / клеток, мы проверили экспрессию Syk в первичных нейтрофилах и тромбоцитах или тучных клетках костного мозга из WT и Syk / химеры костного мозга.Как показано на Рисунке 1D, Syk присутствовал во всех трех типах клеток, полученных из WT, но не Syk / химерах костного мозга (см. Целые блоты на рисунках S1B – D в дополнительных материалах) .

    Эффективность и специфичность удаления Syk из нейтрофилов, тромбоцитов и тучных клеток

    Чтобы проверить роль Syk в зависимости от происхождения, мы обратились к Cre-lox-обусловленной клон-специфической условной делеции Syk. С этой целью мы создали мышей, несущих мутацию Syk flox / flox вместе со специфическим для нейтрофилов MRP8-Cre ( Syk ΔPMN ), специфическим для тромбоцитов PF4-Cre ( Syk ΔPLT ). ) или трансгены Mcpt5-Cre ( Syk ΔMC ), специфичные для тучных клеток.Затем мы выделили нейтрофилы или тромбоциты и культивировали тучные клетки костного мозга от этих животных. Как показано на рисунке 2А, ​​экспрессия Syk была сильно снижена в нейтрофилах Syk ΔPMN , но не была затронута в нейтрофилах Syk ΔPLT или Syk ΔMC . Точно так же Syk отсутствовал в тромбоцитах Syk ΔPLT , но не в Syk ΔPMN или Syk ΔMC (рис. 2В). Наконец, экспрессия Syk была отменена в Syk ΔMC , но не в Syk ΔPMN или Syk ΔPLT тучных клетках (рис. 2C; см. Целые блоты на рис. S2 в дополнительных материалах).Эти результаты подтверждают как эффективность, так и специфичность мутаций Syk ΔPMN , Syk ΔPLT и Syk ΔMC .

    Рисунок 2 . Эффективность и специфичность клон-специфической делеции Syk из разных типов клеток. Эффективность и специфичность делеции клон-специфической делеции тестировали с помощью иммуноблоттинга лизатов целых клеток нейтрофилов (A) , тромбоцитов (B) и тучных клеток (C) , происходящих от дикого типа (WT), Syk. ΔPMN , Syk ΔPLT или Syk ΔMC мышей или от Syk / химеры костного мозга.Кляксы представляют три независимых эксперимента.

    Клон-специфическая делеция Syk отменяет функциональные ответы нейтрофилов, тромбоцитов и тучных клеток

    Чтобы проверить функциональную эффективность клон-специфической делеции Syk, мы также протестировали предположительно Syk-зависимые функциональные ответы нейтрофилов, тромбоцитов и тучных клеток. Высвобождение супероксида нейтрофилов на поверхности фибриногена в присутствии растворимого стимула TNF опосредуется интегринами β 2 предположительно Syk-зависимым образом (19).Как показано на Фигуре 3A, этот ответ был почти полностью заблокирован в нейтрофилах от Syk ΔPMN животных ( p = 0,02). Конвульксин — это токсин змеиного яда, активирующий связанный с Fc-рецептором коллагеновый рецептор GpVI на тромбоцитах Syk-зависимым образом (40, 41). Как показано на Фигуре 3B, конвульксин индуцировал агрегацию WT, но не Syk ΔPLT тромбоцитов ( p = 0,03). Сшивание IgE, связанного с поверхностью тучных клеток, запускает высвобождение различных провоспалительных медиаторов через Fcε-рецепторы Syk-зависимым образом (14).Как показано на Фигуре 3C, высвобождение MIP-1α, индуцированное сшиванием IgE тучных клеток, было отменено мутацией Syk ΔMC ( p = 1,3 × 10 -4 ). Эти результаты показывают, что клон-специфическая делеция Syk из нейтрофилов, тромбоцитов или тучных клеток приводит к ожидаемым функциональным последствиям в этих клетках.

    Рисунок 3 . Syk незаменим для иммунорецепторного тирозинового мотива активации, опосредованного in vitro клеточных ответов нейтрофилов, тромбоцитов и тучных клеток. (A) дикого типа (WT) или Syk ΔPMN нейтрофилов высевали на покрытые фибриногеном поверхности в присутствии TNF-α, и их высвобождение супероксида измеряли с помощью теста восстановления цитохрома c . Контрольные точки данных были вычтены. (B) WT или Syk ΔPLT тромбоцитов были выделены из периферической крови, помечены двумя разными антителами к CD9, конъюгированными с флуорохромом, и активированы конвульксином (CVX) в течение 5 мин. Агрегацию измеряли как процент двойных положительных событий CD9-PE / CD9-APC. (C) WT или Syk ΔMC Тучные клетки, полученные из костного мозга , инкубировали с антителами против DNP IgE с последующей стадией перекрестного связывания рецептора Fcε с DNP-HSA. Уровни MIP-1α определяли из бесклеточного супернатанта с помощью анализа ELISA. Кинетические кривые и графики представляют собой среднее значение и SEM для трех (A, C) или шести (B) образцов из трех независимых экспериментов (A) или двух (B, C) . См. В тексте фактические значения p .ДНП, динитрофенил; HSA, сывороточный альбумин человека, IC, иммунный комплекс.

    Нейтрофильно-специфическое удаление Syk устраняет аутоантител-индуцированный артрит

    Затем мы проверили влияние нейтрофил-специфической делеции Syk на развитие артрита с переносом сыворотки K / BxN. Как показано на фиг. 4A, артритогенная сыворотка K / BxN вызвала видимое развитие артрита у животных WT. Однако у животных Syk ΔPMN не наблюдалось никаких признаков артрита (фигура 4A).Количественный кинетический анализ показал, что мыши Syk ΔPMN были почти полностью защищены от развития клинических признаков артрита (рис. 4B; p = 1,5 × 10 −5 ) и отека лодыжек, вызванного артритом (рис. 4C; ). p = 1,7 × 10 −3 ). Подобные результаты можно было наблюдать при тестировании более крупной когорты химер костного мозга, созданной путем трансплантации клеток костного мозга WT или Syk ΔPMN смертельно облученным реципиентам WT (Фигуры 4D, E; p = 6.2 × 10 −7 и p = 3,2 × 10 −6 соответственно). Эти результаты указывают на критическую роль экспрессии Syk в нейтрофилах для развития индуцированного аутоантителами артрита in vivo .

    Рисунок 4 . Специфическая для нейтрофилов делеция Syk ослабляет экспериментальный артрит. Дикий тип (WT) и Syk ΔPMN интактным животным (A – C) или химерам костного мозга (D, E) внутрибрюшинно в день вводили сыворотку BxN (контроль) или K / BxN (артрит) 0.Развитие артрита сопровождалось фотографированием (A) , клинической оценкой задних конечностей (B, D) и измерением толщины голеностопного сустава (C, E) . Количественные данные показывают среднее значение и стандартное отклонение от трех контрольных и пяти-шести отдельных мышей, получавших артритную сыворотку, на группу из трех независимых экспериментов (B, C) или из пяти контрольных и пяти-семи мышей, обработанных сывороткой от артрита в каждой группе из трех независимых эксперименты (D, E) . См. В тексте фактические значения p .

    Нормальное развитие артрита при специфическом для тромбоцитов делеции Syk

    Boilard et al. Ранее было показано, что генетическая делеция Syk-связанного рецептора коллагена GpVI тромбоцитов сильно снижает развитие артрита в модели переноса сыворотки K / BxN (10), предполагая важную роль экспрессии Syk в тромбоцитах в этой модели (33). Чтобы проверить эту гипотезу экспериментально, мы протестировали артрит с переносом сыворотки K / BxN на мышах Syk ΔPLT , у которых Syk был удален тромбоцит-специфическим образом.Вопреки нашим ожиданиям, делеция Syk, специфичная для тромбоцитов, не повлияла на развитие визуальных признаков артрита в нашей модели (рис. 5A). Количественный кинетический анализ не выявил никакого влияния мутации Syk ΔPLT на клинический внешний вид (Рисунок 5B; p = 0,51) или на увеличение толщины лодыжки (Рисунок 5C; p = 0,76). Аналогичные результаты были получены при использовании химер костного мозга, полученных при трансплантации клеток костного мозга WT или Syk ΔPLT смертельно облученным реципиентам WT (Фигуры 5D, E; p = 0.49 и p = 0,9 соответственно). Эти результаты вместе с отсутствием Syk (рис. 2B) и дефектной Syk-зависимой функциональной активацией (рис. 3B) тромбоцитов Syk ΔPLT указывают на то, что экспрессия Syk в тромбоцитах не требуется для развития сыворотки K / BxN. -трансферный артрит.

    Рисунок 5 . Тромбоцит-специфическая делеция Syk не влияет на артрит, индуцированный аутоантителами. Дикий тип (WT) и Syk ΔPLT интактным животным (A – C) или химерам костного мозга (D, E) внутрибрюшинно в день вводили сыворотку BxN (контроль) или K / BxN (артрит) 0.Развитие артрита сопровождалось фотографированием (A) , клинической оценкой задних конечностей (B, D) и измерением толщины голеностопного сустава (C, E) . Количественные данные показывают среднее значение и SEM для трех контрольных и пяти отдельных мышей, получавших артритную сыворотку на группу из трех независимых экспериментов (B, C) или из шести контрольных и восьми-девяти мышей, обработанных сывороткой от артрита на группу из трех независимых экспериментов (Г, Д) . См. В тексте фактические значения p .

    Делеция Syk, специфичная для тучных клеток, не влияет на артрит, индуцированный аутоантителами

    Тучные клетки являются одной из основных мишеней функции Syk (14, 18), и они также были предложены для участия в развитии артрита с переносом сыворотки K / BxN (9, 34). Таким образом, мы предположили, что экспрессия Syk в тучных клетках может быть необходима для развития артрита в этой модели. С этой целью мы протестировали развитие артрита с переносом сыворотки K / BxN на мышах Syk ΔMC .Как показано на фиг. 6A, мутация Syk ΔMC не повлияла на развитие видимых признаков артрита в нашей модели. Количественный кинетический анализ не выявил какого-либо торможения развития артрита ни при оценке клинических признаков артрита (Рисунок 6B; p = 0,38), ни при измерении вызванного артритом увеличения толщины лодыжки (Рисунок 6C; p = 0,37). Напротив, наблюдалась даже тенденция к более раннему развитию артрита у животных Syk ΔMC (Фигуры 6B, C), что повышает вероятность отрицательной роли Syk, экспрессируемого в тучных клетках.Из-за радиорезистентности тучных клеток химеры костного мозга не были созданы с использованием мышей Syk ΔMC . Отсутствие подавления артрита у животных Syk ΔMC вместе с резким снижением экспрессии Syk (рис. 2C) и Syk-опосредованных функциональных ответов (рис. 3C) в тучных клетках Syk ΔMC указывает на то, что экспрессия Syk в тучных клетках незаменима для развития артрита в модели переноса сыворотки K / BxN.

    Рисунок 6 . Специфичная для тучных клеток делеция Syk не влияет на эффекторную фазу экспериментального артрита. Животным дикого типа (WT) и Syk ΔMC животным вводили сыворотку BxN (контроль) или K / BxN (артрит) внутрибрюшинно в день 0. Развитие артрита отслеживали путем фотографирования (A) , клиническая оценка задних конечностей. конечностей (B) , и измерения толщины щиколотки (C) . Количественные данные показывают среднее и стандартное отклонение от семи до девяти контрольных и от двенадцати до тринадцати отдельных мышей, получавших артритную сыворотку, в каждой группе из четырех независимых экспериментов.См. В тексте фактические значения p .

    Обсуждение

    Тирозинкиназа Syk критически участвует в различных процессах воспалительных заболеваний, включая развитие моделей артрита и дерматита, индуцированного аутоантителами (11, 17, 25). Учитывая широкую экспрессию Syk практически во всех гематопоэтических клонах (11), понимание функции Syk в зависимости от клонов имеет особое значение. Наши результаты, представленные в этой работе, показывают, что из трех наиболее известных линий, экспрессирующих Syk, предположительно участвующих в развитии артрита, индуцированного аутоантителами, экспрессия Syk в нейтрофилах является критической, тогда как в тромбоцитах или тучных клетках она необходима для развития K / BxN Артрит с переносом сыворотки.

    Мы и другие показали, что Syk играет критическую роль в различных функциональных ответах нейтрофилов (16, 17, 19, 42, 43), не влияя на развитие нейтрофилов (17, 19). Также было показано, что нейтрофилы имеют решающее значение для развития артрита, индуцированного аутоантителами (6-8), вероятно, по крайней мере частично, за счет опосредованной IgG IC активации Fcγ-рецепторов, экспрессируемых на поверхности нейтрофильных клеток (29), а также еще не полностью изученными начальными сосудистыми изменениями, опосредованными нейтрофилами (8).Основываясь на этих исследованиях, мы предположили, что экспрессия Syk в нейтрофилах имеет решающее значение для развития индуцированного аутоантителами артрита. Наши результаты подтвердили эту гипотезу, и они также соответствовали предыдущим исследованиям других групп (32) и нашему собственному анализу нейтрофил-специфической делеции адапторного белка CARD9, предположительно нижестоящего эффектора Syk (31). Хотя в настоящее время не до конца понятно, как Syk внутри нейтрофилов участвует в развитии аутоантител-индуцированного артрита, наши предыдущие исследования, показывающие дефектное высвобождение провоспалительных медиаторов Syk-дефицитными нейтрофилами, несмотря на нормальную внутреннюю миграционную способность клеток (17, 19, 31), предполагают, что Syk, подобно киназам семейства Src (29), участвует в усилении рекрутирования нейтрофилов провоспалительными медиаторами нейтрофилов (44).

    В отличие от наших исследований делеции специфических нейтрофилов, наши эксперименты по делеции специфических тромбоцитов не подтвердили нашу гипотезу, основанную на литературных данных. Хотя Syk не требуется для развития тромбоцитов (20), он играет решающую роль в различных функциях тромбоцитов (11), включая α IIb β 3 интегрин-зависимое распространение тромбоцитов (20), ответы, опосредованные гем-ITAM-связанным C лектина CLEC-2 (45), а также передачи сигналов ниже GpVI, коллагенового рецептора тромбоцитов, связанного с ITAM (40, 41).GpVI тесно связан с Fcα-рецепторами и напрямую связан с ITAM-содержащей γ-цепью Fc-рецептора (FcRγ) и предположительно сигнализирует через нее (40, 41, 46–49). Было показано, что тромбоциты и, в частности, GpVI играют решающую роль в развитии артрита с переносом сыворотки K / BxN (10), что позволяет предположить, что экспрессия Syk ниже GpVI тромбоцитов критически участвует в развитии артрита в этой модели (33). Наши результаты нормального развития артрита при тромбоцит-специфической делеции Syk (Рисунок 5), несмотря на практически полное отсутствие Syk в тромбоцитах (Рисунок 2) и полностью нарушенную GpVI-опосредованную функцию тромбоцитов in vitro (Рисунок 3), опровергают эту гипотезу.Есть несколько возможных объяснений этих выводов. Хотя GpVI связан с ITAM-содержащим адаптером FcRγ, он может быть способен обходить путь ITAM-Syk при определенных условиях, используя FcRγ в качестве шаперона, необходимого для экспрессии на клеточной поверхности, но не в качестве ITAM-опосредованного сигнального адаптера. Было также высказано предположение, что тромбоциты взаимодействуют с фибробластоподобными синовиоцитами ЦОГ-1-зависимым образом, который не зависит от экспрессии тромбоцитов GpVI или FcRγ (50). Этот путь может быть способен компенсировать дефектный путь GpVI-FcRγ-Syk при делеции Syk, специфичной для тромбоцитов.Мы также не можем исключить возможность того, что GpVI необходимо экспрессировать в не тромбоцитарном клоне, чтобы поддерживать индуцированный аутоантителами артрит у мышей. Наконец, технические детали, такие как роль небольшой оставшейся экспрессии Syk после Cre-опосредованной делеции Syk или различные экспериментальные условия, также могут объяснять разные выводы, сделанные из нашего исследования и из тех, которые предполагают критическую роль GpVI тромбоцитов. Путь FcRγ – Syk при артрите, индуцированном аутоантителами (10, 33).Следует также отметить, что наше исследование было сосредоточено на видимых признаках артрита, и поэтому мы не можем исключить возможность того, что экспрессия Syk в тромбоцитах модулирует процесс воспаления по механизму, который не ясно виден при макроскопическом исследовании.

    В третьей части нашего исследования мы проверили роль Syk в тучных клетках при артрите, индуцированном аутоантителами. Было показано, что Syk играет критическую роль в функции тучных клеток, не влияя на выживаемость тучных клеток (14, 18), и было предложено, чтобы тучные клетки были важными участниками в развитии индуцированного аутоантителами артрита (9).Таким образом, мы предположили, что экспрессия Syk в тучных клетках может играть роль в развитии артрита с переносом сыворотки K / BxN. Наши результаты, показывающие нормальное развитие артрита на этой модели после делеции Syk, специфичной для тучных клеток (фиг. 6), несмотря на сильно сниженную экспрессию Syk (фиг. 2) и дефектные Syk-опосредованные функциональные ответы (фиг. 3) в тучных клетках, противоречат этой возможности. Есть несколько возможных объяснений этих выводов. Поскольку механизм того, как тучные клетки вносят вклад в патогенез заболевания, вызванного аутоантителами IgG, не полностью изучен, возможно, что тучные клетки используют Syk-независимый путь передачи сигнала во время артрита с переносом сыворотки K / BxN (например,g., когда тучные клетки не активируются напрямую IC, содержащими аутоантитела, а скорее косвенно через Syk-независимые хемокиновые, цитокиновые или PRR пути). Следует также отметить, что последующие исследования поставили под сомнение критическую роль тучных клеток в развитии аутоантител-индуцированного артрита (51, 52), указывая на трудности интерпретации данных, полученных с различными линиями мышей с дефицитом тучных клеток. Действительно, наши ограниченные предварительные исследования также показали, что роль тучных клеток сильно зависит от экспериментальных условий, используемых для запуска индуцированного аутоантителами артрита у мышей (Z.Якус и А.М., неопубликованные наблюдения). Наконец, учитывая, что наши эксперименты были сосредоточены на видимых признаках воспаления, мы не можем исключить возможность того, что экспрессия Syk в тучных клетках может модулировать развитие артрита или общий процесс воспаления способом, который не ясно виден при макроскопической оценке.

    Помимо нейтрофилов, тромбоцитов и тучных клеток Syk также экспрессируется в других клонах, возможно, участвующих в развитии артрита. B-клетки являются одними из самых известных клонов, требующих функции Syk (12, 13).Однако маловероятно, что Syk, экспрессируемый в B-клетках, способствует артриту с переносом сыворотки K / BxN, поскольку эта модель имитирует пост-иммунизационную эффекторную фазу аутоиммунного артрита и развивается нормально даже в отсутствие B-клеток в μMT-дефицитных. или мыши с дефицитом Rag (3). Было высказано предположение, что макрофаги играют важную роль в развитии артрита с переносом сыворотки K / BxN (53). К сожалению, доступные в настоящее время методы не позволяют должным образом проанализировать релевантность in vivo экспрессии Syk в макрофагах из-за ограниченного спектра / специфичности доступных линий мышей, экспрессирующих Cre-экспрессию макрофагов (54).Ранее мы показали, что Syk критически участвует в развитии и функционировании остеокластов (23). Хотя понимание роли Syk в эрозиях костей, вызванных артритом, имеет очевидную важность, этот вопрос выходит за рамки настоящего исследования, посвященного воспалительному аспекту процессов заболевания, вызванного аутоантителами.

    Взятые вместе, наши результаты обеспечивают понимание роли Syk в индуцированном аутоантителами артрите на клеточном уровне. Наши результаты указывают на критическую роль экспрессии Syk в нейтрофилах, но опровергают предыдущие предположения о роли Syk в тромбоцитах и ​​выступают против роли экспрессии Syk в тучных клетках.Эти результаты внесут большой вклад в понимание патомеханизма процессов заболевания, опосредованных аутоантителами, на клеточном и молекулярном уровне.

    Заявление об этике

    Все эксперименты на животных были одобрены Наблюдательным советом по экспериментам на животных Университета Земмельвейса.

    Авторские взносы

    TN и AM разработали исследование, разработали эксперименты и написали рукопись. TN, KF, KS, OV и LK-P проводили эксперименты.TN, KF и AM проанализировали и интерпретировали данные. А.М. курировал проект.

    Заявление о конфликте интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Рецензент KB и редактор отдела заявили о своей общей принадлежности.

    Благодарности

    Благодарим Эдину Симон за квалифицированную техническую помощь; Габора Банхеджи за доступ к оборудованию; Дайан Матис, Кристоф Бенуа, Виктор Тибулевич, Эммануэль Пассег, Аксель Роерс и Александр Тараховский за трансгенных животных.Эта работа была поддержана программой Lendület Венгерской академии наук (LP2013-66 / 2013 для AM), Венгерским национальным бюро исследований, разработок и инноваций (NVKP_16-2016-1-0039 для AM), Министерством национальной экономики Венгрии. Экономика (VEKOP-2.3.2-16-2016-00002 для AM) и исследовательские стипендии Яноша Бойяи Венгерской академии наук (для TN и KF). AM был получателем стипендии для старших исследователей Wellcome Trust International (грант № 087782).

    Дополнительные материалы

    Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу http: // www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2018.00555/full#supplementary-material.

    Рисунок S1 . Проточно-цитометрический анализ химер костного мозга и изображения вестерн-блоттинга с более подробной информацией. (A) Проточно-цитометрический анализ CD45.2-положительных нейтрофилов донорского происхождения в периферической крови дикого типа (WT) и Syk ΔPMN химер костного мозга через 4 недели после трансплантации костного мозга. (B – D) Подробные изображения вестерн-блоттинга, показывающие экспрессию Syk в нейтрофилах (B) , тромбоцитах (C) или лизатах тучных клеток (D) из Фиг.1D.

    Рисунок S2 . Подробные изображения вестерн-блоттинга, показывающие эффективность и специфичность клон-специфической делеции Syk в лизатах целых клеток нейтрофилов (A) , тромбоцитов (B) и тучных клеток (C) из Фиг.2.

    Список литературы

    2. Кускофф В., Корганов А.С., Дюшатель В., Деготт С., Бенуа С., Матис Д. Органоспецифическое заболевание, спровоцированное системным аутоиммунитетом. Cell (1996) 87: 811–22. DOI: 10.1016 / S0092-8674 (00) 81989-3

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    3.Корганов А.С., Джи Х., Мангиалайо С., Дюшатель В., Пеланда Р., Мартин Т. и др. От системной самореактивности Т-клеток до органоспецифических аутоиммунных заболеваний через иммуноглобулины. Иммунитет (1999) 10: 451–61. DOI: 10.1016 / S1074-7613 (00) 80045-X

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    4. Мацумото И., Стауб А., Бенуа С., Матис Д. Артрит, спровоцированный сцепленным распознаванием гликолитического фермента Т- и В-клетками. Science (1999) 286: 1732–5. DOI: 10.1126 / наука.286.5445.1732

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    5. Джи Х, Омура К., Махмуд У, Ли Д.М., Хофхуис Ф.М., Бокл С.А. и др. Артрит критически зависит от врожденной иммунной системы игроков. Иммунитет (2002) 16: 157–68. DOI: 10.1016 / S1074-7613 (02) 00275-3

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    6. Випке Б.Т., Аллен П.М. Существенная роль нейтрофилов в инициации и прогрессировании мышиной модели ревматоидного артрита. J Immunol (2001) 167: 1601–8. DOI: 10.4049 / jimmunol.167.3.1601

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    8. Бинштадт Б.А., Пател П.Р., Аленкар Х., Нигрович П.А., Ли Д.М., Махмуд У. и др. Особенности сосудистой сети могут способствовать органной специфичности аутоиммунной атаки. Nat Immunol (2006) 7: 284–92. DOI: 10.1038 / ni1306

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    9. Ли Д.М., Друг Д.С., Гуриш М.Ф., Бенуа К., Матис Д., Бреннер МБ.Тучные клетки: клеточная связь между аутоантителами и воспалительным артритом. Science (2002) 297: 1689–92. DOI: 10.1126 / science.1073176

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    10. Бойлард Э., Нигрович П.А., Лараби К., Уоттс Г.Ф., Коблин Дж. С., Вайнблатт МЭ и др. Тромбоциты усиливают воспаление при артрите за счет производства коллаген-зависимых микрочастиц. Science (2010) 327: 580–3. DOI: 10.1126 / science.1181928

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    12.Тернер М., Ми П.Дж., Костелло П.С., Уильямс О., Прайс А.А., Дадди Л.П. и др. Перинатальная летальность и блокировка развития В-клеток у мышей, лишенных тирозинкиназы Syk. Nature (1995) 378: 298–302. DOI: 10.1038 / 378298a0

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    13. Cheng AM, Rowley B., Pao W., Hayday A, Bolen JB, Pawson T. Syk тирозинкиназа, необходимая для жизнеспособности мышей и развития B-клеток. Nature (1995) 378: 303–6. DOI: 10.1038 / 378303a0

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    14.Костелло П.С., Тернер М., Уолтерс А.Е., Каннингем С.Н., Бауэр П.Х., Даунвард Дж. И др. Критическая роль тирозинкиназы Syk в передаче сигналов через высокоаффинный рецептор IgE тучных клеток. Онкоген (1996) 13: 2595–605.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    15. Кроули М.Т., Костелло П.С., Фитцер-Аттас К.Дж., Тернер М., Мэн Ф., Лоуэлл С. и др. Критическая роль Syk в передаче сигнала и фагоцитозе, опосредованном рецепторами Fcγ на макрофагах. J Exp Med (1997) 186: 1027–39.DOI: 10.1084 / jem.186.7.1027

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    16. Кифер Ф., Брумелл Дж., Аль-Алави Н., Латур С., Ченг А., Вейлетт А. и др. Тирозинкиназа Syk необходима для передачи сигналов рецептора Fcγ в макрофагах и нейтрофилах. Mol Cell Biol (1998) 18: 4209-20. DOI: 10.1128 / MCB.18.7.4209

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    17. Немет Т., Виртик О, Ситару С., Моксаи А. Тирозинкиназа Syk требуется для воспаления кожи в модели приобретенного буллезного эпидермолиза на мышах in vivo. J Invest Dermatol (2017) 137: 2131–9. DOI: 10.1016 / j.jid.2017.05.017

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    18. Mócsai A., Zhang H, Jakus Z, Kitaura J, Kawakami T., Lowell CA. Передача сигналов рецептора, связанного с G-белком, в Syk-дефицитных нейтрофилах и тучных клетках. Кровь (2003) 101: 4155–63. DOI: 10.1182 / кровь-2002-07-2346

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    20. Обергфелл А., Это К., Мочсаи А., Буэнсусесо С., Мурс С.Л., Брюгге Дж. С. и др.Координированные взаимодействия киназ Csk, Src и Syk с αIIbβ3 инициируют передачу сигналов интегрина цитоскелету. J Cell Biol (2002) 157: 265–75. DOI: 10.1083 / jcb.200112113

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    21. Jakus Z, Fodor S, Abram CL, Lowell CA, Mócsai A. Иммунорецепторная передача сигналов интегринами β2 и β3. Trends Cell Biol (2007) 17: 493–501. DOI: 10.1016 / j.tcb.2007.09.001

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    22.Werninghaus K, Babiak A, Gross O, Holscher C, Dietrich H, Agger EM, et al. Адъювантность синтетического аналога пуповинного фактора для субъединичной вакцинации против Mycobacterium tuberculosis требует FcRγ-Syk-Card9-зависимой активации врожденного иммунитета. J Exp Med (2009) 206: 89–97. DOI: 10.1084 / jem.20081445

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    23. Mócsai A., Humphrey MB, Van Ziffle JA, Hu Y, Burghardt A., Spusta SC, et al. Иммуномодулирующие адаптерные белки DAP12 и γ-цепь рецептора Fc (FcRγ) регулируют развитие функциональных остеокластов посредством тирозинкиназы Syk. Proc Natl Acad Sci U S. A (2004) 101: 6158–63. DOI: 10.1073 / pnas.0401602101

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    24. Хирахаши Дж., Мекала Д., Ван Зиффл Дж., Сяо Л., Саффарипур С., Вагнер Д. Д. и др. Передача сигналов Mac-1 через киназы семейства Src и Syk приводит к эластазозависимой тромбогеморрагической васкулопатии. Иммунитет (2006) 25: 271–83. DOI: 10.1016 / j.immuni.2006.05.014

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    26.Гросс О, Поек Х., Бшайдер М., Достерт С., Ханнесшлагер Н., Эндрес С. и др. Сигнал Syk-киназы соединяется с воспалением Nlrp3 для противогрибковой защиты хозяина. Nature (2009) 459: 433–6. DOI: 10.1038 / nature07965

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    27. Abtahian F, Guerriero A, Sebzda E, Lu MM, Zhou R, Mócsai A, et al. Регулирование разделения кровеносных и лимфатических сосудов с помощью сигнальных белков SLP-76 и Syk. Science (2003) 299: 247–51.DOI: 10.1126 / science.1079477

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    29. Ковач М., Немет Т., Якус З., Ситару С., Саймон Е., Футози К. и др. Киназы семейства Src Hck, Fgr и Lyn имеют решающее значение для образования воспалительной среды in vivo, не участвуя непосредственно в рекрутинге лейкоцитов. J Exp Med (2014) 211: 1993–2011. DOI: 10.1084 / jem.20132496

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    30. Jakus Z, Simon E, Frommhold D, Sperandio M, Mócsai A.Критическая роль фосфолипазы Cγ2 в функциях нейтрофилов, опосредованных интегрином и рецептором Fc, и эффекторной фазе аутоиммунного артрита. J Exp Med (2009) 206: 577–93. DOI: 10.1084 / jem.20081859

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    31. Немет Т., Футози К., Ситару С., Руланд Дж., Мочсаи А. Нейтрофил-специфичная делеция регулятора экспрессии гена CARD9 подавляет воспаление, индуцированное аутоантителами, in vivo. Нац Коммун (2016) 7: 11004. DOI: 10.1038 / ncomms11004

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    32.Эллиотт Э.Р., Ван Зиффл Дж. А., Скапини П., Салливан Б. М., Локсли Р. М., Лоуэлл, Калифорния. Удаление Syk в нейтрофилах предотвращает иммунный комплексный артрит. J Immunol (2011) 187: 4319–30. DOI: 10.4049 / jimmunol.1100341

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    34. Нигрович П.А., Бинштадт Б.А., Монах П.А., Йонсен А., Гуриш М., Ивакура Ю. и др. Тучные клетки способствуют инициированию аутоантител-опосредованного артрита через IL-1. Proc Natl Acad Sci U S A (2007) 104: 2325–30.DOI: 10.1073 / pnas.0610852103

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    35. Passegue E, Wagner EF, Weissman IL. Дефицит JunB приводит к миелопролиферативному нарушению, вызванному гемопоэтическими стволовыми клетками. Cell (2004) 119: 431–43. DOI: 10.1016 / j.cell.2004.10.010

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    36. Тидт Р., Шомбер Т., Хао-Шен Х., Skoda RC. Трансгенные мыши Pf4-Cre позволяют генерировать нокауты генов, ограниченных по клону, для изучения функции мегакариоцитов и тромбоцитов in vivo. Кровь (2007) 109: 1503–6. DOI: 10.1182 / кровь-2006-04-020362

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    37. Шолтен Дж., Хартманн К., Гербаулет А., Криг Т., Мюллер В., Теста Г. и др. Cre / loxP-зависимая рекомбинация in vivo, специфичная для тучных клеток. Transgenic Res (2008) 17: 307-15. DOI: 10.1007 / s11248-007-9153-4

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    38. Сайджо К., Шмедт К., Су И.Х., Карасуяма Х., Лоуэлл К.А., Рет М. и др.Существенная роль протеинтирозинкиназ семейства Src в активации NF-κB во время развития В-клеток. Nat Immunol (2003) 4: 274–9. DOI: 10.1038 / ni893

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    39. Немет Т., Футози К., Хабли С., Браунс М.Р., Якоб С.М., Ковач М. и др. Функции нейтрофилов и аутоиммунный артрит в отсутствие p190RhoGAP: создание и анализ новой нулевой мутации у мышей. J Immunol (2010) 185: 3064–75. DOI: 10.4049 / jimmunol.03

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    40.Meinders M, Hoogenboezem M, Scheenstra MR, De Cuyper IM, Papadopoulos P, Németh T. и др. Влияние мегакариоцит-специфической потери Gata1 на мегакариопоэз и компартмент гематопоэтических предшественников. PLoS One (2016) 11: e0154342. DOI: 10.1371 / journal.pone.0154342

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    42. Шимейнски Дж., Синдрилару А., Фроммхольд Д., Сперандио М., Герстл Р., Затем С. и др. Сайт связывания Vav нерецепторной тирозинкиназы Syk в Tyr 348 является критическим для опосредованной интегрином β2 (CD11 / CD18) миграции нейтрофилов. Кровь (2006) 108: 3919–27. DOI: 10.1182 / кровь-2005-12-030387

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    43. Фроммхольд Д., Маннигель И., Шимейнски Дж., Мочаи А., Пешл Дж., Вальцог Б. и др. Тирозинкиназа селезенки Syk имеет решающее значение для устойчивой адгезии лейкоцитов во время воспаления in vivo. BMC Immunol (2007) 8:31. DOI: 10.1186 / 1471-2172-8-31

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    45. Сузуки-Иноуэ К., Фуллер Г.Л., Гарсия А., Эбле Дж. А., Польманн С., Иноуэ О. и др.Новый Syk-зависимый механизм активации тромбоцитов лектиновым рецептором C-типа CLEC-2. Кровь (2006) 107: 542–9. DOI: 10.1182 / кровь-2005-05-1994

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    46. Гиббинс Дж. М., Окума М., Фарндейл Р., Барнс М., Уотсон С. П.. Гликопротеин VI является рецептором коллагена в тромбоцитах, который лежит в основе фосфорилирования тирозина γ-цепи рецептора Fc. FEBS Lett (1997) 413: 255–9. DOI: 10.1016 / S0014-5793 (97) 00926-5

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    47.Цуджи М., Эзуми Ю., Араи М., Такаяма Х. Новая ассоциация γ-цепи рецептора Fc с гликопротеином VI и их совместная экспрессия в качестве рецептора коллагена в тромбоцитах человека. J Biol Chem (1997) 272: 23528-31. DOI: 10.1074 / jbc.272.38.23528

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    48. Клеметсон Дж. М., Полгар Дж., Магненат Е., Уэллс Т. Н., Клеметсон К. Дж.. Гликопротеин VI рецептора коллагена тромбоцитов является членом суперсемейства иммуноглобулинов, тесно связанных с FcαR и рецепторами естественных киллеров. J Biol Chem (1999) 274: 29019-24. DOI: 10.1074 / jbc.274.41.29019

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    50. Бойлард Э., Лараби К., Шнайдер Р., Джейкобс К., Фарндейл Р. В., Уэр Дж. И др. Тромбоциты участвуют в синовите через Цокс-1-зависимый синтез простациклина независимо от образования микрочастиц. J Immunol (2011) 186: 4361–6. DOI: 10.4049 / jimmunol.1002857

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    51.Чжоу Дж.С., Син В., Друг Д.С., Остин К.Ф., Кац Х.Р. Дефицит тучных клеток у мышей KitW-sh не влияет на опосредованный антителами артрит. J Exp Med (2007) 204: 2797–802. DOI: 10.1084 / jem.20071391

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    52. Фейерабенд Т. Б., Вайзер А., Тиц А., Стассен М., Харрис Н., Копф М. и др. Cre-опосредованное удаление клеток оспаривает вклад тучных клеток в модели аутоиммунитета, опосредованного антителами и Т-клетками. Иммунитет (2011) 35: 832–44. DOI: 10.1016 / j.immuni.2011.09.015

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    53. Соломон С., Раджасекаран Н., Джейси-Уолдер Е., Снаппер С.Б., Илджес Х. Решающая роль макрофагов в патологии артрита, индуцированного сывороткой K / BxN. Eur J Immunol (2005) 35: 3064–73. DOI: 10.1002 / eji.200526167

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    54. Абрам С.Л., Роберж Г.Л., Ху Y, Лоуэлл, Калифорния. Сравнительный анализ эффективности и специфичности штаммов с делецией миелоид-Cre с использованием репортерных мышей ROSA-EYFP. J Immunol Methods (2014) 408: 89–100. DOI: 10.1016 / j.jim.2014.05.009

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    боль, прорастание нервов и ремоделирование суставов

    % PDF-1.6 % 1 0 объект > эндобдж 2 0 obj > поток 2020-09-18T08: 49: 29 + 05: 30Springer2020-09-18T09: 53: 52 + 02: 002020-09-18T09: 53: 52 + 02: 00application / pdfhttps: //doi.org/10.1038/s41598- 020-72441-5

  • Nature Publishing Group UK
  • Научные отчеты, https: // doi.org / 10.1038 / s41598-020-72441-5
  • Невропатический фенотип трансгенной мыши K / BxN со спонтанным артритом: боль, разрастание нервов и ремоделирование суставов
  • Жилсон Гонсалвеш душ Сантуш
  • Хуан Мигель Хименес-Андраде
  • Сара А. Воллер
  • Энрикета Муньос-Ислас
  • Марта Беатрис Рамирес-Росас
  • Нобуко Охаши
  • Глаусилен Феррейра Катроли
  • Юя Фудзита
  • Тони Л.Якш
  • Марипат Корр
  • 10.1038 / s41598-020-72441-52010-04-23 истинно
  • springer.com
  • springerlink.com
  • https://doi.org/10.1038/s41598-020-72441-510.1038/s41598-020-72441-52045-2322journalНаучные отчетыАвтор (ы) 2010-04-23true10.1038 / s41598-020-72441-5noindex
  • springer. com
  • springerlink.com
  • VoRuuid: 3c2e5f7e-9a4c-4e50-bb4a-a3a0fea23accuuid: 0666d71d-b99a-4885-b003-9e36e5381c78default1
  • преобразовано 30
  • Библиотека Adobe PDF 15.0; изменено с помощью iText® 5.3.5 © 2000-2012 1T3XT BVBA (SPRINGER SBM; лицензионная версия) 2B
  • http://ns.adobe.com/pdfx/1.3/pdfxAdobe Информация о документе Схема расширения PDF
  • externalMirrors crossmark: MajorVersionDateCrossmarkMajorVersionDateText 90
  • externalMirrors crossmark: CrossmarkDomainExclusiveCrossmarkDomainExclusiveText
  • Внутренние зеркала Крест: DOIdoiText
  • externalMirrors crossmark: CrosMarkDomainsCrossMarkDomainsseq Text
  • internal — объект имени, указывающий, был ли документ изменен для включения в него информации о перехвате; текст
  • .
  • внутренний идентификатор стандарта PDF / X GTS_PDFXVersionText
  • внутренний Уровень соответствия стандарта PDF / X GTS_PDFXConformanceText
  • внутренняя Компания, создающая PDF-файлCompanyText
  • internal Дата последнего изменения документа SourceModifiedText
  • http: // crossref.org / crossmark / 1.0 / crossmarkCrossmark Schema
  • internal Обычно то же, что и prism: doiDOIText
  • external — дата публикации публикации.
  • internalCrossmarkDomainExclusiveCrossmarkDomainExclusiveText
  • internalCrossMarkDomainsCrossMarkDomainsseq Text
  • http://prismstandard.org/namespaces/basic/2.0/prismPrism Схема
  • externalЭтот элемент предоставляет URL-адрес статьи или единицы контента.Платформа атрибутов необязательно разрешена для ситуаций, в которых необходимо указать несколько URL-адресов. PRISM рекомендует использовать вместе с этим элементом подмножество значений платформы PCV, а именно «мобильный» и «Интернет». ПРИМЕЧАНИЕ. PRISM не рекомендует использовать значение #other, разрешенное в управляемом словаре платформы PRISM. Вместо использования #other обратитесь к группе PRISM по адресу [email protected], чтобы запросить добавление вашего термина в словарь, контролируемый платформой.urlURI
  • external — цифровой идентификатор объекта для статьи. DOI также может использоваться как идентификатор dc :. Если используется в качестве идентификатора dc: identifier, форма URI должна быть захвачена, а пустой идентификатор также должен быть захвачен с помощью prism: doi. Если в качестве требуемого идентификатора dc: identifier используется альтернативный уникальный идентификатор, то DOI следует указывать как чистый идентификатор только в пределах prism: doi. Если URL-адрес, связанный с DOI, должен быть указан, тогда prism: url может использоваться вместе с prism: doi для предоставления конечной точки службы (т.е.е. URL-адрес). doiText
  • externalISSN для электронной версии проблемы, в которой встречается ресурс. Разрешает издателям включать второй ISSN, идентифицирующий электронную версию проблемы, в которой возникает ресурс (следовательно, e (lectronic) Issn. Если используется, prism: eIssn ДОЛЖЕН содержать ISSN электронной версии .issnText
  • внутренний Номер тома Объем Текст
  • внутренний Номер выпуска Номер Текст
  • internalStarting pagestartingPageText
  • internalEnding pageendingPageText
  • external Тип агрегирования определяет единицу агрегирования для коллекции контента.Комментарий PRISM рекомендует использовать словарь с контролируемым типом агрегирования PRISM для предоставления значений для этого элемента. Примечание: PRISM не рекомендует использовать значение #other, разрешенное в настоящее время в этом контролируемом словаре. Вместо использования #other обратитесь к группе PRISM по адресу [email protected], чтобы запросить добавление вашего термина в словарь с контролируемым типом агрегирования. aggregationTypeText
  • external Название журнала или другого издания, в котором был / будет опубликован ресурс.Обычно это используется для предоставления названия журнала, в котором появилась статья, в качестве метаданных для статьи, а также такой информации, как название статьи, издатель, том, номер и дата обложки. Примечание. По названию публикации можно различать печатный журнал и онлайн-версию, если названия различаются, например, «magazine» и «magazine.com». PublishingNameText
  • внешний
  • http: // ns.adobe.com/pdf/1.3/pdf Adobe PDF Schema
  • internal Объект имени, указывающий, был ли документ изменен для включения информации о треппинге TrappedText
  • http://ns.adobe.com/xap/1.0/mm/xmpMMXMP Схема управления носителями
  • Внутренний идентификатор на основе UUID для конкретного воплощения документа InstanceIDURI
  • внутренний — Общий идентификатор для всех версий и представлений документа.
  • внутренний — Общий идентификатор для всех версий и представлений документа.Оригинальный документ IDURI
  • internal Ссылка на исходный документ, на основе которого он создан. Это минимальная ссылка; недостающие компоненты можно считать неизменными. Например, для новой версии может потребоваться только указать идентификатор экземпляра и номер версии предыдущей версии, или для воспроизведения может потребоваться только указать идентификатор экземпляра и класс воспроизведения оригинала.
  • Обозначает часть документа.Это может быть позиция, в которой документ был изменен с момента последней истории событий (stEvt: changed). Для ресурса в списке xmpMM: Ingredients ResourceRef использует этот тип для идентификации как части содержащего документа, которая ссылается на ресурс, так и части указанного ресурса, на которую имеется ссылка. Http://ns.adobe.com /xap/1.0/sType/Part#stPartPart
  • http://www.aiim.org/pdfa/ns/id/pdfaidPDF/A ID Schema
  • internalPart of PDF / A standardpartInteger
  • внутренняя Поправка к стандарту PDF / A amdText
  • внутренний Уровень соответствия стандарту PDF / A Текст
  • http: // www.niso.org/schemas/jav/1.0/javNISO
  • external Значения для версии статьи журнала являются одним из следующих: AO = Авторский оригинал SMUR = Представленная рукопись на рассмотрении AM = принятая рукопись P = Доказательство VoR = версия записи CVoR = Исправленная версия записи EVoR = Расширенная версия Recordjournal_article_versionClosed Выбор текста
  • конечный поток эндобдж 3 0 obj > эндобдж 7 0 объект [9 0 R 10 0 R 11 0 R 12 0 R 13 0 R 14 0 R 15 0 R] эндобдж 9 0 объект > / Подтип / Ссылка / Назначение (41598_2020_72441_Article.indd: CR17: 85) / F 4 / Type / Annot / H / N / Border [0 0 0] / AP> / Rect [305.286 201.264 310.986 189.123] >> эндобдж 10 0 obj > / Subtype / Link / Dest (41598_2020_72441_Article.indd: CR19: 89) / F 4 / Type / Annot / H / N / Border [0 0 0] / AP> / Rect [312.362 201.264 318.062 189.123] >> эндобдж 11 0 объект > / Subtype / Link / Dest (41598_2020_72441_Article.indd: CR20: 91) / F 4 / Type / Annot / H / N / Border [0 0 0] / AP> / Rect [319.438 201.264 325.138 189.123] >> эндобдж 12 0 объект > / Subtype / Link / Dest (41598_2020_72441_Article.indd: Fig1: 26) / F 4 / Type / Annot / H / N / Border [0 0 0] / AP> / Rect [538.478 129,381 542,797 117,123] >> эндобдж 13 0 объект > / Subtype / Link / Dest (41598_2020_72441_Article.indd: Fig1: 26) / F 4 / Type / Annot / H / N / Border [0 0 0] / AP> / Rect [193.586 99.2636 197.906 87.1226] >> эндобдж 14 0 объект > / Subtype / Link / Dest (41598_2020_72441_Article.indd: Fig1: 26) / F 4 / Type / Annot / H / N / Border [0 0 0] / AP> / Rect [171.412 79.2636 175.732 67.1226] >> эндобдж 15 0 объект > / Subtype / Link / Dest (41598_2020_72441_Article.indd: Fig1: 26) / F 4 / Type / Annot / H / N / Border [0 0 0] / AP> / Rect [343,129 79,2636 347.449 67.1226] >> эндобдж 6 0 obj > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / Font> / XObject >>> эндобдж 4 0 obj > поток xZ [s7d aM3 # _qZ

    > 75 \ vH], {s΁A /) \ $) b ~ z, = U * JRh & i6u! di / z {pEJ $ ʃ # a ~ Ԝr (] j [feENO> K ~ E | Yo㏷` | ߍ y’wEOI

    Уровни окислительно-восстановительного потенциала Т-клеток на поверхности определяют реактивность Т-клеток и восприимчивость к артриту

    Абстрактные

    Крысы и мыши с более низкой способностью продуцировать активные формы кислорода (АФК) из-за аллельного полиморфизма в гене Ncf1 (который кодирует цитозольный фактор 1 нейтрофилов) более восприимчивы к развитию тяжелого артрита.Эти данные свидетельствуют о том, что АФК участвуют в регуляции иммунного ответа. Теперь мы показываем, что более низкая способность продуцировать АФК связана с повышенным количеством восстановленных тиоловых групп (-SH) на поверхностях Т-клеточных мембран. Искусственное увеличение количества восстановленных тиолов на Т-клетках животных с артрит-защитными аллелями Ncf1 с помощью обработки глутатионом снижает порог реактивности Т-клеток и усиливает пролиферативные ответы in vitro и in vivo .Важно отметить, что Т-клетки от иммунизированных конгенных крыс с аллелем Ncf1, происходящим от E3 (DA. Ncf1 E3 крыс), не могут передавать артрит крысам с ассоциированным с артритом мутантным аллелем Ncf1, полученным из Dark Agouti (DA) (DA. Ncf1 DA крыс) стали артритогенными после повышения уровня тиолов на клеточной поверхности. Это открытие было подтверждено обратным экспериментом, в котором окисляли Т-клетки из DA. Крысы Ncf1 DA индуцировали менее тяжелый артрит по сравнению с контрольной группой.Таким образом, мы пришли к выводу, что продукция ROS, контролируемая Ncf1 , важна для регулирования поверхностных окислительно-восстановительных уровней Т-клеток и тем самым подавляет аутореактивность и развитие артрита.

    Активные формы кислорода (АФК) обычно считаются вредными и играют роль в усилении аутоиммунных заболеваний, таких как артрит (1, 2). Однако мы обнаружили, что снижение способности продуцировать АФК из-за полиморфизма в Ncf1 увеличивает восприимчивость к аутоиммунитету и артриту (3, 4). Ncf1 кодирует цитозольный фактор 1 нейтрофилов (Ncf1, также известный как p47phox), активирующий белок в комплексе НАДФН-оксидазы, который продуцирует АФК при активации. У крысы SNP в гене Ncf1 был идентифицирован с помощью позиционного клонирования как один из самых сильных генов в регуляции как окислительного взрыва, так и артрита (3). У мышей была выявлена ​​спонтанная мутация, которая влияет на сплайсинг и приводит к экспрессии усеченного, менее функционального белка Ncf1 (5), что также приводит к усилению артрита и аутоиммунитета (4).Следовательно, было ясно, что ген Ncf1 , который контролирует окислительный взрыв, также контролирует аутоиммунный ответ и тяжесть артрита как у крыс, так и у мышей.

    Было показано, что артрит, вызванный иммунизацией пристаном у крыс и коллагеном у мышей, экспрессирующих полиморфный Ncf1 , зависит от Т-клеток. В модели крысы только Т-клетки DA. Ncf1 DA крысы [Крысы Dark Agouti (DA) с мутированным аллелем Ncf1 DA от крысы DA] могут передавать болезнь наивным DA. Ncf1 DA реципиентов, тогда как Т-клетки из конгенного DA. Ncf1 E3 крыс (DA крысы с WT Ncf1 E3 от крысы E3) не может (3, 6). В модели на мышах мутация Ncf1 приводит к усилению реакции гиперчувствительности замедленного типа и уровня сывороточных антител IgG к коллагену II (CII) (4), что указывает на усиленную активацию аутореактивных Т-клеток. Таким образом, Ncf1 каким-то образом влияет на аутореактивные Т-клетки во время иммунного прайминга, чтобы стать артритогенными, либо посредством межклеточного контакта, либо посредством клеточной среды.

    Для правильного функционирования клетки должны поддерживать адекватный окислительно-восстановительный баланс (7). Недавняя работа указывает на роль тиолов с пониженным содержанием клеточной поверхности (-SH) в качестве мишеней окислительно-восстановительной регуляции в иммунной системе (8). Такие редокс-чувствительные фрагменты на поверхности клетки в основном находятся в окисленном состоянии, вероятно, потому, что они подвергаются окислительной внеклеточной среде (9). Изменения окислительно-восстановительного баланса внеклеточных белков могут приводить к модифицированной активации рецепторов или к модификации белков, которые действуют как окислительно-восстановительные сенсоры (10, 11).Снижение функции НАДФН-оксидазы, приводящее к снижению продукции АФК, может влиять на уровни окислительно-восстановительного потенциала иммунных клеток на клеточной поверхности (12), что приводит к нарушению иммунной регуляции в определенный момент времени во время иммунного ответа.

    На функцию Т-клеток заметно влияют изменения в окислительно-восстановительном балансе. Известно, что лимфоцитам требуется восстанавливающая среда для оптимальной пролиферации и активации (13, 14). Было продемонстрировано, что воздействие АФК подавляет активность Т-клеток (14, 15), а снижение внутриклеточных окислительно-восстановительных уровней ухудшает функцию Т-клеток (16).Следовательно, наша цель состояла в том, чтобы определить, влияет ли снижение способности продуцировать АФК на окислительно-восстановительный баланс Т-клеток и тем самым влияет на нижестоящие эффекторные механизмы, связанные с идентифицированным полиморфизмом Ncf1 , контролируя тяжесть артрита.

    Результаты

    Т-клеток от

    Ncf1 мутантных крыс имеют более высокий уровень пониженного содержания тиолов на клеточной поверхности.

    Чтобы объяснить, как окислительный взрыв влияет на активацию Т-клеток, мы исследовали, нарушается ли окислительно-восстановительный баланс в Т-клетках у животных со сниженной функцией НАДФН-оксидазы.Было замечено, что производство АФК комплексом НАДФН-оксидазы и окислительно-восстановительный баланс связаны (12). Во-первых, мы проверили способность Т-клеток вызывать окислительный взрыв по сравнению с гранулоцитами. Периферическая кровь от DA. Ncf1 DA и DA. Ncf1 E3 крыс окрашивали на внутриклеточные ROS с помощью DHR123 (дигидрородамин 123) и клеточно-специфических маркеров со стимуляцией форбол-12-миристат-13-ацетатом (PMA) или без нее. Т-клетки не разрываются при стимуляции ФМА, в отличие от гранулоцитов (рис.1 а ). При окрашивании на экспрессию Ncf1 между штаммами наблюдалась четкая разница при рассмотрении нейтрофилов, в отличие от Т-клеток, где окрашивание Ncf1 не было обнаружено по сравнению с контролем (в котором использовалось нерелевантное первое антитело) (рис. б ).

    Рисунок 1.

    Ncf1 крысы и мыши с мутациями имеют повышенное количество тиоловых групп на клеточной поверхности. ( a ) Т-клетки не вызывают окислительного всплеска при стимуляции PMA, в отличие от гранулоцитов (клетки Gr-1 + ). Окрашивание DHR123 в крови TCR + CD4 + клеток и гранулоцитов определяли с помощью проточной цитометрии после стимуляции PMA или без стимуляции. ( b ) Экспрессию Ncf1 определяли методом проточной цитометрии и выражали в геом.( c ) Относительное количество тиоловых (-SH) групп на клеточной поверхности определяли с помощью окрашивания Alexa Fluor 633-малеимид и выражали в геометрических единицах. Крысы с полиморфизмом в Ncf1 и более низкой продукцией ROS (DA. Ncf1 DA ) имеют более высокое количество тиоловых групп на клеточной поверхности по сравнению с родственными крысами, экспрессирующими WT Ncf1 (DA. Ncf1 E3 ). ( d ) Уровни внутриклеточного тиола определяли окрашиванием MCB, определяли с помощью FACS и выражали в геометрических единицах.Никаких различий во внутриклеточных уровнях GSH не наблюдалось. ( e ) Тиоловые группы в плазме определяли с помощью 5,5′-дитиобис (2-нитробензойной кислоты) и выражали в относительных числах по сравнению со стандартом GSH. Плазма мутировавших крыс содержала больше восстановленных групп -SH. Показаны средние значения ± SEM. Количество животных в группе варьировалось от трех до пяти на эксперимент; было проведено не менее трех экспериментов. ∗, P <0,05.

    Затем мы исследовали клеточную поверхность и внутриклеточные окислительно-восстановительные уровни Т-клеток различных штаммов.Уровни окислительно-восстановительного потенциала клеточной поверхности определяли с помощью проточной цитометрии после окрашивания клеток на наличие восстановленных тиоловых (-SH) групп и клеточно-специфических маркеров (16). Т-клетки в крови из Ncf1 и мутировавших DA. Было показано, что крысы Ncf1 DA имеют более высокое количество тиолов клеточной поверхности по сравнению с таковыми из Ncf1 WT DA. Ncf1 E3 крыс (рис.1 с ). Более высокие уровни тиолов на поверхности Т-клеток в DA. Ncf1 DA крыс также наблюдали в Т-клетках селезенки и паховых лимфатических узлов (LN) (не показаны).Другие типы клеток показали тенденцию к увеличению количества тиолов на клеточной поверхности у животных с мутацией Ncf1 и (макрофаги, нейтрофилы и В-клетки), хотя эти различия не были значительными. Уровни внутриклеточного тиола в Т-клетках определяли методом проточной цитометрии с монохлорбиманом (MCB), реагирующим с внутриклеточным восстановленным глутатионом (GSH) (17). В Т-клетках не было обнаружено различий в уровнях внутриклеточного тиола между штаммами (рис. 1). д ).Напротив, было показано, что внеклеточная среда находится под генетическим контролем. Плазма ДА. Было показано, что крысы Ncf1 DA содержат больше восстановленных тиоловых групп в белках плазмы по сравнению с DA. Ncf1 E3 крыс (рис.1 e ), как определено с помощью анализа с использованием 5,5′-дитиобис (2-нитробензойной кислоты) (9, 13). Аналогичные данные были получены для мышей с мутацией Ncf1 (см. Рис. 7, который опубликован в качестве вспомогательной информации на веб-сайте PNAS).

    Количество тиолов на клеточной поверхности может быть искусственно увеличено.

    Чтобы изучить влияние большего количества тиолов на клеточной поверхности на функцию Т-лимфоцитов, мы хотели изменить это количество искусственно. Было обнаружено, что как GSH, так и N -ацетилцистеин (NAC) увеличивают количество групп -SH на клеточной поверхности в клетках человека (9). Гепаринизированную кровь крысы обрабатывали 4 мМ GSH или 4 мМ NAC (16) и окрашивали на клеточно-специфические маркеры и сниженные поверхностные тиолы (-SH).Гемолиз не проводился, потому что это влияло на окрашивание поверхности -SH. И GSH, и NAC увеличивали количество тиолов на поверхности Т-клеток (рис. 2). a и b ). GSH не влиял на внутриклеточные окислительно-восстановительные уровни, тогда как NAC увеличивал количество внутриклеточных тиолов (рис. 2). с ) (9). Поскольку мы были заинтересованы в изучении эффекта увеличения тиолов только на клеточной поверхности, GSH использовался во всех остальных экспериментах.Концентрация, которую мы использовали (4 мМ), приводила к увеличению уровней тиолов на клеточной поверхности, что было сравнимо с разницей, присутствующей между DA. Ncf1 DA и DA. Ncf1 E3 Т-клетки. Мы проверили и обнаружили, что GSH не токсичен для клеток при этой концентрации; только при концентрации> 16 мМ увеличивался процент мертвых [положительных по йодиду пропидия (PI)] клеток (рис. 2). д ). Аналогичные данные были получены для мышей (не показаны).

    Рис. 2.

    Количество тиолов на клеточной поверхности может быть увеличено с помощью GSH. ( a и b ) Обработка GSH или NAC увеличивает TCR + CD4 + Т-клеточные поверхностные уровни тиолов у крыс со сниженными (DA. Ncf1 DA ) и нормальными (DA. Ncf1 E3 ) Производство ROS.Количество групп SH на клеточной поверхности выражается в геометрических единицах. ( c ) Обработка GSH не влияет на внутриклеточные уровни тиола, в отличие от NAC, что определяется окрашиванием MCB. Показаны средние значения ± SEM. В каждом эксперименте использовали по четыре животных в группе; было проведено не менее трех экспериментов. ∗, P <0,05. ( d ) Обработка GSH не влияет на жизнеспособность клеток крови при концентрации 4 мМ, что определяется титрованием GSH и двойным окрашиванием Alexa Fluor 633-малеимидом и PI.Показан репрезентативный эксперимент.

    Увеличение количества групп SH на клеточной поверхности на Т-клетках увеличивает активацию и пролиферацию.

    Затем мы исследовали, влияет ли большее количество тиолов на поверхности клеток на Т-лимфоциты на активацию и пролиферацию Т-клеток. Мы использовали установленную систему с гибридомными Т-клетками мыши и антигенпрезентирующими клетками (APC), полученными из селезенки. Клетки гибридомы HCQ10 T (18), которые распознают иммунодоминантный пептид CII, связанный с молекулой класса II h3-A q , или APC обрабатывали PBS или 4 мМ GSH для увеличения количества групп SH на поверхности клетки.Было показано, что большее количество тиолов на клеточной поверхности на Т-клетках увеличивает продукцию IL-2, тогда как большее количество тиоловых групп на APC не увеличивает (рис. 3). а ). В отсутствие CII не наблюдали различий в продукции IL-2 между условиями, обработанными GSH и PBS. Эти данные показывают, что количество тиолов на клеточной поверхности на Т-клетках определяет их пролиферативный ответ in vitro .

    Инжир.3.

    Т-клетки с повышенным количеством поверхностных тиолов более активны. ( a ) In vitro Активация Т-клеток после увеличения количества тиолов на клеточной поверхности изучалась на модели мышей с гибридомными Т-клетками, распознающими CII. Когда количество тиолов на поверхности клеток на Т-клетках увеличивалось с помощью GSH (Т-клетки, обработанные GSH), Т-клетки продуцировали больше IL-2, что зависело от взаимодействия Т-клеток с APC. Этого не было, если АРС лечили GSH (АРС, обработанные GSH).Показаны экспериментальные значения минус контрольные значения (Т-клетки и APC без антигена). ( b ) Эти данные были подтверждены in vivo у крыс: обработка GSH приводит к увеличению пролиферации Т-клеток in vivo ; Среднее значение окрашивания CFSE CD4 + и PI (живых) клеток составило 758 у крыс, получавших PBS-обработанные клетки, по сравнению с 454 в группе GSH. Средние с SD показаны для трех экспериментов. b показывает типичный эксперимент с четырьмя.

    Для исследования роли тиолов на поверхности Т-клеток in vivo мы использовали модель на крысах, поскольку ранее было показано, что Т-клетки от крыс DA могут переносить пристан-индуцированный артрит (3). Клетки селезенки и LN CD4 + Т-клетки выделяли из иммунизированных DA. Ncf1 E3 крыс. Клетки метили сукцинимидиловым эфиром диацетата карбоксифлуоресцеина (CFSE) и обрабатывали 4 мМ GSH для получения количества тиоловых групп на поверхности клетки, аналогичного количеству Т-клеток из DA. Ncf1 DA крыс. Крыс умерщвляли через 12 и 36 часов после внутривенного введения. инъекция; значительное количество клеток CFSE + было обнаружено в средостенных ЛУ (дренирующих место инъекции) и селезенке, но не в крови, паховых ЛУ (дренирующих суставы), костном мозге или тимусе. Было показано, что в обоих временных точках, в селезенке и дренирующих ЛУ, интенсивность окрашивания CFSE как CFSE + / PI (живых) клеток, так и CFSE + / рецептора антигена Т-клеток (TCR) + клеток было ниже при инъекции клеток, обработанных GSH, чем при инъекции клеток, обработанных PBS, что указывает на более высокие уровни пролиферации (таблица 1 и рис.3 б ). В соответствии с этим мы наблюдали, что через 12 часов после инъекции процент CFSE-положительных клеток среди всех клеток селезенки или LN был выше в группе, обработанной GSH. Сходные результаты были получены при переносе очищенных LN CD4 + Т-клеток (таблица 1). Эти результаты показывают, что обработанные GSH CD4 + Т-клетки пролиферировали больше, подтверждая данные in vitro , полученные с клетками мыши.

    Таблица 1.

    Т-клетки с повышенным количеством поверхностных тиолов пролиферируют лучше in vivo

    Увеличение количества тиоловых групп на клеточной поверхности на Т-клетках увеличивает артритогенность.

    Следующий вопрос, на который нужно было ответить, был ли DA. Ncf1 E3 Т-клетки с увеличенным количеством клеточной поверхности -SH могут вызывать артрит при адоптивном переносе. Клетки селезенки от 14-дневной иммунизации DA. Ncf1 E3 крыс обрабатывали GSH или PBS, и 35 × 10 6 клеток вводили внутривенно. в наивных крыс DA; наблюдали развитие артрита (3). Примечательно, что Т-клетки из DA. Ncf1 E3 крыс, которые обычно не могут переносить артрит, становились артритогенными за счет увеличения количества тиоловых групп на клеточной поверхности (рис. а ). Заболеваемость, вызванная DA, обработанным GSH. Ncf1 E3 клеток составляли 100% во всех экспериментах.Чтобы подтвердить, что CD4 + T-клетки были ответственными за наблюдаемый эффект, как показано ранее (6), эксперимент был повторен с очищенными CD4 + T-клетками из паховых LN от иммунизированных DA. Ncf1 E3 крыс. Инъекция 15 миллионов обработанных GSH CD4 + DA. Ncf1 E3 Т-клетки также индуцировали артрит (рис. б ).

    Инжир.4.

    Т-клетки от DA. Ncf1 E3 крысы могут переносить артрит только при увеличении количества тиолов на клеточной поверхности. ( a ) Клетки селезенки от 14-дневной иммунизированной DA. Ncf1 DA крысы могут передавать артрит наивному реципиенту DA. Ncf1 DA крыс. DA. Ncf1 E3 Клетки селезенки могут переносить артрит только тогда, когда количество тиолов на клеточной поверхности увеличивается под действием GSH. ( b ) Этот эффект опосредуется клетками CD4 + ; перенос очищенных CD4 + Т-клеток из паховых LN дает аналогичные результаты.( c ) Количество тиолов клеточной поверхности всех клеток TCR + CD4 + у реципиентов не различалось после переноса. ( d ) В эксперименте с аллотрансферой все клетки, положительные для донорского MHC класса I (RT1Aa + ; M1), были CD4 + ; Ячейки RT1Aa + , закрытые M1, показаны на Справа . Это открытие подтверждает, что Т-клетки CD4 несут ответственность за передачу болезни. Средние значения (с SEM) показаны для репрезентативных экспериментов с пятью-восемью крысами на группу.Все эксперименты показали одинаковые значимые результаты. ∗, 0,05> P > 0,005; ∗∗, 0,005> P > 0,0005; ∗∗∗, P <0,0005.

    После переноса отслеживали количество тиолов на клеточной поверхности в крови с течением времени. Однако не наблюдалось значительного увеличения уровней тиолов на поверхности клеток Т-клеток или любого другого типа клеток (рис. 4). с ). По-видимому, количество перенесенных Т-клеток было слишком низким, чтобы изменить количество групп -SH на всех Т-клетках.В плазме также не наблюдалось различий в количестве групп -SH (не показано).

    Т-клетки, обработанные GSH, становятся эффекторными клетками.

    Затем мы хотели изучить выживаемость и функциональное состояние введенных GSH-обработанных донорских клеток. Поскольку окрашивание CFSE уменьшилось до фонового уровня в течение 2 дней, аллельный маркер использовался для отслеживания перенесенных клеток в течение более длительного времени. Аналогичный протокол переноса использовался, как описано для переноса CFSE, но теперь клетки вводили в облученный конгенный DA.1I крысы, которые не экспрессируют молекулу MHC класса I RT1A а (6). Крыс умерщвляли на 7-й день после переноса, в начале заболевания или на 12-й день при максимальной оценке заболевания. Были взяты кровь, селезенка, дренирующие (средостение) и паховые лимфатические узлы, тимус, а также голеностопные и пальцевые суставы задней лапы, а также количество RT1A . a + CD4 + TCR + клеток среди общего количества CD4 + TCR + клеток определяли с помощью проточной цитометрии.Действительно, этот эксперимент подтвердил и расширил краткосрочный эксперимент CFSE; Через 7 дней после переноса Т-клетки, обработанные GSH, значительно увеличились в размерах в паховых и дренирующих ЛУ, а также в паховых ЛУ на 12 день. Т-клетки, обработанные GSH, также достигли суставов в большем количестве, чем клетки, обработанные PBS (Таблица 2). . Гейтинг на всех донорах (RT1A a + ) (гейт M1) показали, что эти клетки были в основном CD4 + Т-клетками, подтверждая, что CD4 + Т-клетки действительно являются клетками, которые пролиферируют при переносе (рис.4 д ). Следовательно, обработанные GSH клетки выживают одинаково хорошо, все еще присутствуют в большем количестве по сравнению с обработанными PBS клетками во время болезни, относительно размножаются в дренирующих суставы LN и достигают синовии.

    Таблица 2.

    Т-клетки с повышенным количеством поверхностных тиолов становятся эффекторными клетками

    Следующим вопросом, который нужно было уточнить, был ли CD4 + RT1A a + двойные положительные донорские Т-клетки сохраняли повышенные уровни клеточной поверхности -SH in vivo .Клетки выделяли из различных тканей через 12 дней после инъекции, и, к удивлению, на донорских Т-клетках, выделенных из крови и паховых LN, наблюдался поддержанный более высокий уровень групп -SH по сравнению с Т-клетками-хозяевами. Однако в клетках селезенки, тимуса, дренирующих ЛУ или пораженных суставов эти уровни вернулись к норме в этот момент времени (рис. а ). Чтобы исследовать продолжительность лечения GSH в системе in vitro , мы обрабатывали Т-клетки гибридомы HCQ10 GSH или PBS, а затем метили их CFSE.Повышенный уровень окрашивания поверхности клеток -SH на клетках, обработанных GSH, сохранялся до третьего деления, когда он начал снижаться, достигая уровней, аналогичных уровню в группе, обработанной PBS, после шести делений (фиг. b и c ). Эти данные показывают, что пониженный статус Т-клеточной мембраны может поддерживаться в течение нескольких раундов клеточного деления, а также in vivo, в крови и LN, но не тогда, когда Т-клетки, наконец, попадают в суставы.

    Рис. 5.

    Т-клетки, обработанные GSH, становятся эффекторными клетками. ( a ) In vivo , группы -SH на поверхности клеток CD4 + RT1A a + клеток в тканях из эксперимента по переносу сохраняли высокие уровни групп -SH в крови и паховых ЛУ, но не в других тканях. Для исследования продолжительности воздействия GSH на Т-клетки, Т-клетки HCQ10 культивировали в среде без 2-меркаптоэтанола после обработки PBS или 4 мМ GSH и мечения CFSE.Число групп -SH клеточной поверхности и относительная интенсивность окрашивания CFSE отслеживали с течением времени. ( b ) Уровни группы клеточной поверхности -SH были выше в группах, обработанных GSH, и начали снижаться только после приблизительно двух делений, достигая нормальных уровней после шести делений. ( c ) Никаких различий в кинетике пролиферации не наблюдалось. Показаны репрезентативные эксперименты от двух до трех. ∗, P <0,05.

    Уменьшение количества тиоловых групп на клеточной поверхности на Т-клетках снижает артритогенность.

    Чтобы подтвердить, что наблюдаемые эффекты лечения GSH действительно были опосредованы увеличением групп клеточной поверхности -SH, а не побочным эффектом GSH, мы провели обратный эксперимент. Во-первых, было исследовано, приводит ли обработка окисленным глутатионом (GSSG) к снижению групп SH на поверхности Т-клеток, как было показано (рис. 6). а ). Чтобы исследовать, приводит ли это снижение клеточной поверхности -SH к снижению активации Т-клеток в системе мышей, мы сравнили продукцию IL-2 гибридомными клетками HCQ10 T после обработки GSSG или PBS.Было показано, что при обработке Т-клеток GSSG вырабатывалось меньше ИЛ-2, что указывает на то, что уменьшение клеточной поверхности -SH подавляет активацию Т-клеток (рис. б ). В соответствии с этим, мы наблюдали in vivo и , что у крыс снижение поверхностного Т-клеточного SH из-за обработки GSSG привело к значительно менее тяжелому артриту при переносе клеток селезенки от иммунизированного DA. Ncf1 DA крыс к DA. Ncf1 DA крыс (рис.6 с ).

    Рис. 6.

    Уменьшение количества тиоловых групп клеточной поверхности на Т-клетках снижает артритогенность. ( a ) Обработка крови GSSG снижает уровни групп SH на поверхности клеток CD4 + Т-клеток. ( b ) В анализе активации Т-клеток мышей обработка Т-гибридомных клеток GSSG приводит к снижению продукции ИЛ-2.Показанные значения скорректированы на контрольные значения в отсутствие антигена. Сама по себе обработка GSSG в отсутствие антигена не снижала уровень продукции IL-2. ( c ) При переносе клеток селезенки от DA. Ncf1 DA крыс до DA. Ncf1 DA , обработка клеток GSSG привела к снижению тяжести артрита по сравнению с клетками, обработанными PBS. Показаны средства с SD. ∗, P <0.05.

    Обсуждение

    Здесь мы представляем доказательства ранее не охарактеризованного механизма, посредством которого АФК, продуцируемые комплексом НАДФН-оксидаз, определяют уровень окислительно-восстановительного потенциала Т-клеток на поверхности, тем самым контролируя реактивность Т-клеток и развитие артрита. Хотя наши результаты опровергают текущую догму о том, что АФК ослабляют иммунный ответ, ранее мы предоставили генетические доказательства того, что снижение производства АФК комплексом НАДФН-оксидазы увеличивает тяжесть артрита как у крыс, так и у мышей.В поисках механизма, с помощью которого снижение АФК могло действовать в регулировании иммунного ответа, мы изучили активацию Т-клеток за счет окислительно-восстановительного баланса на наших животных моделях.

    Ранее было показано, что на созревание и пролиферацию Т-клеток влияют АФК (19). Хотя большинство предыдущих отчетов было сосредоточено на внутриклеточном окислительно-восстановительном балансе, некоторые из них показали, что восстанавливающаяся внеклеточная среда увеличивает чувствительность Т-клеток in vitro и in situ (8, 9, 16, 20).Теперь мы показываем, что увеличение тиолов на клеточной поверхности напрямую увеличивает активацию и пролиферацию Т-клеток как in vitro, и in vivo, и тем самым определяет артритогенность Т-клеток. Хотя контроль уровней окислительно-восстановительного потенциала является сложной задачей для изучения, и результаты зависят от многих факторов (таких как изучаемый анатомический отдел и экспериментальная установка), у нас было то преимущество, что мы идентифицировали SNP в гене Ncf1 , который косвенно влиял на T Уровни тиолов на клеточной поверхности, что позволяет нам использовать четко определенные инбредные линии крыс и мышей, которые различались только этим функциональным полиморфизмом.

    Это интересный вопрос: как окислительно-восстановительный статус мембраны Т-клеток определяется АФК? Хотя другие сообщали об экспрессии функционального комплекса НАДФН-оксидазы в Т-клетках (21, 22), мы не смогли обнаружить ни экспрессии Ncf1, ни окислительного всплеска в Т-клетках наших крыс или мышей. Мы не исключаем наличие конститутивных низких уровней АФК в Т-клетках (23), но наблюдаемые нами очень низкие фоновые уровни АФК не различались между Т-клетками, происходящими из разных линий животных, и, таким образом, по-видимому, не зависят от НАДФН-оксидазы.Это наблюдение приводит к гипотезе о том, что количество групп SH на поверхности Т-клеток определяется другими клетками, которые действительно продуцируют АФК, такими как APC или нейтрофилы (24). Изменения клеточной поверхности -SH могут происходить во время прямого взаимодействия между Т-клетками и APC во время презентации антигена (13), во время отбора тимуса (25) или без контакта клеток посредством локальной среды (26).

    Первая и наиболее вероятная возможность состоит в том, что мембраны Т-клеток обычно окисляются за счет взаимодействий с Ncf1-экспрессирующими APC (13), что не удается у животных с пониженной способностью к взрыву.Взаимодействие между Т-клетками и APC происходит на нескольких этапах иммунного ответа: при отборе тимуса, во время миграции в периферические лимфоидные ткани и во время презентации антигена (4). Мы наблюдали, что если у Т-клетки были повышенные уровни групп -SH на поверхности клетки, повышенная продукция IL-2 происходила только в присутствии антигена и APC, предполагая, что уровни окислительно-восстановительного потенциала на поверхности T-клеток определяются во время взаимодействия T-клетки с APC. Критические молекулы или белки на поверхности Т-клеток, присутствующие в иммунологическом синапсе, обычно могут окисляться, чтобы предотвратить активацию Т-клеток.Это окисление может быть особенно важным во время отбора тимуса, когда Т-клетки активируются взаимодействием TCR-MHC class II, но они не должны выходить на периферию с активированным фенотипом. Группы -SH на белках клеточной поверхности поддерживаются в восстановленном состоянии за счет перемещения электронов и водорода между активными окислительно-восстановительными остатками (27). Было показано, что микроокружение на поверхности клетки поддерживает окислительно-восстановительные реакции внутри определенных поверхностных белков и между ними (27), тем самым позволяя регуляторные процессы с помощью этих белков.Одним из нескольких белков, чувствительных к окислительно-восстановительной регуляции, является сам CD4 (11). Возможно, что взаимодействие CD4-MHC класса II изменяется при окислительно-восстановительных изменениях в CD4 (28), что приводит к различным передачам сигнала в клетку и различным результатам отбора тимуса или презентации антигена.

    Вторая возможность состоит в том, что Т-клетки получают повышенное количество тиолов на поверхности клетки на периферии (например, во время транспортировки в крови). Мы показываем, что плазма животных с полиморфным Ncf1 содержала более высокие уровни групп -SH, чем у животных дикого типа, что может быть связано со сниженным уровнем системных ROS, высвобождаемых во время фагоцитоза, отбора тимуса или презентации антигена.Однако наблюдение, что Т-клетки не пролиферируют лучше, когда они находятся в тесном контакте с APC в отсутствие пептида, делает эту возможность менее вероятной.

    Как ясно показывают настоящие эксперименты, окислительно-восстановительные уровни поверхностей Т-клеток могут поддерживаться в течение нескольких циклов деления после переноса, а также приводить к усиленной активации Т-клеток in vivo . Однако артрит развился только через несколько дней после того, как уровни окислительно-восстановительного потенциала клеточной поверхности уже снизились на донорских Т-клетках.Кроме того, донорские Т-клетки, которые мигрировали в суставы в качестве эффекторных клеток до развития артрита, не поддерживали этот повышенный уровень клеточной поверхности -SH. Эти данные свидетельствуют о том, что уровни окислительно-восстановительного потенциала регулируют активацию иммунной системы, а не прямые эффекторные функции в суставах, что может быть подчеркнуто предыдущими данными о том, что плазма пациентов с ревматоидным артритом содержит значительно более высокие уровни ROS по сравнению с подобранной контрольной группой (29, 30). Также у крыс с артритом был повышен уровень АФК в селезенке, тимусе и лимфоцитах (30, 31).Эти данные, кажется, противоречат нашим результатам, но, вероятно, просто отражают тот факт, что функция Ncf1 также усиливается в результате воспалительного процесса. В эффекторной фазе заболевания, когда суставы разрушаются и происходит накопление в суставе клеток, продуцирующих АФК, физиологическая буферная способность превышается, что приводит к локальному и системному окислительному стрессу, когда АФК могут быть скорее вредными. чем выгодно. Таким образом, группы SH-клеточной поверхности могут использоваться как параметр прогнозирования артрита, а не как диагностический инструмент.

    В заключение, мы показываем здесь, что количество тиоловых групп на клеточной поверхности Т-клеток регулируется с помощью АФК, продуцируемых НАДФН-оксидазным комплексом, и что уровень Т-клеточной поверхности-групп SH влияет на активацию, пролиферацию, и развитие артрита.

    Методы

    Животные.

    DA (DA. Ncf1 DA ; первоначально получено из Zentralinstitut fur Versuchstierzucht, Ганновер, Германия), родственный DA.Штаммы крыс Ncf1 E3 (3) и DA.1I (6) были созданы в нашей колонии более 13 поколений обратного скрещивания и имеют общий фон гена DA крысы. Животных содержали в помещении для животных Медицинского исследования воспаления в обычных условиях. Все эксперименты на животных были одобрены этическим комитетом Мальме / Лунд (лицензионные номера M70 / 01 и M70 / 04).

    Индукция и оценка артрита.

    Артрит индуцировали у 8-14-недельных крыс путем инъекции 200 мкл (заболевание) или 500 мкл (перенос Т-клеток) пристана (2,6,10,14-тетраметилпентадекан; Sigma-Aldrich) s.c. у основания хвоста. За развитием артрита следили с использованием макроскопической системы баллов: каждый опухший или красный палец ноги, средний палец стопы или сустав оценивался по 1 баллу, а каждая опухшая лодыжка получала 5 баллов, в результате чего максимальное количество баллов на крысу составляло 60.

    Антитела.

    Анти-крысиный TCR (R73), анти-крысиный Gr-1 (HIS48), анти-крысиный CD4 (OX-35), анти-крысиный CD8 (341), анти-крысиный RT1A a (C3), антимышиный CD3 (135–2C11), антимышиный CD4 (h229.19), антимышиные гранулоциты (Rb6), антимышиные макрофаги (F4 / 80) и антимышиные дендритные клетки (N4.18) (все из Фармингена), меченные различными флуорохромами или биотином, который был обнаружен стрептавидин-флуорохромом. конъюгаты (Pharmingen).

    Проточная цитометрия.

    Относительное количество тиоловых групп на клеточной поверхности на разных типах клеток определяли с помощью Alexa Fluor 633, связанной с малеимидом (ALM-633; Molecular Probes), как описано в ссылке.16. Пятнадцать микролитров гепаринизированной крови инкубировали с 1,5 мкл ALM-633, разведенного в PBS (10 мкМ), в течение 15 минут на льду. Затем клетки окрашивали антителами, направленными против различных поверхностных антигенов. Всего на сортировщике FACScan (Becton Dickinson) было собрано 250 000–500 000 клеток. Среднее значение окрашивания ALM-633 для каждого типа клеток использовали для выражения относительного количества групп -SH на поверхности клетки. Для измерения внутриклеточного GSH клетки окрашивали клеточно-специфическими маркерами и после промывки инкубировали с 40 мкМ MCB (молекулярные зонды), разведенными в PBS; реакцию останавливали ровно через 20 мин 50% FCS, клетки промывали и держали на льду до анализа (20).Для определения взрывной способности клетки окрашивали на маркеры клеточной поверхности и помещали в 200 мкл DMEM (GIBCO). Добавляли DHR123 (25 мкл) (молекулярные зонды) в DMEM (конечная концентрация 3 мкМ) и инкубировали в течение 10 минут при 37 ° C. Затем добавляли 25 мкл PMA (Sigma) в DMEM (конечная концентрация 200 нг / мл) для стимуляции взрыва. Через 20 мин при 37 ° C клетки промывали и определяли среднее значение окрашивания DHR123 для каждого типа клеток.

    Экспрессию

    Ncf1 определяли путем внутриклеточного окрашивания кроличьим анти-E3 Ncf1 крысы.Это поликлональное антитело кролика было вызвано пептидом Ncf1 дикого типа, и это приводит к более низким уровням окрашивания у крыс DA, чем у крыс E3. Кровь окрашивали антителами против CD4, TCR и Gr-1. После промывки клетки фиксировали и повышали проницаемость с помощью Cytofix / Cytoperm (Becton Dickinson) и дважды промывали Perm / Wash (Becton Dickinson). Затем клетки окрашивали анти-Ncf1 или нерелевантным контрольным антителом, обнаруживаемым с помощью козьего антикроличьего IgG (DAKO). Среднее значение окрашивания Ncf1 для каждого типа клеток определяли с помощью проточной цитометрии.

    Измерение плазменных групп SH.

    Плазму разбавляли на 1/2 в PBS и добавляли равное количество 400 мкМ 5,5′-дитиобис (2-нитробензойной кислоты). Определяли OD 450 и рассчитывали относительное количество тиолов в плазме в соответствии со стандартом GSH.

    Обработка GSH и NAC.

    Для увеличения количества тиоловых групп на клеточной поверхности клетки обрабатывали 4 мМ GSH (Sigma) или 4 мМ NAC (Sigma) в PBS.Для уменьшения тиоловых групп на клеточной поверхности использовали 2 мМ GSSG (Sigma), разведенный в PBS. Все процедуры проводились на льду в течение 15 мин.

    Анализ активации Т-клеток.

    APC выделяли из наивных суспензий селезенки мыши следующим образом. Клетки помещали в 2 мл 3: 1 PBS: Optiprep (Axis-shield, Осло) и покрывали 2,5 мл 1: 4,2 Optiprep: Diluent C [0,88% (вес / объем) NaCl / 1 мМ EDTA / 0,5%. (вес / объем) BSA (Sigma) / 10 мМ Hepes-NaOH, pH 7,4] и 1,5 мл PBS. После центрифугирования при 600 × g в течение 15 мин верхний слой клеток промывали и помещали в DMEM с 10% FCS, 2.4 мг / мл Hepes, 3,9 мкг / мл 2-меркаптоэтанола и пенициллин / стрептомицин (DMEM +++ ). Эти клетки представляли собой макрофаги (F4 / 80 + ) и дендритные клетки (N4.18 + ) с незначительной контаминацией лимфоцитов (максимум 8%), как определено FACS. Клетки гибридомы T-клетки HCQ.10 (50 × 10 3 ) совместно культивировали с 50 × 10 4 APC и 10 мкг / мл крысиного CII в общем объеме 125 мкл. Т-клетки или APC обрабатывали 4 мМ GSH или NAC только в PBS или PBS и промывали перед добавлением их в планшеты.Увеличение количества тиолов на поверхности клеток подтверждено проточной цитометрией. Через 24 ч при 37 ° C отбирали 75 мкл супернатанта и анализировали концентрацию IL-2 с помощью ELISA.

    IL-2 ELISA.

    Крысиный антимышиный IL-2 (Pharmingen) наносили на планшеты для ELISA (Costar, Corning) в PBS (pH 9) в течение 2 часов при 37 ° C. Затем добавляли 150 мкл 3% BSA в PBS и инкубировали в течение 1 ч при 37 ° C. После промывания буфером для ELISA (1,3 М NaCl / 0,1 М Трис / 0,1% Твин 20, pH 7,4) на планшеты добавляли 75 мкл супернатанта и инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре.IL-2 детектировали с помощью биотинилированного крысиного антимышиного IL-2 (Pharmingen), а затем с помощью меченного европием стрептавидина, разведенного в буфере для анализа (Wallac, Gaithersburg, MD) в течение 30 минут при комнатной температуре. После промывки планшеты проявляли 50 мкл раствора для усиления (Wallac). Уровень флуоресценции определяли с помощью счетчика с несколькими метками (VICTOR 1420, Wallac). Рекомбинантный мышиный IL-2 использовали в качестве стандарта.

    Перенос Т-клеток.

    Крыс иммунизировали 500 мкл пристана.На 14 день клетки селезенки и паховые LN CD4 + Т-клетки (очищенные пэннингом;> 94% CD4 + Т-клетки) культивировали в течение 48 часов в среде DMEM +++ с 3 мкг / мл конканавалина A ( Sigma) при 37 ° C (6). Затем клетки обрабатывали 4 мМ GSH в PBS или PBS в качестве контроля (в 5 мл для 175 × 10 6 клеток) в течение 15 минут на льду. После трехкратной промывки в PBS внутривенно инъецировали 35 × 10 6 клеток в PBS. у наивных крыс DA и оценивали развитие болезни. Для исследований пролиферации in vivo Т-клеток клетки были помечены 0.5 мкМ CFSE перед обработкой GSH. Окрашивание CFSE и повышенное внеклеточное восстановление были подтверждены FACS. Обработка GSH не влияла на окрашивание CFSE. Через 12 и 36 часов после инъекции группу крыс забивали, собирали ткани и анализировали на окрашивание CFSE среди живых клеток (PI ) и клеток TCR + (R73-PerCP). Для эксперимента по аллотрансферу крыс DA.1I перед переносом облучали 6 Гр. Клетки селезенки получали и обрабатывали, как описано выше, но не метили CFSE.Крыс умерщвляли на 7 и 12 дни после переноса, и процент RT1A a + CD4 + TCR + клеток среди CD4 + TCR + клеток определяли с помощью FACS.

    Статистика.

    Различия между группами анализировали с помощью теста Манна-Уитни U , считая, что P <0,05 существенно различаются. Размеры групп варьировались от 3 до 10 образцов или животных на группу за эксперимент; Было проведено от двух до пяти экспериментов.

    Благодарности

    Эта работа была поддержана грантами от Anna Greta Crafoord Stiftelse for Reumatologisk Forskning, Фонда Craaford, Фонда Конунг Густава V: s 80-års, Фонда Веннера Грена, Шведского фонда стратегических исследований и Европейского Союза (MUGEN and Автоотверждение).

    Сноски

    • Кому следует направлять корреспонденцию.Эл. адрес: rikard.holmdahl {at} med.lu.se
    • ↵ * Текущий адрес: Pharmexa A / S, Kogle Alle 6, DK-2970 Hørsholm, Дания.

    • Текущий адрес: Biovitrum AB, Arvid Wallgrens Backe 20, SE-413 46 Göteborg, Sweden.

    • Вклад авторов: K.A.G., M.H., P.O. и R.Х. разработал исследование; K.A.G., M.H., J.H. и P.O. проведенное исследование; K.A.G., M.H. и R.H. проанализировали данные; и K.A.G., M.H. и R.H. написали статью.

    • Заявление о конфликте интересов: P.O. используется компанией Biovitrum, которая владеет правами на патентную заявку, касающуюся использования оксидантов в терапии. Оба P.O. и R.H. названы в этой заявке изобретателями.

    • Сокращения:
      DA,
      Dark Agouti;
      GSH,
      восстановленный глутатион;
      GSSG,
      окисленный глутатион;
      LN,
      лимфатический узел;
      NAC,
      N-ацетилцистеин;
      ROS,
      активные формы кислорода;
      APC,
      антигенпрезентирующая клетка;
      PI,
      иодид пропидия;
      MCB,
      монохлорбиман;
      PMA,
      форбол 12-миристат 13-ацетат;
      CII,
      коллаген типа II;
      CFSE,
      сукцинимидиловый эфир диацетата карбоксифлуоресцеина;
      TCR,
      Т-клеточный антигенный рецептор.
    • © 2006 Национальная академия наук США

    Вирджиния Краус, доктор медицинских наук | Институт молекулярной физиологии герцога

    Лаборатория доктора В. Крауса занимается исследованиями остеоартрита (ОА). Эта лаборатория изучает патогенез ОА, наиболее распространенной из всех форм артрита и второй по значимости причины инвалидности во всем мире. Эта группа работает над разработкой новых инструментов, помогающих в диагностике, прогнозировании и эффективном вмешательстве в эту болезнь.В лаборатории ведутся текущие фундаментальные исследовательские проекты, включающие in vitro, и модельные системы на животных, а также биомедицинские клинические исследования и испытания трансляционной медицины при ОА у людей. Совсем недавно эта исследовательская группа занялась протеомным анализом суставной жидкости при ОА коленного сустава, чтобы определить новые потенциальные биомаркеры прогрессирования ОА.

    Разработка, валидация и квалификация биомаркеров:

    Разработке эффективных терапевтических средств для лечения ОА (ОА) препятствует нехватка надежных результатов и мер мониторинга.Лаборатория Крауса разрабатывает новые биомаркеры на основе посттрансляционно модифицированных белков, чтобы отличить дегенерацию от регенерации ткани и оценить метаболизм тканей в различных суставах в разных условиях (1, 2, 3, 4). Эти исследования распространились на сотрудничество с доктором. Арт Мозли и Эрик Содерблом из лаборатории Duke Proteomics Core и шведский протеомный эксперт доктор Патрик Оннерфьорд (5). Эти исследования также расширились до сотрудничества с исследователями из Academia Sinica на Тайване, чтобы изучить хрящ и сопоставленную по месту нахождения кость с помощью нового метода отбора проб, позволяющего выделить высококачественную ткань для геномных исследований (6,7).Эти исследования распространились на оценку эпигенетических факторов, регулирующих патогенез ОА, в сотрудничестве с доктором. Саймон Грегори и Бет Хаузер из DMPI. Д-р Краус был соучредителем д-ра Дэвида Хантера из Австралии в крупном проекте (OARSI / Foundation for NIH Biomarker Initiative) по использованию образцов и данных из инициативы OA, финансируемой NIH, для проведения квалификаций FDA и EMA биохимических и химических веществ. визуализирующие биомаркеры ОА (8). Это включало в себя критическую работу с давним сотрудником Др.Джоан Джордан из Университета Чапел-Хилл, Северная Каролина, и д-р Дэвид Харгроув из LabCorp, чтобы установить контрольные диапазоны для биохимических маркеров у здоровых субъектов, не страдающих остеоартритом. Лаборатория содержит хранилища многих уникальных наборов образцов для будущих совместных исследований, включая ДНК и биологические образцы из большого многосемейного исследования GOGO (9), образцы доксициклина и лонгитюдных исследований доктора Брандта (10), а также исследования Beijing OA Study (11,12), чтобы назвать несколько.

    Роль воспаления в остеоартрите:

    Лаборатория Крауса работает над изучением патогенеза ОА.Недавние исследования были сосредоточены на роли врожденного иммунитета и макрофагов в прогрессировании заболевания (13,14,15,16) и ОА как реакции на хроническое заживление ран (17). На основании наблюдения лаборатории Крауса о том, что мочевая кислота участвует в врожденном иммунном ответе при ОА и прогрессировании ОА коленного сустава, проводится совместное рандомизированное плацебо-контролируемое клиническое исследование колхицина для лечения ОА коленного сустава с доктором Кэти Люнг из Duke NUS и Singapore General. Больница в Сингапуре.

    Посттравматический остеоартрит:

    Текущие данные показывают, что большая часть тяжелых травм суставов приводит к посттравматическому остеоартриту (ПТОА).Время до начала заболевания, основанное на рентгенологических критериях, может составлять от 10 до 20 лет, но может быть значительно ускорено в группах населения, испытывающих тяжелые травмы в сочетании с профессиональным стрессом, например, в армии, у которых PTOA может развиться всего за 2-3 года. после травматической травмы. Лаборатория Крауса заинтересована в развитии понимания ранних изменений в метаболизме суставов, связанных с тяжелой травмой суставов, и с помощью этих исследований, чтобы понять и протестировать эффективные средства раннего вмешательства и предотвращения PTOA (18,19).Лаборатория провела пилотное исследование внутрисуставного лечения острой передней крестообразной связки (ПКС) с помощью IL-1Ra (20), которое показало большие перспективы. За этим последовало сотрудничество с ортопедами спортивной медицины, в частности с доктором. Кристиан Латтерманн и Курт Шпиндлер, чтобы расширить и усовершенствовать ранние терапевтические вмешательства при травмах ПКС и суставов. С этой целью д-р Краус также является советником инициативы по передней крестообразной связке (ПКС), финансируемой Фондом артрита, направленной на валидацию МРТ T1rho для раннего мониторинга патологий суставов после тяжелых острых разрывов ПКС с целью определения результатов клинических испытаний в острая травма сустава.Лаборатория Крауса сотрудничает с лабораториями д-ра Стива Олсона и д-ра Фаршида Гилака в исследованиях естественной истории, биомаркеров и вмешательств в моделях острой травмы (перелома) на грызунах, а также влияния диеты и напряжения мышей на тяжесть PTOA (21 , 22,23,24,25). Исследованиям в этой модельной системе в значительной степени способствовала разработка в лаборатории Крауса метода сбора синовиальной жидкости из колена мыши (26). Сотрудничество с лабораторией Guilak показало, что внутрисуставная доставка очищенных мезенхимальных стволовых клеток от мышей C57BL / 6 или MRL / MpJ superhealer предотвращает посттравматический артрит (27).

    Модели остеоартрита на животных:

    Лаборатория Крауса является экспертом в модели спонтанного ОА коленного сустава у морских свинок и опубликовала множество публикаций в этой области (28,29,30,31,32,33), включая исчерпывающую главу о методах гистологической оценки, наиболее подходящих для этой модельной системы. (34). В сотрудничестве с лабораторией доктора Лори Сеттон лаборатория также исследовала другие модели животных, включая активность NF-kappaB, с помощью люминесцентной визуализации in vivo, а также уровни цитокинов в сыворотке и их связь с болевой чувствительностью на модели ОА на грызунах (35). .

    .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

    Средний процент подготовленной площади поверхности
    Трансфибулярный (± S.D.) Миниоткрытый (± SD) p Значение
    Талус 77,7 (12,4) 92,9 (5,9) 0,0381
    Большеберцовая кость / малоберцовая кость 75,0 (9,7) 88,6 (5,3) 0,0311
    Таранная кость + большеберцовая кость + малоберцовая кость 76,9 (8,8) 90,9 (5,2) 0,0154 9292 13 Артродез голеностопного сустава считается золотым стандартом для лечения терминальной стадии артрита голеностопного сустава у пациентов, у которых не удается консервативное лечение.Это может быть выполнено прямым передним, трансфибулярным, артроскопическим или мини-открытым доступом. Независимо от подхода, важными аспектами спондилодеза являются подготовка сустава, стыковка поверхностей сустава и стабильная фиксация. Хотя полная замена голеностопного сустава становится все более популярной для лечения терминальной стадии артрита среди пожилых пациентов, артродез голеностопного сустава обычно выполняется среди более молодых пациентов, а также пациентов со значительными сопутствующими заболеваниями. Артродез может быть связан с такими осложнениями, как инфекция, хроническая боль и несращение.Из них несращение является наиболее частым осложнением, описанным в литературе [12]. Поэтому достижение союза при минимизации осложнений, связанных с процедурой, имеет первостепенное значение.

    Трансфибулярный доступ обеспечивает отличную коррекцию деформации, визуализацию сустава и требует меньшего обучения по сравнению с мини-открытым доступом [13]. Эти преимущества сопряжены с риском возможного нарушения кровоснабжения при таком подходе [6, 13]. Воспроизводимые результаты могут быть достигнуты с помощью мини-открытого доступа у пациентов с меньшей деформацией, при сохранении оболочки мягких тканей и кровоснабжения, особенно в условиях, когда артроскопический артродез голеностопного сустава не может быть выполнен [14].

    Хотя артроскопический артродез голеностопного сустава преодолевает многие недостатки открытого артродеза голеностопного сустава, требуется сложное обучение и высокий уровень знаний. Кроме того, артроскопические процедуры на голеностопном суставе могут привести к увеличению времени хирургического вмешательства [15]. Его также можно использовать только при минимальной деформации [16]. Мини-открытый передний доступ (расширенный артроскопический портал) сохраняет многие преимущества артроскопического артродеза с использованием тех же плоскостей с минимально увеличенной экспозицией.Тем не менее, менее инвазивный подход был предложен для теоретического предотвращения адекватной подготовки сустава.

    Это анатомическое исследование показало, что использование мини-открытого доступа привело к значительно большей подготовке тибиоталарной суставной поверхности, а также медиального желоба. Кроме того, при исключении бокового желоба мини-открытый доступ выполнялся в равной степени или лучше трансфибулярного доступа, при этом обрабатывались оставшиеся участки поверхности голеностопного сустава.Эти результаты подтверждают использование мини-открытого подхода как столь же эффективного подхода по сравнению с широко используемым трансфибулярным подходом. Клинически преимущество переднего мини-открытого доступа состоит в том, что он оптимизирует хирургическое вмешательство, и пациент может находиться в положении лежа на спине. Это сохраняет паз с обеих сторон. Важно отметить, что этот подход действительно включает рассечение сосудисто-нервной системы, повышенную частоту осложнений в ране и высокий уровень незнания этого подхода среди хирургов-ортопедов общего профиля.Тем не менее, мини-открытый доступ позволяет сохранить малоберцовую кость, что дает возможность в будущем при необходимости выполнить артропластику. Paremain et al. [14] и Ахмад и др. [17] сообщили о 100% сращении при использовании техники мини-открытия. В исследовании Paremain et al. среднее время до сращения составляло 6 недель (3–15 недель) [14], а Ahmad et al. сообщили, что среднее время до сращения составляет 14,1 недели (10–16 недель) [17]. Такой высокий уровень объединения можно объяснить увеличением площади подготовленной поверхности, доступной для объединения.Однако для подтверждения необходимы дальнейшие клинические исследования.

    Трансфибулярный доступ продемонстрировал значительно большую эффективность для препарирования латеральной лодыжки латерального желоба лодыжки по сравнению с мини-открытым доступом. Этот метод имеет преимущества в том, что он используется при переломах лодыжки, позволяет избежать сосудисто-нервных структур и помогает исправить деформации с сохранением малоберцовой кости. Трансфибулярный доступ к артродезу голеностопного сустава с использованием малоберцовой кости в качестве накладного трансплантата связан с высокой частотой сращения [18–21], при этом в литературе сообщается, что среднее время сращения составляет 14 недель [22].Одним из недостатков этого подхода является то, что он может привести к неадекватной подготовке медиального желоба, что было продемонстрировано в нашем исследовании с подготовкой в ​​среднем только 44,7%. Кроме того, трансфибулярный доступ с использованием остеотомии малоберцовой кости может привести к повреждению венозных и нервных структур [23]. Трансфибулярный доступ также влечет за собой нарушение целостности дистального отдела малоберцовой кости. В случаях, когда может потребоваться конверсия, полная артропластика голеностопного сустава, сохранение дистального отдела малоберцовой кости имеет решающее значение [24, 25].

    В нашем исследовании наблюдалась значительная разница в площади подготовленной области, особенно на медиальной лодыжке, латеральной лодыжке и нижней поверхности большеберцовой кости. В то время как медиальная лодыжка и большеберцовая кость имели больший процент подготовки при мини-открытом доступе, латеральная лодыжка была лучше подготовлена ​​при латеральном доступе. В целом, наши результаты продемонстрировали, что эффективность мини-открытого доступа сопоставима с эффективностью трансфибулярного доступа. Клинически это важно, потому что подготовка большей площади поверхности может привести к более быстрому сращиванию.Мини-открытый подход также может быть выгоден по сравнению с артроскопическим подходом, поскольку он требует меньше технических навыков и, следовательно, меньше кривой обучения.

    Результаты нашего исследования показали, что медиальный желоб был плохо подготовлен при трансфибулярном доступе по сравнению с техникой mini-open. Следовательно, чтобы преодолеть это, может потребоваться медиальный / переднемедиальный разрез для подготовки медиального желоба при использовании трансфибулярного доступа. В некоторых литературных источниках сообщается об использовании медиальной остеотомии для доступа к медиальной стороне сустава [26].При исключении медиального желоба не было значительной разницы в подготовке между двумя методами. Однако следует отметить, что многие хирурги иссекают медиальную лодыжку или не препарируют медиальный желоб. При оценке общей подготовки образцы, которые подверглись препарированию с помощью мини-открытого доступа, имели значительно большую подготовку, включая большую степень подготовки суставной поверхности для купола таранной кости. Наши результаты подтверждают, что мини-открытый подход является эффективным подходом, сопоставимым с трансфибулярным подходом при артродезе голеностопного сустава.

    Ограничения

    Это исследование имеет несколько ограничений. Во-первых, количество доступных образцов трупов ограничивалось десятью, что ограничивало возможности исследования, и ни один из использованных образцов не имел деформации или артрита сустава. Кроме того, замораживание и оттаивание образцов могло повлиять на результаты, ограничив экспозицию в зависимости от оттаивания. Мы не можем комментировать влияние подготовки на отказ от профсоюзов из-за характера обучения. Фактические результаты у живых людей зависят от множества факторов, включая сопутствующие заболевания и статус курения, помимо хирургических методов.Тип фиксации также может повлиять на сращение. Однако в обоих этих методах обычно используются винты с перекрестной компрессией (3-5 винтов в зависимости от предпочтений хирурга). Следует отметить, что трансфибулярный доступ требует дополнительных винтов для фиксации малоберцовой кости к большеберцовой и таранной костям. Хотя в обоих этих методах используются компрессионные винты, только трансфибулярный метод обеспечивает дополнительный онльный трансплантат.

    Это первое исследование, которое демонстрирует эффективность совместной подготовки с использованием мини-открытого доступа по сравнению с трансфибулярным доступом.Таким образом, мини-открытый доступ может обеспечить эквивалентные, если не лучшие клинические результаты, поскольку он обеспечивает адекватную подготовку суставов, сохраняет васкуляризацию, минимизирует повреждение мягких тканей и делает возможным возможное полное эндопротезирование голеностопного сустава в будущем.

    Заключение

    Мини-открытый доступ с использованием двойных разрезов дает в целом равную, если не лучшую подготовку сустава по сравнению с трансфибулярным доступом. При исключении медиального желоба существенной разницы в подготовке площади тибиоталарной суставной поверхности не было.Оба эти метода обеспечивают адекватную совместную подготовку. Таким образом, мини-открытая техника может быть рассмотрена у пациентов с высоким риском осложнений и когда артроскопическая операция невозможна. Влияние этих результатов необходимо оценить с помощью дальнейших клинических исследований.

    Краткое описание

    • Артродез считается золотым стандартом терминальной стадии артрита голеностопного сустава у пациентов, у которых консервативное лечение неэффективно. Это может быть выполнено через передний, боковой, артроскопический или мини-открытый доступ.

    • Несмотря на свою эффективность, открытые доступы ранее были связаны с раневыми осложнениями и трудностями при переходе к артропластике при удалении дистального отдела малоберцовой кости.

    • Несращение является наиболее частым осложнением. Важным элементом успешного сращения является подготовка суставной поверхности, которая может быть ограничена используемым доступом.

    • Совместное препарирование с использованием мини-открытого доступа столь же эффективно, как и трансфибулярный доступ для тибиоталарного сустава.При исключении медиального желоба не было существенной разницы между методами (83,94% против 90,85%, p = 0,1412).

    • Процент площади подготовленной поверхности от общей суставной поверхности (включая таранную и большеберцовую / малоберцовую кости), таранной кости, большеберцовой кости и малоберцовой кости с трансфибулярным доступом составил 76,9%, 77,7% и 75% соответственно. Процентные показатели составили 90,9%, 92,9% и 88,6% при использовании мини-открытого подхода.

    • Техника Mini-open может быть рассмотрена у пациентов с высоким риском осложнений и когда артроскопическая операция невозможна.

    Финансирование

    Автор (ы) не получил финансовой поддержки для исследования, авторства и / или публикации этой статьи.

    Соблюдение этических стандартов

    Конфликт интересов

    Никаких выгод в какой-либо форме не было получено и не будет получено от коммерческой стороны, прямо или косвенно связанной с предметом данной статьи.

    Утверждение этического стандарта

    Эта статья не содержит исследований с участием людей или животных, выполненных кем-либо из авторов.

    Информированное согласие

    Для этого типа исследования информированное согласие не требуется.

    Сноски

    Примечание издателя

    Springer Nature сохраняет нейтралитет в отношении юрисдикционных претензий на опубликованных картах и ​​филиалов организаций.

    Список литературы

    1. Гарехдаги М., Рахими Х., Мусавиан А. Передний артродез голеностопного сустава формованной пластиной: техника и результаты. Arch Bone Joint Surg. 2014; 2 (3): 203. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 2.Nihal A, Gellman RE, Embil JM, Trepman E. Артродез голеностопного сустава. Foot Ankle Surg. 2008; 14 (1): 1. DOI: 10.1016 / j.fas.2007.08.004. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Muscarella V, Sadri S, Pusateri J. Показания и рекомендации клиник артродезирования стопы и голеностопного сустава в ортопедии. Med Surg. 2012; 20:59. [PubMed] [Google Scholar] 4. Блюман Э.М., Чиодо С.П. Тибиотальный артродез. Сем Артро. 2010; 29 (1): 1–9. [Google Scholar] 5. Kim JG, Ha DJ, Gwak HC, Kim CW, Kim JH, Lee SJ и др. Артродез голеностопного сустава: сравнение переднего доступа и трансфибулярного доступа.CiOS Clin Ortho Surg. 2018; 10 (3): 368–373. DOI: 10.4055 / cios.2018.10.3.368. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Райкин С.М. Артродез голеностопного сустава: артроскопическая, мини-открытая и открытая техника. Стопа голеностопного сустава Clin. 2003; 8 (2): 347. DOI: 10.1016 / S1083-7515 (03) 00014-7. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Вроцлавский П., Джорджини Р., Япур К., Эммануэль Дж. Артродез голеностопного сустава с мини-артротомией: обзор девяти случаев. J Хирургия стопы и голеностопного сустава. 2006. 45 (6): 424–430. DOI: 10.1053 / j.jfas.2006.09.006. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Петерсон К.С., Ли М.С., Буддеке Д.Е. Артроскопический артродез по сравнению с открытым артродезом голеностопного сустава: ретроспективный анализ затрат. J Am Col Foot Ankle Surg. 2010. 49 (3): 242–247. DOI: 10.1053 / j.jfas.2010.02.019. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9. Хартиг С.М. Базовый анализ изображений и обработка изображений. J Curr Pro Mole Biol. 2013. 102 (1): 14–15. [Google Scholar] 10. Schindelin J, Arganda-Carreras I, Frize E, Kaynig V, Longair M, Pietzsch T. и др. Фиджи: платформа с открытым исходным кодом для анализа биологических изображений.Природные методы. 2012. 9 (7): 676–678. DOI: 10.1038 / nmeth.2019. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Абьяр Э., МакКиссак Х.М., Пинто М.С., Литтлфилд З.Л., Мораес Л.В., Стефани К. и др. Подготовка подтаранного сустава: что мы на самом деле делаем? Cadaver Study Foot Ankle Spec. 2019; 8: 1938640019846970. [PubMed] [Google Scholar] 12. Haddad SL, Coetzee JC, Estok R, Fahrbach K, Banel D, Nalysnyk L. Промежуточные и отдаленные результаты тотального эндопротезирования голеностопного сустава и артродеза голеностопного сустава: систематический обзор литературы.Журнал костной и суставной хирургии. 2007. 89 (9): 1899–1905. DOI: 10.2106 / 00004623-200709000-00002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Hess MC, Abyar E, McKissack HM, Strom S, Johnson MD. Применение трансфибулярного доступа к задней части стопы: систематический обзор и описание предпочтительной техники. Foot Ankle Surg. 2020; 1: 60–139. [PubMed] [Google Scholar] 14. Паремейн Г.Д., Миллер С.Д., Майерсон М.С. Артродез голеностопного сустава: результаты после миниартротомии. Foot Ankle Internat. 1996. 17 (5): 247–252.DOI: 10.1177 / 107110079601700502. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Чианг С.К., Цзэн Ю.Х., Джефф Линь С.Ф., Ван С.С., Лин С.К., Чанг М.С. Артроскопическая репозиция и минимально инвазивная хирургия при переломах голеностопного сустава с супинацией и внешней ротацией: сравнительное исследование с открытой репозицией. Arthro J Arthr Surg. 2019; 35 (9): 2671–2683. DOI: 10.1016 / j.arthro.2019.03.051. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Ахмад Дж., Райкин С.М. Минимально инвазивный артродез голеностопного сустава: минимально инвазивный. Surg Ortho. 2015; 11 (1): 1–8.[Google Scholar] 18. Colman AB, Pomeroy GC. Трансфибулярный артродез голеностопного сустава с жесткой внутренней фиксацией: оценка исхода. Foot Ankle Internat. 2007. 28 (3): 303–307. DOI: 10.3113 / FAI.2007.0303. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 19. Monroe MT, Beals TC, Manoli A. Клинические результаты артродеза голеностопного сустава с использованием жесткой внутренней фиксации губчатыми винтами. Foot Ankle Internat. 1999. 20 (4): 227–231. DOI: 10.1177 / 107110079